引用本文： 申杰, 賈唯藝, 黃慶文, 馮圣杰, 劉亮. DAB2IP調控鹽霉素對結腸癌細胞增殖影響的研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2022, 29(7): 857-861. doi: 10.7507/1007-9424.202111014 復制
結直腸癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，盡管目前外科手術聯合放射和（或）化學藥物治療可以明顯提高患者的5年生存率，但仍有約40%~50%的結直腸癌患者最終死于腫瘤轉移[1-2]。越來越多的研究[3-6]表明，腫瘤干細胞在許多類型的腫瘤中都存在，在驅動腫瘤生長和轉移的過程中發揮著關鍵作用。DAB2IP又名DOC-2/DAB2結合蛋白或ASK1結合蛋白，在人類多種腫瘤中被作為一個公認的抑癌蛋白，其通過抑制Ras-Raf-ERK及磷脂酰肌醇3激酶-Akt活性，激活ASK1-JNK/p38通路，調節腫瘤細胞生長、增殖與死亡[7-9]；此外，DAB2IP還可以抑制腫瘤干細胞的特性獲得[10-11]。鹽霉素是一種小分子載體抗生素，被證實對肺癌、結直腸癌、胃癌、乳腺癌等具有明顯的抑制作用[12-18]。自從2009年Gupta等[19]首次報道鹽霉素可以選擇性地殺傷乳腺癌干細胞以來，后有許多研究[20-25]結果均表明，鹽霉素還可以有效殺傷結直腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、膠質母細胞瘤等腫瘤干細胞，但其機制并不明確。因此，本研究旨在探討DAB2IP在鹽霉素對結腸癌細胞的增殖影響中的作用及可能的機制，并且本研究根據既往的文獻[12-18]報道，鹽霉素對多種實體腫瘤具有抑制作用，為了進一步驗證鹽霉素對結腸癌細胞的抑制作用及明確鹽霉素對結腸癌細胞的半數抑制濃度（median inhibitory concentration，IC50），故本研究選取了2株結腸癌細胞系HT29和SW480進行研究。
1 材料與方法
1.1 主要材料
結腸癌細胞HT29和SW480均購自中國科學院上海生命科學研究院細胞庫，HT29細胞使用McCOY’s 5A培養基（Hyclone公司）培養、SW480細胞使用DMEM培養基（Hyclone公司）培養，以上兩種細胞均使用含有10%的胎牛血清（Gibco公司）、1%青-鏈霉素的培養基培養。鹽霉素購自MedChemExpress公司（貨號：CAS53003-10-4），用二甲基亞砜配制成10 mmol/L于–20 ℃保存備用。pCI-neo質粒、pCI-DAB2IP質粒、pGIPZ-DAB2IP-shRNA質粒和pGIPZ-con-shRNA質粒由美國西南醫學中心Jer-Tsong Hsieh贈送。Lipofectamine3000轉染試劑購自Invitrogen公司。DAB2IP抗體購自Abcam公司，甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體購自Santa Cruz公司；細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK8）購自MedChemExpress公司；Trizol、逆轉錄試劑盒和實時定量PCR（real-time PCR，RT-PCR）試劑盒購自Takara公司。
1.2 采用CCK8檢測細胞毒性及增殖實驗
細胞毒性實驗檢測鹽霉素的IC50，取對數生長期的結腸癌細胞經胰酶消化后并計數，以5 000個細胞/孔接種于96孔板中，每組重復6個復孔，待細胞貼壁后以0.0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L濃度的鹽霉素處理細胞24 h后加入CCK8試劑，具體操作按試劑盒說明書進行，用酶標儀檢測450 nm波長的吸光度（absorbance，A）以計數細胞活力，其公式為“（實驗組A值–空白對照組A值）/（對照組A值–空白對照組A值）×100%” 。其中實驗組是穩定低表達或高表達DAB2IP的結腸癌細胞，對照組是其相應對照細胞，計算6個復孔的平均數。
1.3 穩定敲減或外源性高表達DAB2IP結腸癌細胞株的建立及鑒定
在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中，采用慢病毒轉染的方法分別轉染pGIPZ-DAB2IP-shRNA質粒和pGIPZ-con-shRNA質粒，用嘌呤霉素篩選穩定克隆，建立HT29-shDAB2IP和對照組HT29-shcon細胞株；在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中，采用Lipofectamine3000分別轉染pCI-DAB2IP質粒和pCI-neo質粒，用G418篩選穩定克隆，建立SW480-DAB2IP和對照組SW480-con細胞株。采用Western blot法鑒定DAB2IP的表達。將以上穩定株細胞以5×105個/孔接種于6孔板，24 h貼壁培養后經胰酶消化收集細胞沉淀，加入適量含苯甲基磺酰氟的NP40裂解液冰上裂解，然后12 000 r/min（r=0.125 cm）離心后取上清，經二喹啉甲酸法檢測濃度后加入上樣緩沖液水浴（100 ℃）5 min。蛋白樣品以每孔30 μg上樣電泳后，硝酸纖維素膜轉膜2 h，并用脫脂牛奶封閉非特異性結合，4 ℃孵育一抗過夜（DAB2IP抗體濃度為1∶1 000，GAPDH抗體濃度為1∶2 000），TBST洗膜后孵育二抗1 h，最后用電化學發光法顯影。
1.4 RT-PCR法檢測結腸癌細胞的腫瘤干細胞相關標志物CD24、CD44和CD133的表達情況
為了進一步探究DAB2IP是如何影響鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用，本研究采用RT-PCR法檢測結腸癌細胞的腫瘤干細胞相關標志物CD24、CD44和CD133的表達情況。將以上穩定株細胞以5×105個/孔接種于6孔板，24 h貼壁培養后經胰酶消化收集細胞沉淀，利用Trizol法提取細胞總RNA（具體操作參照產品說明書），按照Takara公司的逆轉錄試劑盒說明書操作進行逆轉錄合成cDNA。根據基因序列用NCBI Primer-BLAST設計引物，引物序列見表1。按照試劑盒說明書進行RT-PCR反應，用2–ΔΔCt法分析RT-PCR檢測結果，每組重復3個復孔，結果取均值。
表1
各標志物引物序列
1.5 統計學方法
利用Graphpad Prism軟件作圖。采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，實驗數據通過正態分布檢驗，符合正態分布者用均數±標準差表示并采用配對t檢驗。RT-PCR法檢測結果分析采用單向方差分析進行各個樣本間2–ΔΔCt的比較。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 鹽霉素對結腸癌細胞增殖的影響
通過細胞毒性及增殖實驗發現，隨著鹽霉素濃度增加，細胞活力呈降低趨勢，提示其對結腸癌細胞HT29和SW480增殖具有抑制作用，其IC50值分別為20.0和10.0 μmol/L，見圖1a、1b。
圖1
示主要實驗結果
a、b：分別為CCK8檢測鹽霉素對HT29（a）和SW480（b）細胞的IC50值；c~f：分別為Western blot法檢測SW480和HT29細胞中DAB2IP的蛋白質表達量（c、e）及CCK8檢測鹽霉素對DAB2IP表達不同水平的細胞活力（d、f）的影響，c、d中1代表SW480-con細胞、2代表SW480-DAB2IP細胞，e、f中1代表HT29-shcon細胞、2代表HT29-shDAB2IP細胞；g、h：分別為RT-PCR檢測DAB2IP對HT29（g）和SW480（h）結腸癌干細胞標志物的表達
2.2 DAB2IP表達下調后鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用增強
結果見圖1c~1f。本研究成功構建了外源性穩定高表達DAB2IP的結腸癌細胞（SW480-DAB2IP）和對照組細胞（SW480-con）及穩定敲減DAB2IP表達的結腸癌細胞（HT29-shDAB2IP）和對照組細胞（HT29-shcon），見圖1c、1e。再利用CCK8法檢測鹽霉素對穩定高表達或敲減DAB2IP表達后結腸癌細胞增殖的影響，結果發現，在SW480細胞中外源性高表達DAB2IP后，鹽霉素對SW480細胞增殖的抑制作用較對照組細胞明顯減弱（細胞活力均數62%比50%，t=18.13、P<0.000 1），見圖1d；在HT29細胞中穩定敲減DAB2IP表達后，鹽霉素對HT29細胞增殖的抑制作用較對照組細胞明顯增強（細胞活力均數38%比51%，t=2.98、P=0.031），見圖1f，結果提示，DAB2IP的表達下調可以增強鹽霉素對直腸癌細胞增殖的抑制作用。
2.3 RT-PCR法檢測結腸癌細胞中腫瘤干細胞相關標志物的表達結果
在HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后即HT29-shDAB2IP細胞中腫瘤干細胞標志分子CD24（4.09倍，t=12.58、P=0.0063）、CD44（3.26倍，t=38.99、P=0.0007）和CD133（3.42倍，t=14.92、P=0.0045）表達均較對照組即HT29-shcon細胞明顯增強（圖1g），而在SW480細胞中外源性高表達DAB2IP后即SW480-DAB2IP細胞中腫瘤干細胞標志分子CD24（0.29倍，t=70.82、P=0.0002）、CD44（0.42倍，t=26.66、P=0.0014）和CD133（0.56倍，t=4.368、P=0.0486）表達均較對照組即SW480-con細胞降低（圖1h），結果提示，DAB2IP可能是通過抑制結腸癌細胞的干性而影響鹽霉素對結腸癌增殖的抑制作用。
3 討論
2009年有文獻[19]報道，在乳腺癌中鹽霉素較傳統化療藥物紫杉醇具有更強的殺傷乳腺癌腫瘤干細胞的作用。鹽霉素殺傷腫瘤干細胞的作用機制涉及溶酶體鐵隔離，導致活性氧的產生及溶酶體膜滲透，進而引起鐵死亡[20]。當然，鹽霉素對腫瘤干細胞的殺傷作用可能還涉及其他方面的機制。本研究對此進一步進行了探索，首先通過細胞毒性及增殖實驗發現，鹽霉素對結腸癌細胞HT29和SW480細胞的增殖具有明顯抑制作用；然后進一步在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后可顯著增強鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用，而在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中穩定高表達DAB2IP后可顯著抑制鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用。既往的研究[19, 21-24]表明，鹽霉素可以有效地殺傷乳腺癌、結直腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤等腫瘤干細胞，而CD24、CD44和CD133是結直腸癌干細胞的常用標志物[26]，本研究為了進一步探究這些腫瘤干細胞相關標志物在DAB2IP影響鹽霉素對結腸癌細胞增殖影響可能機制中的作用，采用RT-PCR法檢測結腸癌細胞穩定敲減或穩定高表達DAB2IP后腫瘤干細胞相關標志物的表達情況變化，結果顯示，在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后可明顯增強腫瘤干細胞標志分子CD24、CD44和CD133的表達，而在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中穩定高表達DAB2IP后可顯著降低其表達。據此推測，DAB2IP抑制鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用可能是通過抑制結直癌干細胞的獲得實現的，這也符合既往文獻關于鹽霉素可以殺傷多種腫瘤干細胞的報道。
盡管本研究初步研究結果提示DAB2IP可能是通過抑制結腸癌細胞的干性而影響鹽霉素對結腸癌增殖的抑制作用，也預示著在DAB2IP表達較低或缺失的結腸癌中鹽霉素可能具有更好的增殖抑制作用，此結論也需進一步研究，因為本研究只限于細胞水平的研究，尚缺乏體內動物實驗的驗證；此外，關于DAB2IP是如何影響結腸癌腫瘤干細胞獲得的確切分子機制目前尚不明確，因此，需在后續的研究中進一步證實鹽霉素在結腸癌中的作用及機制。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：申杰主要完成具體實驗的實施及作圖；賈唯藝主要負責細胞的培養；黃慶文主要負責統計分析；馮圣杰主要負責數據整理；劉亮主要負責研究的設計與論文書寫。
結直腸癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，盡管目前外科手術聯合放射和（或）化學藥物治療可以明顯提高患者的5年生存率，但仍有約40%~50%的結直腸癌患者最終死于腫瘤轉移[1-2]。越來越多的研究[3-6]表明，腫瘤干細胞在許多類型的腫瘤中都存在，在驅動腫瘤生長和轉移的過程中發揮著關鍵作用。DAB2IP又名DOC-2/DAB2結合蛋白或ASK1結合蛋白，在人類多種腫瘤中被作為一個公認的抑癌蛋白，其通過抑制Ras-Raf-ERK及磷脂酰肌醇3激酶-Akt活性，激活ASK1-JNK/p38通路，調節腫瘤細胞生長、增殖與死亡[7-9]；此外，DAB2IP還可以抑制腫瘤干細胞的特性獲得[10-11]。鹽霉素是一種小分子載體抗生素，被證實對肺癌、結直腸癌、胃癌、乳腺癌等具有明顯的抑制作用[12-18]。自從2009年Gupta等[19]首次報道鹽霉素可以選擇性地殺傷乳腺癌干細胞以來，后有許多研究[20-25]結果均表明，鹽霉素還可以有效殺傷結直腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、膠質母細胞瘤等腫瘤干細胞，但其機制并不明確。因此，本研究旨在探討DAB2IP在鹽霉素對結腸癌細胞的增殖影響中的作用及可能的機制，并且本研究根據既往的文獻[12-18]報道，鹽霉素對多種實體腫瘤具有抑制作用，為了進一步驗證鹽霉素對結腸癌細胞的抑制作用及明確鹽霉素對結腸癌細胞的半數抑制濃度（median inhibitory concentration，IC50），故本研究選取了2株結腸癌細胞系HT29和SW480進行研究。
1 材料與方法
1.1 主要材料
結腸癌細胞HT29和SW480均購自中國科學院上海生命科學研究院細胞庫，HT29細胞使用McCOY’s 5A培養基（Hyclone公司）培養、SW480細胞使用DMEM培養基（Hyclone公司）培養，以上兩種細胞均使用含有10%的胎牛血清（Gibco公司）、1%青-鏈霉素的培養基培養。鹽霉素購自MedChemExpress公司（貨號：CAS53003-10-4），用二甲基亞砜配制成10 mmol/L于–20 ℃保存備用。pCI-neo質粒、pCI-DAB2IP質粒、pGIPZ-DAB2IP-shRNA質粒和pGIPZ-con-shRNA質粒由美國西南醫學中心Jer-Tsong Hsieh贈送。Lipofectamine3000轉染試劑購自Invitrogen公司。DAB2IP抗體購自Abcam公司，甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體購自Santa Cruz公司；細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK8）購自MedChemExpress公司；Trizol、逆轉錄試劑盒和實時定量PCR（real-time PCR，RT-PCR）試劑盒購自Takara公司。
1.2 采用CCK8檢測細胞毒性及增殖實驗
細胞毒性實驗檢測鹽霉素的IC50，取對數生長期的結腸癌細胞經胰酶消化后并計數，以5 000個細胞/孔接種于96孔板中，每組重復6個復孔，待細胞貼壁后以0.0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L濃度的鹽霉素處理細胞24 h后加入CCK8試劑，具體操作按試劑盒說明書進行，用酶標儀檢測450 nm波長的吸光度（absorbance，A）以計數細胞活力，其公式為“（實驗組A值–空白對照組A值）/（對照組A值–空白對照組A值）×100%” 。其中實驗組是穩定低表達或高表達DAB2IP的結腸癌細胞，對照組是其相應對照細胞，計算6個復孔的平均數。
1.3 穩定敲減或外源性高表達DAB2IP結腸癌細胞株的建立及鑒定
在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中，采用慢病毒轉染的方法分別轉染pGIPZ-DAB2IP-shRNA質粒和pGIPZ-con-shRNA質粒，用嘌呤霉素篩選穩定克隆，建立HT29-shDAB2IP和對照組HT29-shcon細胞株；在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中，采用Lipofectamine3000分別轉染pCI-DAB2IP質粒和pCI-neo質粒，用G418篩選穩定克隆，建立SW480-DAB2IP和對照組SW480-con細胞株。采用Western blot法鑒定DAB2IP的表達。將以上穩定株細胞以5×105個/孔接種于6孔板，24 h貼壁培養后經胰酶消化收集細胞沉淀，加入適量含苯甲基磺酰氟的NP40裂解液冰上裂解，然后12 000 r/min（r=0.125 cm）離心后取上清，經二喹啉甲酸法檢測濃度后加入上樣緩沖液水浴（100 ℃）5 min。蛋白樣品以每孔30 μg上樣電泳后，硝酸纖維素膜轉膜2 h，并用脫脂牛奶封閉非特異性結合，4 ℃孵育一抗過夜（DAB2IP抗體濃度為1∶1 000，GAPDH抗體濃度為1∶2 000），TBST洗膜后孵育二抗1 h，最后用電化學發光法顯影。
1.4 RT-PCR法檢測結腸癌細胞的腫瘤干細胞相關標志物CD24、CD44和CD133的表達情況
為了進一步探究DAB2IP是如何影響鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用，本研究采用RT-PCR法檢測結腸癌細胞的腫瘤干細胞相關標志物CD24、CD44和CD133的表達情況。將以上穩定株細胞以5×105個/孔接種于6孔板，24 h貼壁培養后經胰酶消化收集細胞沉淀，利用Trizol法提取細胞總RNA（具體操作參照產品說明書），按照Takara公司的逆轉錄試劑盒說明書操作進行逆轉錄合成cDNA。根據基因序列用NCBI Primer-BLAST設計引物，引物序列見表1。按照試劑盒說明書進行RT-PCR反應，用2–ΔΔCt法分析RT-PCR檢測結果，每組重復3個復孔，結果取均值。
表1
各標志物引物序列
1.5 統計學方法
利用Graphpad Prism軟件作圖。采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，實驗數據通過正態分布檢驗，符合正態分布者用均數±標準差表示并采用配對t檢驗。RT-PCR法檢測結果分析采用單向方差分析進行各個樣本間2–ΔΔCt的比較。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 鹽霉素對結腸癌細胞增殖的影響
通過細胞毒性及增殖實驗發現，隨著鹽霉素濃度增加，細胞活力呈降低趨勢，提示其對結腸癌細胞HT29和SW480增殖具有抑制作用，其IC50值分別為20.0和10.0 μmol/L，見圖1a、1b。
圖1
示主要實驗結果
a、b：分別為CCK8檢測鹽霉素對HT29（a）和SW480（b）細胞的IC50值；c~f：分別為Western blot法檢測SW480和HT29細胞中DAB2IP的蛋白質表達量（c、e）及CCK8檢測鹽霉素對DAB2IP表達不同水平的細胞活力（d、f）的影響，c、d中1代表SW480-con細胞、2代表SW480-DAB2IP細胞，e、f中1代表HT29-shcon細胞、2代表HT29-shDAB2IP細胞；g、h：分別為RT-PCR檢測DAB2IP對HT29（g）和SW480（h）結腸癌干細胞標志物的表達
2.2 DAB2IP表達下調后鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用增強
結果見圖1c~1f。本研究成功構建了外源性穩定高表達DAB2IP的結腸癌細胞（SW480-DAB2IP）和對照組細胞（SW480-con）及穩定敲減DAB2IP表達的結腸癌細胞（HT29-shDAB2IP）和對照組細胞（HT29-shcon），見圖1c、1e。再利用CCK8法檢測鹽霉素對穩定高表達或敲減DAB2IP表達后結腸癌細胞增殖的影響，結果發現，在SW480細胞中外源性高表達DAB2IP后，鹽霉素對SW480細胞增殖的抑制作用較對照組細胞明顯減弱（細胞活力均數62%比50%，t=18.13、P<0.000 1），見圖1d；在HT29細胞中穩定敲減DAB2IP表達后，鹽霉素對HT29細胞增殖的抑制作用較對照組細胞明顯增強（細胞活力均數38%比51%，t=2.98、P=0.031），見圖1f，結果提示，DAB2IP的表達下調可以增強鹽霉素對直腸癌細胞增殖的抑制作用。
2.3 RT-PCR法檢測結腸癌細胞中腫瘤干細胞相關標志物的表達結果
在HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后即HT29-shDAB2IP細胞中腫瘤干細胞標志分子CD24（4.09倍，t=12.58、P=0.0063）、CD44（3.26倍，t=38.99、P=0.0007）和CD133（3.42倍，t=14.92、P=0.0045）表達均較對照組即HT29-shcon細胞明顯增強（圖1g），而在SW480細胞中外源性高表達DAB2IP后即SW480-DAB2IP細胞中腫瘤干細胞標志分子CD24（0.29倍，t=70.82、P=0.0002）、CD44（0.42倍，t=26.66、P=0.0014）和CD133（0.56倍，t=4.368、P=0.0486）表達均較對照組即SW480-con細胞降低（圖1h），結果提示，DAB2IP可能是通過抑制結腸癌細胞的干性而影響鹽霉素對結腸癌增殖的抑制作用。
3 討論
2009年有文獻[19]報道，在乳腺癌中鹽霉素較傳統化療藥物紫杉醇具有更強的殺傷乳腺癌腫瘤干細胞的作用。鹽霉素殺傷腫瘤干細胞的作用機制涉及溶酶體鐵隔離，導致活性氧的產生及溶酶體膜滲透，進而引起鐵死亡[20]。當然，鹽霉素對腫瘤干細胞的殺傷作用可能還涉及其他方面的機制。本研究對此進一步進行了探索，首先通過細胞毒性及增殖實驗發現，鹽霉素對結腸癌細胞HT29和SW480細胞的增殖具有明顯抑制作用；然后進一步在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后可顯著增強鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用，而在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中穩定高表達DAB2IP后可顯著抑制鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用。既往的研究[19, 21-24]表明，鹽霉素可以有效地殺傷乳腺癌、結直腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤等腫瘤干細胞，而CD24、CD44和CD133是結直腸癌干細胞的常用標志物[26]，本研究為了進一步探究這些腫瘤干細胞相關標志物在DAB2IP影響鹽霉素對結腸癌細胞增殖影響可能機制中的作用，采用RT-PCR法檢測結腸癌細胞穩定敲減或穩定高表達DAB2IP后腫瘤干細胞相關標志物的表達情況變化，結果顯示，在內源性高表達DAB2IP的HT29細胞中穩定敲減DAB2IP后可明顯增強腫瘤干細胞標志分子CD24、CD44和CD133的表達，而在內源性低表達DAB2IP的SW480細胞中穩定高表達DAB2IP后可顯著降低其表達。據此推測，DAB2IP抑制鹽霉素對結腸癌細胞增殖的抑制作用可能是通過抑制結直癌干細胞的獲得實現的，這也符合既往文獻關于鹽霉素可以殺傷多種腫瘤干細胞的報道。
盡管本研究初步研究結果提示DAB2IP可能是通過抑制結腸癌細胞的干性而影響鹽霉素對結腸癌增殖的抑制作用，也預示著在DAB2IP表達較低或缺失的結腸癌中鹽霉素可能具有更好的增殖抑制作用，此結論也需進一步研究，因為本研究只限于細胞水平的研究，尚缺乏體內動物實驗的驗證；此外，關于DAB2IP是如何影響結腸癌腫瘤干細胞獲得的確切分子機制目前尚不明確，因此，需在后續的研究中進一步證實鹽霉素在結腸癌中的作用及機制。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：申杰主要完成具體實驗的實施及作圖；賈唯藝主要負責細胞的培養；黃慶文主要負責統計分析；馮圣杰主要負責數據整理；劉亮主要負責研究的設計與論文書寫。
