目的探討周圍神經體外預變性的新方法，以便在短期內獲得大量高效雪旺細胞，以期為組織工程神經構建提供大量種子細胞。 方法采用轉綠色熒光蛋白基因C57BL/6小鼠的骨髓源性細胞（bone marrow derived cells，BMDCs）與C57BL/6小鼠坐骨神經體外共培養，建立體外預變性模型的實驗組（A組），無BMDCs參與的單純坐骨神經體外培養為對照組（B組）。培養7 d后行大體觀察及免疫熒光染色觀察BMDCs能否在體外進入坐骨神經內參與預變性；將變性后的神經酶消化行雪旺細胞培養，通過細胞免疫熒光染色及流式細胞儀檢測各組細胞量及鑒定原代培養后的雪旺細胞純度，評價各組雪旺細胞增殖情況。 結果培養7 d后大體觀察示兩組坐骨神經斷端開始形成神經瘤樣結構，A組較B組明顯；免疫熒光染色示A組大量BMDCs浸潤至神經內部，其中部分細胞表達F4/80，為單核巨噬系統細胞。經細胞培養，A、B組獲得的雪旺細胞產量分別為（5.59 ± 0.19）× 104個/mg和（3.20 ± 0.21） × 104個/mg，差異有統計學意義（t=2.14，P=0.03）。細胞接種后48 h經p75NTR熒光染色鑒定示，兩組可見雙極或三極樣雪旺細胞，細胞核為藍色且較小，胞體為紅色；成纖維細胞呈扁平多角形，細胞核及核仁清晰，大而不透光，多位于雪旺細胞下且p75NTR染色為陰性。A組混雜的成纖維細胞較少，B組較多。A、B組雪旺細胞純度分別為88.4% ± 5.8%和76.1% ± 3.7%，差異有統計學意義（t=2.38，P=0.04）。經流式細胞儀定量分析A組雪旺細胞純度為89.6%，B組為74.9%。 結論BMDCs與周圍神經體外共培養是一種有效獲得大量雪旺細胞的方法，為組織工程神經構建中種子細胞的獲取提供了新方法。
目的 探討一種快速獲取高純度、高活性雪旺細胞的分離、培養方法，并從轉錄及翻譯水平對獲取細胞進行鑒定。方法 取4周齡SD大鼠雙側坐骨神經，膠原酶Ⅰ消化15 min后接種于培養瓶中，進行體外培養并按1∶2比例傳代，倒置相差顯微鏡觀察細胞生長狀態及形態變化，MTT法檢測細胞增殖情況并繪制生長曲線，RT-PCR檢測S100及膠原纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）基因表達情況，并行免疫組織化學染色觀察S100及GFAP蛋白表達水平，計算細胞純度。結果 膠原酶Ⅰ消化后組織塊培養24 h即可見成纖維樣細胞遷出，胞體細長，折光性較弱；48 h后可見大量細胞遷出，細胞多呈雙極或三極，突起細長，胞體飽滿，折光性強，72 h形成細胞集落。細胞傳代后48～72 h即可長滿瓶底，并出現螺旋形細胞集落，多次傳代后細胞仍生長旺盛，細胞質飽滿。MTT結果顯示，第3 代細胞第3天即進入對數生長期，隨時間延長逐漸增殖，第7天進入平臺期，生長曲線呈“S”形。RT-PCR結果示培養細胞表達S100、GFAP基因；免疫組織化學染色檢測顯示大部分細胞呈陽性染色，表達S100及GFAP蛋白，雪旺細胞純度為98.37% ± 0.30%。結論 單酶消化復合植塊法可以快速獲得高純度、高活性的大鼠雪旺細胞。
目的 周圍神經損傷是臨床常見疾病，評估物理治療對坐骨神經損傷后功能恢復的影響，為臨床治療提供一定參考。 方法 雌性Wistar 大鼠64 只，體重252 ～ 365 g，隨機分為A、B、C、D 4 組，每組16 只。各組分離右側坐骨神經后，B、C、D 組鉗夾坐骨神經造成損傷模型，A 組不進行鉗夾作為對照。術后第2 天，B 組未治療，C 組采用單純電刺激治療，D 組采用電刺激、分米波和紅外線綜合治療。分別于治療后0、7、14、30 d 行坐骨神經功能指數（sciatic nerve function index，SFI）、神經傳導速度（motor nerve conduction velocity，MNCV）檢測，并取材行組織形態學觀察和透射電鏡觀察，取治療后30 d 切片行軸突圖像分析。 結果 治療后0、7 d，B、C、D 組SFI 顯著高于A 組（P lt; 0.05），B、C、D 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）；治療后14、30 d，D 組SFI 顯著降低，30 d 時與A 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）， B、C 組SFI 有所降低，但與A 組比較差異仍有統計學意義（P lt; 0.05）。治療后0、7、14 d，B、C、D 組MNCV 顯著低于 A 組（P lt; 0.05），C、D 組與B 組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），14 d 時D 組高于C 組（P lt; 0.05）；治療后30 d，B、C 組仍顯著低于A 組（P lt; 0.05），但D 組與A 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。治療后0、7 d，透射電鏡觀察各組僅見膠原蛋白和脂質成分；治療后14、30 d，B、C、D 組可見大量雪旺細胞和再生神經纖維，D 組最顯著。治療30 d 時軸突圖像分析示，D 組有髓神經纖維數、軸突直徑及髓鞘厚度與A 組比較差異均無統計學意義（P lt; 0.05），有髓神經纖維數量和軸突直徑顯著高于B、C 組（P lt; 0.05），髓鞘厚度與C 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 物理治療有促進大鼠損傷周圍神經再生的作用。
目的 探討不同部位取材分離純化雪旺細胞（Schwann cells，SCs）的純度、活性以及數量差異，為神經缺損修復提供優質、足量種子細胞奠定理論基礎。 方法 6 只5 日齡SD 大鼠，雌雄不限，體重8 ～ 10 g；切取背根神經節（實驗組）和坐骨神經（對照組）。采用聯合酶消化加機械吹打法分離培養SCs，并進行純化及傳代培養。取第1 代SCs，用計數法繪制8 d 內SCs 生長曲線，MTT 法檢測8 d 內SCs 增殖情況，抗S-100 免疫細胞化學檢測SCs 純度，ELISA 法檢測腦源性神經營養因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）濃度。 結果 每只大鼠可切取背根神經節36 ～ 43 個。消化成單個細胞后計數，實驗組可獲取（7.5 ± 0.6）× 106 個SCs，對照組可獲取（3.5 ± 0.4）× 106 個SCs，差異有統計學意義（t=13.175,P=0.000）。兩組SCs 第3 天開始進入對數增長期，隨培養時間延長，細胞數及細胞增殖吸光度（A）值均呈上升趨勢；且培養3、4、5、6 d 時，實驗組細胞數及A 值明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。經S-100 免疫細胞化學檢測，實驗組SCs 純度為92.08% ± 3.45%，對照組為77.50% ± 3.57%，差異有統計學意義（t=6.869，P=0.001）。ELISA法檢測示實驗組培養3 d 和5 d 時BDNF 濃度均高于對照組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結 論 與坐骨神經相比，取材于背根神經節能獲得數量更多、純度和活性更高的SCs，為神經損傷修復創造了必要條件。
目的 觀察比較不同角度吻合對大鼠坐骨神經損傷再生的促進作用。 方法 健康成年雄性SD大鼠72 只，體重250 ～ 300 g，隨機分為A、B、C、D 4 組（n=18）。A、B、C、D 組分別以30、45、60、90° 切斷大鼠右側坐骨神經中段并吻合。術后1 、2 、3 個月，分別行大體觀察、腓腸肌濕重恢復率測量、神經電生理檢查及組織學觀測。 結果 術 后 3 個月，腓腸肌濕重恢復率、坐骨神經運動傳導速度和復合動作電位波幅、軸突直徑、髓鞘厚度以及有髓神經纖維計數，A、B 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），但均明顯優于C、D 組，差異有統計學意義（P lt; 0.01）；C、D組間各指標 比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 小角度端端吻合修復神經有利于神經再生，30 ～ 45° 吻合神經再生效果最佳。
目的 探討枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharide，LBP）對大鼠坐骨神經離斷后創傷性神經瘤形成及其疼痛的影響。 方法 健康SD 大鼠40 只，雌雄各半，體重200 ～ 220 g，隨機分為LBP 組與對照組（n=20）。實驗動物制備右側坐骨神經離斷（2 cm）模型，術后1 d LBP 組腹腔注射LBP 10 mg/（kg·d），對照組腹腔注射等量生理鹽水，共注射28 d。術后觀察趾甲及趾缺失情況，計數大鼠患肢自噬評分；術后28 d，取坐骨神經離斷近端0.5 cm，光鏡及透射電鏡觀察坐骨神經離斷后創傷性神經瘤形成情況。 結果 術后4 周，LBP 組5 只發生自噬現象，發生率25%；對照組12 只發生自噬現象，發生率60%；兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。光鏡下見LBP 組8 只形成神經瘤，發生率40%；對照組16 只形成神經瘤，發生率80%；差異有統計學意義（P lt; 0.05）。光鏡觀察示對照組神經瘤內細胞雜亂生長，有肌纖維細胞侵潤，部分神經瘤可見軸索及神經鞘細胞增生，形成小片狀或條索狀結構；LBP 組神經纖維增生較少，神經纖維排列較整齊。透射電鏡觀察示對照組神經瘤部軸突分布多，紡錘狀的成纖維細胞增多，可見較多膠原纖維，髓鞘增生潰變；而LBP 組神經離斷近端髓鞘較少，雪旺細胞及成纖維細胞較少，膠原纖維稀疏。 結論 LBP 對大鼠坐骨神經離斷后自噬現象和創傷性神經瘤的形成有抑制作用。
目的 比較嗅黏膜膠質細胞、嗅球神經層（olfactory globular nerve layer，OGNL）膠質細胞及SC 修復周圍神經缺損的能力，并優選出最適宜移植治療周圍神經缺損的膠質細胞。 方法 取20 只2 ～ 3 月齡雌性Wistar 大鼠，體外培養嗅黏膜膠質細胞、OGNL 膠質細胞及SC，調整濃度為1 × 106 個/mL 純化濃縮備用。另將80 只成年雌性Wistar鼠，切除坐骨神經25 mm 軸突，保留神經外膜吻合于近端，制備神經缺損模型。將動物隨機分成A、B、C、D 4 組，每組20只，于神經外膜腔內分別植入10 μL DMEM/F12 培養液、SC、OGNL 膠質細胞以及嗅黏膜膠質細胞。術后3 個月，采用踝關節功能評分評估神經缺損的修復效果；行大體、光鏡、透射電鏡觀察神經再生情況；熒光顯微鏡下觀察逆行標記熒光紅的運輸距離，免疫熒光檢測膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及神經生長因子（nerve growth factor，NGF）濃度；ELISA 法檢測髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）及神經絲蛋白（neurofilament，NF）濃度。 結 果 踝關節功能評分：A、B、C、D 組分別為（3.325 ± 0.963）、（4.200 ± 1.005）、（5.143 ± 0.635）和（5.950 ± 0.154）分，組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。大體、光鏡及透射電鏡觀察示，D 組神經缺損再生最完全，C 組次之，B 組較差，A 組最差。熒光紅在神經中運行距離，D 組最長，C 組次之，B 組較短，A 組最短；NGF 及GFAP 濃度，D 組最高，C 組次之，B 組較差，A組最低。A、B、C、D組MBP 濃度分別為（9.817 ± 3.267）、（12.347 ± 3.091）、（14.937 ± 2.075）和（22.757 ± 0.871） ng/ mL，A、B 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05），其余各組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05） ；NF 濃度分別為（13.869 ± 5.677）、（18.498 ± 3.889）、（23.443 ± 2.260）、（27.610 ± 1.125）ng/mL，組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 嗅黏膜膠質細胞、OGNL 膠質細胞、SC 均能促進坐骨神經缺損再生，嗅覺系統膠質細胞促進神經再生效果優于SC，而嗅黏膜膠質細胞促進神經再生能力優于OGNL 膠質細胞。
目的 探討外源性促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）對失神經骨骼肌萎縮的影響。 方法 取雄性SD 大鼠24 只，體重200 ～ 220 g，于右側梨狀肌下緣切斷坐骨神經，制備小腿三頭肌失神經支配模型。模型制備后隨機分為兩組（n=12），EPO 組：術后每天右小腿腓腸肌注射rhEPO（2 500 U/kg）；對照組：注射等體積生理鹽水。術后觀察動物一般情況，于第2、4 周檢測肌濕重、肌肉蛋白含量，行HE及TUNEL染色，測量肌細胞直徑、橫切面積及細胞凋亡率，并測定肌肉Na+-K+-ATP 酶和Ca2+-ATP 酶活性。 結果 術后兩組動物右后肢均拖膝行走，切口無感染，動物均存活至實驗完成，4 周時對照組5 只及EPO組2 只大鼠發生足跟潰瘍。術后2、4 周EPO組肌濕重分別為（885.59 ± 112.35）、（697.62 ±94.74） g，均明顯重于對照組（760.63 ± 109.05）、（458.71 ± 58.76） g （P lt; 0.01） ；肌肉蛋白含量分別為（77.37 ± 5.24）、（66.37 ± 4.87）mg/mL，明顯高于對照組（65.39 ± 4.97）、（54.62 ± 6.32）mg/mL（P lt; 0.01）。術后2、4 周EPO 組肌纖維形態基本正常；對照組肌纖維萎縮變細，部分斷裂，肌束間結締組織增生較明顯；EPO 組肌細胞直徑和橫切面積明顯大于對照組（P lt; 0.01）。術后2、4 周，EPO 組骨骼肌細胞凋亡數明顯少于對照組，EPO 組腓腸肌細胞凋亡率分別為11.80% ±1.74%、28.47% ± 1.81%，明顯低于對照組21.48% ± 2.21%、55.89% ± 2.88%（P lt; 0.01）。術后2、4 周EPO 組Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP 酶活性均高于對照組（P lt; 0.01）。 結論 EPO 具有明顯延緩大鼠失神經骨骼肌萎縮的作用。
目的 探討不同濃度川芎嗪（tetramethylpyrazine，TMP）對玻璃化保存的大鼠異體坐骨神經再生的影響。 方法 取3 月齡雄性清潔級成年健康SD 大鼠48 只，體重200 ～ 250 g，作為供體；3 月齡雄性清潔級成年Wistar大鼠96 只，體重200 ～ 250 g，作為受體。取供體動物，切取雙側坐骨神經，制成15 mm 神經段，按玻璃化保存液中TMP濃度不同隨機分為A、B、C、D 組，A 組不含TMP，作為對照，B、C、D 組玻璃化液中分別含100、200、400 mg/L TMP，作為實驗組。— 196℃液氮保存3 周。取受體動物，制備右側坐骨神經10 mm 缺損模型，隨機分為4 組（n=24）。取上述保存神經段復溫后移植至相應組的受體。術后4、8、12 周行大體觀察，術后16 周取移植神經行透射電鏡、電生理、軸突圖像分析等檢查。 結果 術后大鼠均存活至實驗完成。術后4 周A、B 組移植神經與周圍組織粘連最嚴重；術后8 周A 組粘連最嚴重，其余各組逐漸減輕；術后12 周A 組仍有粘連，B 組與周圍組織部分粘連，C、D 組無粘連。術后16 周，A、B 組再生神經遠端肌肉復合動作電位潛伏期及波幅、運動神經傳導速度、單位面積髓鞘數、平均灰度值、單位面積髓鞘密度值及運動終板檢測，均顯著低于C、D 組（P lt; 0.01），A、B 組間及C、D 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。透射電鏡示C、D組有髓神經纖維粗，髓鞘較A、B 組厚，板層結構清晰。 結論 坐骨神經玻璃化保存液中加入200 mg/L TMP 可改善大鼠異體神經再生效果。
目的 觀察坐骨神經局部反復（慢性）注射阿米替林和布比卡因對慢性坐骨神經結扎損傷（chronic constriction injury，CCI）大鼠機械和熱痛閾的影響，及神經組織病理學的改變，探討其對外周抗痛覺過敏作用及神經組織的影響。 方法 健康成年雄性SD 大鼠24 只，體重（200 ± 20）g，按照Bennett 等的方法制備CCI 模型，5 d 后隨機分為3 組（n=8）： 阿米替林組（A 組）、布比卡因組（B 組）、生理鹽水組（C 組）。模型制備后5、7、9 d 分別經留置導管給予0.5 mL的0.5% 阿米替林、0.5% 布比卡因及生理鹽水。觀察大鼠一般情況，根據Hwang 等標準行運動功能評分；于注藥前及第3 次注藥后1、3、5、7 d 測定機械刺激縮足反射閾值（mechanical withdrawal threshold，MWT）和熱縮腿反射潛伏期（thermalwithdrawal latency，TWL）。于模型制備后16 d 取坐骨神經標本，行大體觀察及組織學觀察，采用Estebe 評分方法行組織學評分。 結果 大鼠均存活至行為學實驗觀察完成。A、B 組大鼠于每次注藥后均出現不同程度運動障礙，A 組在8 h內、B 組在2 h 內運動功能評分與C 組和注藥前比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；但第3 次注藥A 組在8 h 后、B 組在2 h 后大鼠運動功能均完全恢復。A 組第3 次注藥完成后1、3 d 的MWT 和TWL 較注藥前及注藥后5、7 d 顯著升高，也較1、3 d 的B、C 組顯著升高，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；B 組各時間點MWT 和TWL 與注藥前及C 組比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。3 組大鼠坐骨神經光鏡下組織學觀察可見神經外膜、神經束膜完整，軸索排列大致整齊，無明顯脫髓鞘改變，少量炎性細胞浸潤，各組坐骨神經組織學評分均為1 分，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 坐骨神經局部反復（慢性）注射0.5% 阿米替林對神經病理性疼痛大鼠具有外周抗痛覺過敏的作用，其作用具有累加效應，且未見坐骨神經發生明顯病理學改變。