目的 構建三維預血管化微組織，探索三維共培養體系中人成纖維細胞（human fibroblasts，HFs）對人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）出芽和遷移的促進作用。方法 取HUVECs和HFs培養傳代至3～5代進行實驗。在二維共培養體系中，將HFs行PKH26染色且固定細胞密度后，與HUVECs以不同比例（1∶4、1∶1、4∶1）以及不同接種方式（兩種細胞間隔48 h順序接種、直接混合接種）共培養，熒光顯微鏡下觀察血管網絡形成情況。構建三維共培養體系，通過慢病毒轉染分別用綠色和紅色熒光蛋白標記HUVECs和HFs，將標記細胞接種于多孔微載體上，采用轉瓶動態培養，分別制備HF微組織、HUVEC微組織、HF-EC微組織和HF&EC微組織；低滲結晶紫染色法觀測微組織中細胞生長情況。將各微組織包埋于纖維蛋白凝膠中，激光共聚焦顯微鏡下觀察HF微組織和HUVEC微組織中細胞生長貼附情況，4種微組織出芽情況以及HF-EC微組織、HF&EC微組織芽體細胞組成、出芽數量及芽體長度。制備HFs條件培養基，觀察其對HUVEC微組織出芽的影響，以正常培養基培養作為對照。結果 二維共培養時HFs預培養有助于血管網狀結構形成與穩定，且當兩種細胞比例為1∶1時效果最佳。三維共培養時各微組織上細胞生長良好，HUVEC微組織無出芽，HF微組織、HF-EC微組織、HF&EC微組織均能出芽，具備良好血管化能力。HF-EC微組織芽體長度及出芽數目均優于HF&EC微組織（P<0.05）。共培養微組織中HF微組織先于HUVEC微組織出芽，兩者出芽軌跡一致，芽體由HFs和HUVECs組成。在HFs條件培養基中，HUVEC微組織也能出芽。結論 在轉瓶中按1∶1比例順序接種HFs和HUVECs可制備HF-HUVEC預血管化微組織，且在三維共培養中HFs能夠引導和促進HUVECs出芽及遷移。