• 四川大學華西醫院呼吸內科(四川成都 610041);
導出 下載 收藏 掃碼 引用

目的  構建hnRNP K特異性siRNA真核表達載體,體外觀察對hnRNP K基因的沉默作用。方法  采用基因克隆技術,將合成的特異性hnRNP K RNA干擾寡核苷酸序列插入真核表達載體pSUPER,構建hnRNP K siRNA真核表達載體。采用Lipofect AMINE2000將pSUPER空載體和3個重組質粒(pSUPER/hnRNP K siRNAa,pSUPER/hnRNP K siRNAc和pSUPER/siRNAn)分別導入A549肺癌細胞(a、c、n分別代表hnRNP K編碼序列中的A鏈和C鏈,以及無意義的對照序列Non鏈)。24 h后用RT-PCR和Western blotting技術檢測各實驗組肺癌細胞內hnRNP K mRNA及蛋白水平的表達情況。結果  成功構建了hnRNP K siRNA真核表達載體。轉染hnRNP K siRNAa、hnRNP K siRNAc的肺癌細胞24 h后hnRNP K mRNA相對表達量分別為0.24±0.53和0.28±0.57,較對照組顯著降低(P均 lt;0.01);hnRNP K蛋白灰度值分別為0.23±0.11和0.28±0.09,較對照組顯著降低(P均 lt;0.05)。結論  構建的RNA干擾真核表達載體能明顯干擾A549細胞hnRNP K mRNA及蛋白的表達,為進一步研究hnRNP K基因的功能并將其進一應用于肺癌的治療研究奠定了基礎。

引用本文: 唐鳳鳴,李為民,王冬梅,韓娟. hnRNP K siRNA真核表達載體的構建及其在A549肺癌細胞中沉默效應的研究. 中國呼吸與危重監護雜志, 2008, 08(5): 350-353. doi: 復制

  • 上一篇

    密閉式吸痰發生呼吸機相關性肺炎的系統評價
  • 下一篇

    長托寧用于全身麻醉前用藥的有效性評價