目的 探討重組質粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165 體外轉染對hBMSCs 成骨誘導分化的影響。 方 法 構建hBMP-2 和hVEGF165 真核共表達載體。取健康成人自愿捐獻的骨髓分離培養hBMSCs,采用陽離子脂質體將構建的質粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165、pIRES-hBMP-2、pIRES-hVEGF165 和空質粒載體(pIRES-neo)轉染至hBMSCs,作為A、B、C、D 組;另取相同數量的未轉染細胞作為對照組(E 組)。培養4 周,采用RT-PCR 檢測hBMP-2、hVEGF165 以及骨鈣mRNA 表達,Western blot 檢測細胞 hBMP-2 和 hVEGF165 表達,定量檢測ALP 活性,免疫組織化學方法檢測Col Ⅰ表達。 結 果 與E 組比較,A 組hBMSCs 高表達hBMP-2、hVEGF165、Col Ⅰ及骨鈣素,B 組大量表達骨鈣素及Col Ⅰ,C組高表達hVEGF165,而B 組hVEGF165 及C 組hBMP-2 和Col Ⅰ的表達與D、E 組相似,呈陰性或僅有痕量表達。A、B、C、D 及E 組ALP 活性分別為0.91 ± 0.03、0.90 ± 0.02、0.64 ± 0.03、0.67 ± 0.01、0.66 ± 0.02,A、B 組與E 組比較差異有統計學意義(P lt; 0.05),C、D、E 組差異無統計學意義(P gt; 0.05)。 結論 重組質粒通過陽離子脂質體能成功轉染hBMSCs,外源性hBMP-2 和 hVEGF165 基因在轉染細胞中能持續表達,并能增強hBMSCs 的成骨能力。
目的 觀察持續彈性外牽引對小型豬乳頭及其支撐組織膠原含量的影響,探討該技術矯正乳頭內陷的作用機制。 方法 取3 月齡雌性小型豬3 只,體重18.5 ~ 22.0 kg,每只均有12 個乳頭。實驗分為兩組:每只豬取4 個乳頭不作處理,作為對照組,共12 個乳頭;其余8 個乳頭行持續彈性外牽引,作為實驗組,共24 個乳頭。于牽引后2、4、8、12 周取乳頭及其支撐組織行HE 染色觀察內部組織結構的變化;飽和苦味酸天狼猩紅染色觀察組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原分布及含量變化,結合圖像分析軟件進行定量分析。 結果 HE 及飽和苦味酸天狼猩紅染色觀察示:對照組各時間點結構均正常;隨觀察時間增加,實驗組表皮增厚,基底細胞、成纖維細胞及毛細血管等增生明顯,Ⅰ、Ⅲ型膠原含量及密度均逐漸增加。實驗組牽引后4、8、12 周Ⅰ型膠原含量與對照組比較,差異均有統計學意義(P lt; 0.01);2、4、8、12 周時Ⅲ型膠原含量比較,差異均有統計學意義(P lt; 0.01)。牽引后2、4 周,實驗組Ⅰ、Ⅲ型膠原比值與對照組比較差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 持續彈性外牽引可促進小型豬乳頭及其支撐組織的成纖維細胞分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原,增加支撐組織的厚度與乳頭高度,改變膠原纖維的排列。
目的探討帶闊筋膜游離股前外側皮瓣(anterolateral thigh flap,ALTF)修復糖尿病足潰瘍(diabetic foot ulcers,DFUs)伴骨外露的療效。方法2019年1月—2021年1月,收治20例DFUs伴骨外露患者。男17 例,女3例;年齡48~76 歲,中位年齡57.5歲。糖尿病足Wagner分級3級10例,4級10例。足部潰瘍形成時間1~14個月,中位時間3個月。CT血管造影檢查示患者均存在雙下肢動脈粥樣硬化表現;其中6例嚴重狹窄或閉塞,行經皮血管腔內成形術。入院后一期徹底清創聯合封閉式負壓引流處理,清創后創面范圍為7 cm×6 cm~27 cm×10 cm;二期采用帶闊筋膜游離ALTF修復創面及部分缺損肌腱,皮瓣切取范圍為8 cm×5 cm~28 cm×11 cm。供區創面直接縫合。記錄皮瓣成活情況、創面愈合時間以及并發癥發生情況。術后2周及6個月使用激光散斑血流成像系統檢測皮瓣及其周圍皮膚血流灌注情況。術后6個月以美國矯形足踝協會(AOFAS)評分評價足部功能。結果 術后6例出現皮瓣下積液,對癥處理后愈合。最終14例皮瓣完全成活;3例皮瓣邊緣部分壞死,經換藥后愈合;3例皮瓣出現靜脈危象,探查后1例皮瓣完全壞死,另2例皮瓣部分成活,經清創換藥后植皮修復。皮瓣成活率95.0%,保肢率100%。皮瓣移植術后創面愈合時間14~30 d,平均19.1 d。2例患者愈合后1個月內再發皮瓣外周皮膚潰瘍,經換藥后愈合。供區切口18例Ⅰ期愈合;2例局部皮膚壞死,經清創縫合后愈合。患者均獲隨訪,隨訪時間6~30個月,中位時間11個月。皮瓣質地、外觀及彈性良好。患者均能獨自行走,無行走時疼痛。術后6個月13例門診隨訪患者AOFAS評分為(75.9±11.9)分,與術前(44.7±18.4)分比較差異有統計學意義(t=?7.025,P=0.000);患者皮瓣外周正常皮膚血流灌注值由術后2周(38.1±7.8)PU升高至(42.7±10.3)PU,差異有統計學意義(t=?4.680,P=0.001)。結論帶闊筋膜ALTF血供豐富、成活率高,可用于修復DFUs伴骨外露創面。皮瓣愈合后可促進患足血運重建,降低潰瘍復發風險,避免截肢。