目的探討大鼠急性脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后局部血管重構與炎癥反應的相關關系，評估不同程度 SCI 的組織學改變。方法成年雌性 SD 大鼠 116 只，隨機分為 4 組（n=29）。假手術組僅切除椎板暴露脊髓，不進行撞擊；輕、中、重度損傷組以標準化的 MASCIS 脊髓撞擊器，分別以 12.5、25.0、50.0 mm 高度撞擊脊髓，建立急性 SCI 模型。造模后 12、24 h 及 3、7、28 d 取材，行 RECA1 和 CD68 免疫熒光雙染色并定量分析陽性面積比，統計分析大鼠內皮細胞抗原 1（rat endothelial cell antigen 1，RECA1）和 CD68 表達相關性；術后 28 d 免疫熒光雙染色定性分析神經微絲（neurofilament-H，NF-H）和膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表達情況。造模后 12、24 h 及 3 d ELISA 檢測脊髓 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 水平，并統計分析與微血管密度（RECA1）的相關性；12、24 h 及 3、7、28 d 行 HE 染色以及 28 d 行尼氏體染色，評估組織結構及神經元破壞。結果免疫熒光染色顯示，RECA1 陽性面積比中度損傷組最大，之后依次為輕度損傷組、重度損傷組，假手術組最小；組間比較差異均有統計學意義（P<0.05）。CD68 陽性面積比重度損傷組最高，之后依次為中度損傷組、輕度損傷組，假手術組最低；除 24 h、28 d 輕度損傷組和中度損傷組比較差異無統計學意義（P>0.05）外，其余各組間比較差異均有統計學意義（P<0.05）。各時間點假手術組 SCI 相應區域 RECA1 和 CD68 表達無相關（P>0.05）。SCI 后 12、24 h，輕、中度損傷組內 RECA1 和 CD68 表達成正相關（P<0.05），重度損傷組二者無相關（P>0.05）。3 d 時輕、中、重度損傷組以及 7 d 時重度損傷組 RECA1 和 CD68 表達均無相關（P>0.05）；7 d 時輕、中度損傷組及 28 d 時輕、中、重度損傷組均成負相關（P<0.05）。隨著損傷程度的加重，輕、中、重度損傷組軸突連續性中斷逐漸加重、短縮甚至融合成團且數量逐漸減少；膠質細胞數量減少，形態漸不規則且膠質瘢痕致密。 ELISA 檢測顯示，假手術組各時間點 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 水平均低于其他 3 組（P<0.05）；除 12 h 時輕、中度損傷組 IL-1β 水平差異無統計學意義（P>0.05）外，其余各時間點各組炎癥因子水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。3 種炎癥因子與 SCI 區域微血管密度相關（P<0.05）。組織學觀察顯示，SCI 后脊髓組織的破壞與損傷程度相關，重度損傷組組織腫脹、出血及大量炎癥細胞浸潤，至后期空洞形成，灰、白質界限完全消失，正常神經元結構幾乎不可見。結論輕、中度 SCI 后，急性期微血管密度與炎癥反應均隨損傷程度加大而增加。隨著時間推移，遠期不同程度 SCI 區域微血管密度與炎癥反應均成負相關；SCI 損傷程度越高，炎癥反應越明顯，組織破壞越嚴重。
目的探討促分裂原和應激激活的蛋白激酶 1（mitogen- and stress-activated protein kinase 1，MSK1）在大鼠脊髓損傷后的表達變化及對脊髓損傷的修復作用。方法雄性 SD 大鼠 120 只（體質量 220～250 g），取其中 70 只隨機分為假手術組和脊髓損傷組（n=35），脊髓損傷組按照 Allen 法制作大鼠脊髓損傷模型，假手術組僅打開椎板不損傷脊髓；造模后 8、12 h 及 1、2、3、5、7 d 取材（n=5）行 Western blot 檢測 MSK1 及增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白表達變化。另取 20 只 SD 大鼠同上法分組（n=10），于脊髓 T10 水平背側深約 0.8 mm 處注射陰性對照慢病毒 LV3NC 稀釋液，倒置熒光顯微鏡下觀察 1、3、5、7、14 d 的轉染效果，確定病毒最佳轉染時間。將剩余 30 只 SD 大鼠隨機分為單純脊髓損傷組（A 組）、脊髓損傷后轉染陰性對照慢病毒 LV3NC 組（B 組）和脊髓損傷后轉染 MSK1 小干擾 RNA（small interfering RNA，siRNA）組（C 組），每組 10 只。于術后 1、3、5、7、14 d 行大鼠后肢功能 BBB 評分；于病毒最佳轉染時間點取材行 Western blot 檢測脊髓組織中 MSK1 及 PCNA 蛋白表達變化，并采用免疫熒光染色檢測 MSK1 及 PCNA 在脊髓中的定位表達。結果Western blot 檢測示假手術組各時間點脊髓組織中的 MSK1 及 PCNA 蛋白表達無明顯變化。脊髓損傷組 MSK1 蛋白表達于傷后 8 h 開始逐漸下降，至傷后 3 d 降至最低，而后逐漸上升；PCNA 蛋白表達與 MSK1 表達趨勢相反。脊髓損傷組傷后 1、2、3、5 d MSK1 蛋白表達量顯著低于假手術組，傷后 8 h 及 1、2、3、5、7 d PCNA 蛋白表達量顯著高于假手術組，差異均有統計學意義（P<0.05）。脊髓損傷組及假手術組大鼠脊髓組織在慢病毒轉染后各時間點均有較強的熒光表達，轉染 7 d 內熒光強度與時間成正相關，7 d 時達高峰。隨術后時間延長，A、B、C 組 BBB 評分均呈逐漸上升趨勢，術后 5、7、14 d C 組 BBB 評分顯著低于 A、B 組（P<0.05）。慢病毒轉染 7 d 后，Western blot 檢測示 C 組 MSK1 蛋白表達量顯著低于 A、B 組，PCNA 蛋白表達量顯著高于 A、B 組，差異均有統計學意義（P<0.05）。免疫熒光染色顯示 MSK1 在脊髓表達并存在于細胞核中，并與綠色熒光蛋白、神經元核抗原及神經膠質酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）共定位。免疫熒光染色示，C 組 MSK1 陽性細胞相對表達面積顯著高于 B 組，PCNA、GFAP 陽性細胞相對表達面積顯著低于 B 組，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論慢病毒介導 MSK1 siRNA 轉染大鼠脊髓組織，能夠有效沉默 MSK1 的表達，MSK1 可能通過調控神經膠質細胞的增殖，在大鼠脊髓損傷修復中發揮一定作用。