目的明確音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)在毛囊干細胞(hair follicle stem cells,HFSCs)傳代過程中的表達水平,分析過表達Shh對HFSCs增殖活性的影響,探究過表達Shh后HFSCs的存活情況及其對毛囊再生的影響。 方法取20例40~50歲女性脫發患者捐贈的頭皮正常區(H1組)和脫發區(H2組)毛發,顯微鏡下剪取毛囊中間部分培養,獲取原代HFSCs并傳代;流式細胞術鑒定第4代HFSCs表面陽性標志物(CD29、CD71)和陰性標志物(CD34)。過表達Shh慢病毒轉染兩組HFSCs,并分別用流式細胞術和細胞計數試劑盒8法測定轉染前后的細胞周期和增殖活性。然后將Shh慢病毒轉染后的HFSCs移植至裸鼠背部皮下作為實驗組,以注射等量生理鹽水作為對照組,5周后采用Western blot法檢測裸鼠背部皮膚組織內Shh蛋白表達情況,HE染色和免疫熒光染色分別比較各組毛囊數量及HFSCs存活情況。 結果 分離培養的細胞呈長梭形,貼壁較牢;流式細胞術檢測示CD29和CD71在細胞表面呈高表達,CD34呈低表達;提示培養細胞為HFSCs。實時熒光定量PCR和Western blot檢測示,H1組和H2組第4、7、10代細胞中Shh蛋白和基因表達水平隨體外培養時間延長而逐漸下降。過表達Shh后兩組HFSCs增殖活性均顯著高于空白組(未轉染慢病毒)和陰性對照組(轉染陰性對照慢病毒),且H1組HFSCs轉染前后增殖活性均顯著高于H2組,差異均有統計學意義(P<0.05)。裸鼠細胞移植5周后,各實驗組背部皮膚內Shh蛋白穩定表達;各實驗組毛囊數量和HFSCs標記物(CD71、細胞角蛋白15)表達水平均顯著多于對照組,且實驗組中的H1組毛囊數量和HFSCs標記物表達水平均顯著多于H2組,差異均有統計學意義(P<0.05)。 結論慢病毒介導的Shh可成功轉染人HFSCs,過表達Shh后HFSCs增殖活性顯著升高,能持續穩定地分泌和表達Shh,并結合干細胞和Shh的優勢共同促進毛囊再生。