測定血清中肌酐的濃度是臨床上診斷腎功能的一項重要指標。在利用偶聯酶法測定的過程中,一種關鍵酶——肌氨酸氧化酶(SOX)(EC 1.5.3.1)的質量控制是我們首先要解決的一個重要問題。本文利用乳糖誘導重組肌氨酸氧化酶(r-SOX)基因在E.coli中高效表達,經300 L發酵罐發酵培養,菌體終密度達到OD600值22,菌體濕重達30 g/L,濕菌體含活性20 U/g。重組肌氨酸氧化酶表達量占菌體可溶性蛋白的25%左右。菌體破碎液經55 ℃選擇性熱變性處理和Ni-Sepharose FF層析二步純化,經十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析酶的純度達97%以上,比活力達25 U/mg,純化倍數為14.4,活性收率為92.4%。純化的酶經SDS-PAGE和分子篩層析法測定,其分子量分別為53 kD和55 kD,提示該酶結構為單一肽鏈。純化的酶液和凍干粉均呈黃色,經三氯乙酸和熱變性處理,發現其與核黃素以共價鍵的方式結合。此外,對該酶的穩定性和其中的干擾酶過氧化氫酶也做了進一步的考察。以上所取得的研究結果為此酶的開發和利用奠定了基礎。