目的通過對半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）大、小亞基的重組，構建pcDNA3.1(+)/rCaspase3真核表達質粒,并探討rCaspase3基因誘導細胞凋亡的可能性，以尋求腫瘤基因治療的新途徑。方法采用分子生物學方法克隆Caspase3的大、小亞基，并在體外進行重新排列組合，使大、小亞基原來的排序顛倒，構建出pcDNA3.1(+)/rCaspase3真核表達質粒； 脂質體瞬時轉染人胰腺癌細胞PCⅡ,RTPCR檢測rCaspase3 mRNA的表達； 流式細胞技術（FCM）檢測轉染胰腺癌細胞凋亡狀況。結果Caspase3的大、小亞基被完整克隆，pcDNA3.1(+)/rCaspase3真核表達質粒測序結果證實小亞基位于大亞基之前； RTPCR擴增出894 bp大小片段，流式細胞檢測可見明顯的凋亡峰出現。結論構建的rCaspase3其mRNA可在胰腺癌細胞中表達并自催化誘導細胞凋亡，可作為胰腺癌基因治療的目的基因。
目的 探討非小細胞肺癌( NSCLC) 患者血清中半胱氨酸蛋白酶抑制劑C( Cys C) 的水平及其在腫瘤發生發展過程中的意義。方法 采用酶聯免疫吸附法( ELISA) 測定102 例NSCLC 患者、60 例良性肺部疾病患者和90 例健康體檢者血清Cys C 水平, 并進行比較分析。結果 肺癌患者血清Cys C 的水平明顯高于良性肺疾病組和健康對照組[ ( 1.47 ±0.78) mg/L 比( 1.04 ±0.51) mg/L 和( 1.06 ±0.36) mg/L, Plt;0.01] 。隨著腫瘤的發展, 患者血清Cys C 的含量逐漸上升, 無淋巴結轉移低于有淋巴結轉移[ ( 1.06 ±0.39) mg/L 比( 1.83 ±0.97) mg/L, Plt;0.05] , TNM分期Ⅰ～Ⅱ期低于Ⅲ～Ⅳ期[ ( 1.38 ±0.88) mg/L比( 1.57 ±0.79) mg/L,Plt;0.05] 。中高分化肺癌血清Cys C 的含量高于低分化肺癌[ ( 1.63 ±0.73) mg/L 比( 1.26 ±0.48) mg/L, Plt;0. 05] 。肺癌患者血清Cys C 水平與性別、年齡及肺癌組織學類型無關。結論 血清Cys C含量在肺癌患者中明顯增高, 并與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移及惡性程度相關, 提示血清Cys C水平的變化在肺癌的發生發展過程中起重要作用。
檢測人腰椎間盤組織中的細胞密度、細胞凋亡率以及Bax 和半胱氨酸蛋白酶蛋白3（Caspase-3）的表達，為深入了解人腰椎間盤退變的機制提供實驗依據，并為將來通過生物學方法延緩腰椎間盤退變提供新的思路。 方法 實驗組30 個椎間盤標本（L2 ～ S1）來自27 例行后路腰椎間盤切除椎間融合手術自愿捐贈的患者，男18 例，女9 例；年齡30 ～ 72 歲，平均51.09 歲。所有病變節段均經MRI 證實，患者術前均未接受椎間盤造影、膠原酶髓核溶解或椎間盤激光汽化術。對照組20 個標本（L2 ～ S1）來自5 例青年男性意外死亡者新鮮尸檢腰椎間盤；年齡24 ～ 37 歲，平均30.83 歲。采用HE 染色觀察凋亡軟骨細胞、凋亡小體和細胞密度，TUNEL 染色法檢測人腰椎間盤中的凋亡細胞率，用SP 免疫組織化學法檢測Bax 及Caspase-3 表達，圖像分析Bax 及Caspase-3 的平均灰度值。 結果 HE 染色示對照組、實驗組軟骨終板和髓核內的平均細胞密度分別為（17.16 ± 1.22）、（12.41 ± 0.95）個/HP，二者差異有統計學意義（P lt;0.01）。TUNEL染色觀察示對照組的軟骨終板與髓核內的平均凋亡細胞率為6.97% ± 0.92%，低于實驗組的12.59% ± 0.95%（P lt; 0.01）。SP 免疫組織化學染色示對照組髓核內Bax 、Caspase-3 染色陽性細胞率分別為11.02% ± 1.18% 和9.01% ±1.00%，均低于實驗組的19.29% ± 1.18% 和15.07% ± 0.97%，差異均有統計學意義（P lt; 0.01）。對照組腰椎間盤髓核內Bax、Caspase-3 的平均灰度值分別為187.33 ± 7.88 和185.68 ± 3.26，實驗組分別為124.98 ± 6.69 和160.13 ± 4.37，兩組間比較差異有統計學意義（P lt; 0.01）。將全部腰椎間盤標本進行Pearson 相關分析，對照組和實驗組腰椎間盤凋亡細胞率與細胞密度間成負相關，相關系數r 分別為－ 0.88 和－ 0.93（P lt; 0.01）；兩組髓核內Bax、Caspase-3 陽性細胞率與凋亡細胞率之間成正相關，相關系數r 分別為 0.83 和 0.91（P lt; 0.01）。 結論 細胞密度下降參與了人腰椎間盤的退變過程，Bax和Caspase-3 的表達上調在人腰椎間盤髓核細胞的凋亡過程中有一定作用。
目的 構建肝細胞肝癌特異性表達反向半胱氨酸蛋白酶3（r-Caspase-3）重組腺病毒，為肝細胞肝癌的基因治療提供新策略。方法 構建甲胎蛋白（AFP）增強子和白蛋白 (ALB) 啟動子腺病毒載體（pAdTrack-EAFP-PALB），然后將目的基因r-Caspase-3亞克隆到載體pAdTrack-EAFP-PALB上， 獲得重組腺病毒穿梭載體pAdTrack-EAFP-PALB /r-Caspase-3, 經PmeⅠ酶切線性化后與pAdEasy-1同源重組，獲得重組腺病毒骨架pAdEasy-EAFP-PALB /r-Caspase-3； 鑒定正確的pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 經PacⅠ酶切線性化后脂質體轉染AD293 細胞進行包裝、擴增，獲得病毒。綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)監測病毒滴度和感染效率； RT-PCR和Western blot 法檢測r-Caspase-3在HepG2細胞中的表達； SRB染色法評估重組腺病毒對HepG2細胞的抑制作用，初步觀察HepG2細胞凋亡狀況。結果 穿梭載體pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3酶切、測序正確。穿梭載體、pAdEasy-1載體同源重組后PCR 及PacⅠ酶切鑒定結果表明pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 重組成功； 經PacⅠ酶切線性化后，pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 轉染AD293 細胞即可觀察到GFP 的表達； 回收病毒可重復感染AD293 細胞，RT-PCR和Western blot 均可檢測到r-Caspase-3的表達，證實Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3病毒顆粒包裝成功； SRB染色檢測發現Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3具有凋亡誘導特異性。結論 靶向性Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3重組腺病毒構建成功，并具有凋亡誘導靶向性，為進一步研究靶向性r-Caspase-3基因治療肝細胞肝癌及其生物學功能奠定了基礎。
目的通過觀察華蟾酥毒基對人骨肉瘤細胞U-2OS凋亡的影響，探討其誘導細胞凋亡的可能機制。 方法以人骨肉瘤細胞株U-2OS作為實驗細胞，MTT法檢測采用10、20、50、100、200、400 nmol/L華蟾酥毒基培養24、48、72 h后細胞增殖情況，以單純U-2OS細胞作為對照組；流式細胞儀檢測分別采用100 nmol/L華蟾酥毒基（實驗組）及100 nmol/L華蟾酥毒基聯合泛半胱氨酸蛋白酶（Caspase）抑制劑Z-VAD-FMK（對照組）培養48 h后細胞凋亡情況，以單純U-2OS細胞作為空白對照組；用Caspase-3活性檢測試劑盒檢測20、50、100 nmol/L華蟾酥毒基培養48 h后對細胞Caspase-3活性的影響，以單純U-2OS細胞作為對照組；Western blot法檢測20、50、100 nmol/L華蟾酥毒基培養48 h后對細胞凋亡通路相關蛋白（cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax）表達的影響，以單純U-2OS細胞作為對照組。 結果MTT法檢測示，同一時間點細胞存活率隨華蟾酥毒基濃度增加而顯著降低，同一濃度組細胞存活率隨時間延長亦顯著下降，比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。流式細胞儀檢測顯示，實驗組細胞凋亡率為46.87%±11.23%，顯著高于對照組的2.34%±0.98%及空白對照組的1.04%±0.25%（P＜0.05）。20、50、100 nmol/L組Caspase-3活性分別為1.14±0.32、1.31±0.41、1.92±0.54，與對照組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；100 nmol/L組與20、50 nmol/L組比較，差異亦有統計學意義（P＜0.05）。Western blot檢測結果顯示，與對照組相比，各濃度組促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax均顯著上調，抗凋亡蛋白Bcl-2下調，Bax/Bcl-2提高，差異均有統計學意義（P＜0.05）；各濃度組隨濃度增加也呈相同變化趨勢，比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。 結論華蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤細胞U-2OS的增殖，促使細胞凋亡；其作用機制可能與線粒體介導的凋亡途徑有關。
盡管目前為止的研究已經對急性腎損傷（acute kidney injure，AKI）的發病機制及治療策略有了一定的探索，但 AKI 的死亡率仍居高不下，仍然是重癥醫療單元中重要的死亡因素之一。早期甄別 AKI 患者，有助于展開更積極的治療，改善患者的預后。血清肌酐水平作為診斷腎臟損傷的金標準，在早期 AKI 的診斷中敏感性和特異性都不能滿足目前臨床工作的需要。因此，在過去的幾十年中，科研工作者們致力于發現和驗證新的 AKI 標志物，包括中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白、白細胞介素-18、腎臟損傷分子-1、半胱氨酸蛋白酶抑制物 C 等，研究表明這些生物標志物可能是 AKI 發展和預后的可靠預測因子，對 AKI 的早期診斷和臨床監測也具有重要的意義。該文將針對近年來這些新生 AKI 預后預測因子的主要研究及成果進行綜述總結，評價其在早期診斷和臨床預后預測中的作用和局限性，以期對臨床及進一步的科研工作有所幫助。
目的建立樂伐替尼肝細胞肝癌（簡稱“肝癌”）細胞耐藥模型，以研究雙硫侖聯合銅離子對樂伐替尼耐藥細胞 Huh7 增殖和凋亡的影響。方法通過 CCK8 法檢測樂伐替尼作用下 Huh7 細胞的半抑制濃度（IC50），采用濃度遞增法誘導 Huh7 細胞樂伐替尼耐藥。各組細胞處理：對照組為 Huh7 細胞加普通培養液培養后的細胞；敏感組為 Huh7 細胞加 10 μmol/L 樂伐替尼培養后的細胞；耐藥組為耐藥 Huh7 細胞加 10 μmol/L 樂伐替尼培養后的細胞；聯合組為耐藥 Huh7 細胞加 10 μmol/L 樂伐替尼+1 μmol/L 雙硫侖+0.5 μmol/L 銅離子培養后的細胞；抑制劑組為耐藥 Huh7 細胞加 10 μmol/L 樂伐替尼+10 μmol/L Akt 抑制劑 MK2206 培養后的細胞。CCK8 法及流式細胞術分別檢測細胞的存活率和凋亡率；Western blot 法檢測磷酸化-Akt（p-Akt）和半胱氨酸蛋白酶 9（caspase-9）和 B 淋巴細胞瘤 2（Bcl-2）蛋白表達；Transwell 法檢測細胞侵襲性。結果樂伐替尼耐藥細胞系成功建立，選取 10、20、40、60、80 及 160 μmol/L 6 個樂伐替尼濃度對 Huh7 細胞作用 48 h 后計算得出細胞 IC50 為 12.35 μmol/L。耐藥組細胞存活率明顯高于敏感組（P<0.01），聯合組細胞存活率明顯低于耐藥組（P<0.01），抑制劑組細胞存活率明顯低于耐藥組（P<0.05）。與耐藥組比較，聯合組及抑制劑組 p-Akt 蛋白表達明顯降低（P<0.01）、caspase-9 明顯升高（P<0.01），而 Bcl-2 蛋白在耐藥組和聯合組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。聯合組細胞凋亡率明顯高于耐藥組（P<0.01）。Transwell 結果顯示聯合組的腫瘤細胞侵襲數明顯少于耐藥組（P<0.01）。結論雙硫侖聯合銅離子能增加樂伐替尼對樂伐替尼耐藥肝癌細胞 Huh7 的敏感性，同耐藥組相比其細胞抑制率明顯提高，其機制可能與抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt 通路及促進 caspase-9 蛋白表達有關。