引用本文： 郝治, 甄宏博, 龔海峰. 肛周膿腫局部組織中 SDF-1 和 CXCR4 的表達及其臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2019, 26(12): 1434-1439. doi: 10.7507/1007-9424.201906085 復制
肛周膿腫屬于直腸間隙化膿性感染疾病，占據所有肛腸疾病的 10%～25%[1]，大部分患者發病后的臨床表現為肛周局部腫脹疼痛，嚴重影響患者的生活質量。目前對肛周膿腫的分子發病機制進行了一系列的探索[2]，但尚未有統一定論。因此，探究肛周膿腫的分子病理機制對于探尋治療靶點具有十分重要的意義。基質細胞衍生因子 1（stromal cell-derived factor 1，SDF-1）及趨化因子受體 4（chemokine receptor-4，CXCR4）參與了多種疾病的發生，在結直腸癌中研究發現，SDF-1 及其受體 CXCR4 表達的上調與結直腸癌的發生、浸潤、轉移等相關[3]；此外，二者水平的升高與潰瘍性結腸炎的發生也有關[4]。然而，二者是否參與肛周膿腫疾病的發生，目前研究較少。本研究通過檢測肛周膿腫患者局部組織中 SDF-1 和 CXCR4 分子的表達，并分析其與患者臨床病理學特征及預后的關系，旨在為肛周膿腫的分子機制研究和治療提供一定的參考。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
納入標準：① 所有患者均經肛門彩超和組織病理學檢查確診；② 術前未行相關藥物治療；③ 所有患者均為首次發病；④ 患者臨床資料完整，知情同意并簽署知情同意書。排除標準：① 伴惡性腫瘤；② 糖尿病患者；③ 心、肝及腎功能不全者；④ 腸炎和結核性肛瘺者；⑤ 近期發生感染或自身免疫性疾病者。
回顧性收集 2017 年 1 月至 2018 年 2 月期間在北京市第一中西醫結合醫院進行手術治療的 47 例肛周膿腫患者（肛周膿腫組）及 58 例混合痔患者（混合痔組）進行研究。肛周膿腫組中，男 25 例，女 22 例；年齡 22～49 歲、（36±5）歲；混合痔組患者中，男 30 例，女 28 例；年齡 24～48 歲、（36±7）歲。2 組患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（χ2=0.022，P=0.881；t=0.001，P=1.000）。本研究經北京市第一中西醫結合醫院倫理委員會批準。
1.2 主要試劑
本研究的主要試劑包括：RNA 提取試劑盒（北京 Qiagen 公司，批號為 20170110），實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）試劑盒（日本 Taraka 公司，批號為 RR036Q），兔抗人 SDF-1 和 CXCR4 一抗（碧云天生物科技公司，批號分別為 BAF351 和 FAB173A），辣根過氧化物酶標記羊抗兔 IgG 和免疫組織化學反應試劑盒（碧云天生物科技公司，批號分別為 P0267 和 A7028）。
1.3 方法
1.3.1 組織收集
所有納入對象均進行手術治療，肛周膿腫組患者采取膿腫切排術，取膿腫壁組織，發展為肛瘺的患者刮取瘺管壁組織；混合痔組患者取混合痔組織。所有患者均經組織病理學檢查確診。組織采集后部分置于–80 ℃ 保存，另一部分用 4% 多聚甲醛固定待測。
1.3.2 qRT-PCR 法檢測組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達
采用 RNA 提取試劑盒提取組織中的總 RNA，測定其純度后，采用反轉錄試劑盒將 RNA 反轉錄為 cDNA。SDF-1 引物序列：上游引物，3′-TACAGATGCCC-ATGCCGA-5′；下游引物，3′-CTGAAGGGCACAGTTTGGAG-5′，擴增產物長度為 283 bp。CXCR4 引物序列：上游引物，3′-GGCAGCAGGTAGCAAAGTGACGC-5′；下游引物，3′-AGAGGAGGTCGGCCACTGACA-5′，擴增產物長度為 439 bp。GAPDH 引物序列：上游引物，5′-CATCACCATCTTCCAGGAGCG-3′，下游引物，5′-TGACCTTGCCCACAGCCTTG-3′，擴增產物長度為 152 bp。qRT-PCR 反應體系共 10 μL：SYBR 反應液 5 μL，cDNA 樣品 1 μL，上下游引物各 0.3 μL，ddH2O 3.4 μL。于 PCR 儀器中行擴增反應，程序設定為：95 ℃ 初始變性 10 min；95 ℃ 變性 15 s，60 ℃ 退火 60 s，40 個循環。每個樣品均設定 3 次重復檢測，計算平均值。以 GAPDH 作為內參，以 2–ΔΔCq法計算 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的相對表達量[5]。
1.3.3 免疫組織化學方法檢測 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達
所有組織經 4% 多聚甲醛固定后進行脫水、透明、浸蠟及石蠟包埋，制備 3 μm 石蠟切片，經脫蠟及水合后，用檸檬酸鈉行抗原修復，以過氧化氫消除內源性過氧化酶后，于 10% 山羊血清中封閉 30 min，于 4 ℃ 條件下用 SDF-1 及 CXCR4 一抗過夜孵育切片。以 PBS 孵育的切片作為陰性對照。PBS 清洗后，將山羊抗兔 IgG 二抗室溫下孵育切片 1 h。PBS 洗滌 3 次，DAB 顯色后在光鏡下觀察蛋白染色情況，陽性染色為細胞質呈棕黃色。采用雙盲法對細胞染色比例及染色程度進行判定，染色細胞比例為 0～10%，標記為“–”；染色細胞比例為 10%～20%，染色弱至中等，標記為“+”；染色細胞比例為 10%～20%，染色強，標記為“++”；染色細胞比例>50%，或染色細胞比例為 21%～50% 而染色強，標記為“+++”。其中，（–）定義為陰性表達，（+）、（++）和（+++）定義為陽性表達[6]。
1.4 隨訪
所有患者術后采用電話或復診方式進行隨訪，術后隨訪 12 個月，以影像學結合病理學活檢的方式對患者的預后進行評定。預后不良為術后 12 個月內病情復發，如肛周膿腫患者進展為肛瘺或混合痔進展為脫肛。
1.5 統計學方法
采用統計學軟件 SPSS 22.0 進行數據分析。計量資料以均數±標準差（
±s）描述，2 組間比較行成組 t 檢驗；計數資料采用例（%）進行描述，統計方法采用成組 χ2 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 2 組病灶組織中 SDF-1 和 CXCR4 mRNA 及其蛋白的表達
qRT-PCR 結果顯示，肛周膿腫組組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達水平均相應高于混合痔組組織，差異均有統計學意義（P<0.05），具體見表 1。免疫組織化學染色結果（圖 1）顯示，肛周膿腫組組織中 SDF-1 蛋白的表達陽性率為 61.7%（29/47），CXCR4 蛋白的表達陽性率為 53.2%（25/47），相應高于混合痔組的 20.7%（12/58）和 17.2%（10/58），差異均有統計學意義（χ2=18.348，P<0.001；χ2=15.099，P<0.001）。2 組病灶組織中 SDF-1 和 CXCR4 蛋白的具體表達情況見表 2。
表1
2 組病灶組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達水平（
）
圖1
示 2 組病灶組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達（SP ×400）
a：肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白的表達；b：混合痔組織中 SDF-1 蛋白的表達；c：肛周膿腫壁組織中 CXCR4 蛋白的表達；d：混合痔組織中 CXCR4 蛋白的表達
表2
2 組病灶組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達（例）
2.2 肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與患者臨床病理學特征的關系
肛周膿腫患者組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與患者的性別、年齡、膿腫位置及病程均無關（P>0.05），但與膿腫直徑、愈合時間及肛瘺均有關（P<0.05）。膿腫直徑≥5 cm、愈合時間≥4 周和肛瘺患者肛周膿腫組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的陽性表達率均相應高于膿腫直徑<5 cm、愈合時間<4 周和非肛瘺患者（P<0.05），具體見表 3。
表3
肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與臨床病理學特征的關系（例）
2.3 肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與復發的關系
肛周膿腫患者均進行隨訪，無失訪者，隨訪時間均為 12 個月。術后復發 10 例，未復發 37 例，術后未復發率為 78.7%。其中，SDF-1 蛋白陽性組的術后未復發率為 69.0%，SDF-1 蛋白陰性組為 94.4%。CXCR4 蛋白陽性組的術后未復發率為 64.0%，CXCR4 蛋白陰性組為 95.5%。SDF-1 蛋白陰性組和 CXCR4 蛋白陰性組的術后未復發率均相應低于 SDF-1 蛋白陽性組及 CXCR4 蛋白陽性組，差異均有統計學意義（P<0.05），具體見表 4。
表4
肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與復發的關系
3 討論
肛周膿腫屬于臨床常見的急性化膿性感染疾病之一，目前對于該病的感染機制已進行了大量研究，但分子機制研究較少。部分研究顯示，肛周膿腫組織與正常組織間炎性分子蛋白表達的差異可能是導致發病的重要因素[8-10]，因此探究新的差異表達蛋白是研究肛周膿腫分子發生機制的重要途徑。SDF-1 屬于 CXC 趨化因子家族成員，CXCR4 為 SDF-1 的特異性受體，兩者結合后促使細胞間的信號傳遞及細胞轉移，進而參與多種疾病的發生和發展[11-13]。據文獻[14]報道，在關節炎骨滑膜細胞中，SDF-1 蛋白表達上調后可促使炎性因子水平升高，進而高表達 CXCR4 蛋白，提示 SDF-1/CXCR4 通路在關節炎的發生中發揮重要作用。此外，SDF-1/CXCR4 蛋白表達上調與肺炎的發生有關，而抑制 CXCR4 蛋白的表達后可顯著減輕肺部的炎癥反應[15-16]。臨床研究[17]顯示，潰瘍性結腸炎患者外周血中 SDF-1 mRNA 及 CD4+CXCR4+T 淋巴細胞比例均顯著高于正常者，且與腸道病變的嚴重程度密切相關。近期研究[18-19]發現，細胞 SDF-1/CXCR4 蛋白表達的異常與腸道腫瘤的發生有關。張磊等[18]在結直腸腺癌中研究發現，SDF-1/CXCR4 蛋白表達均上調，且與癌細胞的浸潤轉移有關。陳志京等[19]通過研究發現，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白在結直腸癌中高表達，且可能與結直腸癌的進展和轉移有關。以上研究提示，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白表達水平的升高與腸道炎癥和腫瘤的發生有關。目前，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白與肛周膿腫的關系研究較少。
本研究發現，SDF-1 和 CXCR4 的 mRNA 及其蛋白在肛周膿腫患者組織中的表達水平高于混合痔組織，提示 SDF-1 和 CXCR4 的 mRNA 及其蛋白表達的上調可能在肛周膿腫的發生和發展中起重要作用。Ramonell 等[20]研究發現，CXCR4 阻滯劑可減少 CD4+T 細胞衰竭，提高膿毒癥小鼠模型的存活率，表明 CXCR4 蛋白參與膿毒癥的發生和發展。與此相似，本研究發現，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與膿腫直徑、肛瘺發生和愈合時間有關，提示 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白可能參與肛周膿腫的病理進展過程。盡管 SDF-1 和 CXCR4 分子在肛周膿腫發生和發展中的作用尚不明確，但有研究[21]表明，血液中 SDF-1 和 CXCR4 蛋白水平升高后可以招募大量炎性因子，從而加重手術感染患者的病情，引發敗血癥。另有研究[22]發現，SDF-1 和 CXCR4 蛋白可能通過調控腫瘤免疫監視進而促進腫瘤細胞的增殖、遷移和組織侵襲。根據以上研究推測，SDF-1 和 CXCR4 蛋白水平升高后可能通過促進炎癥反應，參與肛周膿腫感染的發生。
膿腫復發及演變為肛瘺給肛周膿腫患者的生活帶來嚴重困擾。研究[23]表明，30% 的肛周膿腫患者術后發展為肛瘺。因此，探尋影響肛周膿腫患者術后復發的機制，對疾病預后的改善具有重要的臨床意義。Weixler 等[24]研究發現，CXCR4 蛋白與結直腸癌患者疾病進展為晚期和不良預后有關，CXCR4 蛋白低表達者的生存率高于高表達者。膿毒癥患者的血清 SDF-1 蛋白濃度明顯升高，且與存活率顯著相關[25]。這些研究提示，SDF-1 和 CXCR4 蛋白的表達情況可能影響患者的預后。本研究發現，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白陽性表達者的術后復發率高于陰性表達患者，表明 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的陽性表達與肛周膿腫的復發有關，提示 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白可能是肛周膿腫患者預后的生物標志物及潛在治療靶標。
綜上所述，SDF-1 和 CXCR4 分子在肛周膿腫患者局部組織中的表達上調，且兩者的表達均與膿腫直徑、愈合時間、肛瘺以及復發有關。而探究肛周膿腫的發生機制，對疾病的靶向治療方式以及術后復發預防均具有重要的臨床意義，本研究具有一定的參考價值。然而，本研究還存在一些局限性值得進一步討論。首先，本研究所納入的樣本量較少，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白表達及預后的關系需要在更大隊列中進行驗證。其次，本研究僅選擇混合痔患者組織作為對照，而對其他肛部疾病組織中的表達情況未做探討，后續需進一步分析 SDF-1 和 CXCR4 分子在其他肛腸疾病中的作用。第三，本研究雖從臨床角度對基礎實驗結論進行分析總結，但 SDF-1 和 CXCR4 分子的高表達受較多因素的影響，因此可能需要聯合其他指標預測肛周膿腫復發，以提高預測靈敏度和準確度。最后，在后續研究中，需要在肛周膿腫中評估 SDF-1 和 CXCR4 分子的預后價值，以期闡明其與疾病發生的潛在關系。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：郝治主要負責研究設計、試驗設計、數據收集、討論分析和論文撰寫；甄宏博主要負責數據統計和核對，檢測所測得數據的真實性；龔海峰主任主要負責論文質量控制和預審查看，并負責通訊事宜。
倫理聲明：本研究已通過北京市第一中西醫結合醫院的倫理審核批準。
肛周膿腫屬于直腸間隙化膿性感染疾病，占據所有肛腸疾病的 10%～25%[1]，大部分患者發病后的臨床表現為肛周局部腫脹疼痛，嚴重影響患者的生活質量。目前對肛周膿腫的分子發病機制進行了一系列的探索[2]，但尚未有統一定論。因此，探究肛周膿腫的分子病理機制對于探尋治療靶點具有十分重要的意義。基質細胞衍生因子 1（stromal cell-derived factor 1，SDF-1）及趨化因子受體 4（chemokine receptor-4，CXCR4）參與了多種疾病的發生，在結直腸癌中研究發現，SDF-1 及其受體 CXCR4 表達的上調與結直腸癌的發生、浸潤、轉移等相關[3]；此外，二者水平的升高與潰瘍性結腸炎的發生也有關[4]。然而，二者是否參與肛周膿腫疾病的發生，目前研究較少。本研究通過檢測肛周膿腫患者局部組織中 SDF-1 和 CXCR4 分子的表達，并分析其與患者臨床病理學特征及預后的關系，旨在為肛周膿腫的分子機制研究和治療提供一定的參考。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
納入標準：① 所有患者均經肛門彩超和組織病理學檢查確診；② 術前未行相關藥物治療；③ 所有患者均為首次發病；④ 患者臨床資料完整，知情同意并簽署知情同意書。排除標準：① 伴惡性腫瘤；② 糖尿病患者；③ 心、肝及腎功能不全者；④ 腸炎和結核性肛瘺者；⑤ 近期發生感染或自身免疫性疾病者。
回顧性收集 2017 年 1 月至 2018 年 2 月期間在北京市第一中西醫結合醫院進行手術治療的 47 例肛周膿腫患者（肛周膿腫組）及 58 例混合痔患者（混合痔組）進行研究。肛周膿腫組中，男 25 例，女 22 例；年齡 22～49 歲、（36±5）歲；混合痔組患者中，男 30 例，女 28 例；年齡 24～48 歲、（36±7）歲。2 組患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（χ2=0.022，P=0.881；t=0.001，P=1.000）。本研究經北京市第一中西醫結合醫院倫理委員會批準。
1.2 主要試劑
本研究的主要試劑包括：RNA 提取試劑盒（北京 Qiagen 公司，批號為 20170110），實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）試劑盒（日本 Taraka 公司，批號為 RR036Q），兔抗人 SDF-1 和 CXCR4 一抗（碧云天生物科技公司，批號分別為 BAF351 和 FAB173A），辣根過氧化物酶標記羊抗兔 IgG 和免疫組織化學反應試劑盒（碧云天生物科技公司，批號分別為 P0267 和 A7028）。
1.3 方法
1.3.1 組織收集
所有納入對象均進行手術治療，肛周膿腫組患者采取膿腫切排術，取膿腫壁組織，發展為肛瘺的患者刮取瘺管壁組織；混合痔組患者取混合痔組織。所有患者均經組織病理學檢查確診。組織采集后部分置于–80 ℃ 保存，另一部分用 4% 多聚甲醛固定待測。
1.3.2 qRT-PCR 法檢測組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達
采用 RNA 提取試劑盒提取組織中的總 RNA，測定其純度后，采用反轉錄試劑盒將 RNA 反轉錄為 cDNA。SDF-1 引物序列：上游引物，3′-TACAGATGCCC-ATGCCGA-5′；下游引物，3′-CTGAAGGGCACAGTTTGGAG-5′，擴增產物長度為 283 bp。CXCR4 引物序列：上游引物，3′-GGCAGCAGGTAGCAAAGTGACGC-5′；下游引物，3′-AGAGGAGGTCGGCCACTGACA-5′，擴增產物長度為 439 bp。GAPDH 引物序列：上游引物，5′-CATCACCATCTTCCAGGAGCG-3′，下游引物，5′-TGACCTTGCCCACAGCCTTG-3′，擴增產物長度為 152 bp。qRT-PCR 反應體系共 10 μL：SYBR 反應液 5 μL，cDNA 樣品 1 μL，上下游引物各 0.3 μL，ddH2O 3.4 μL。于 PCR 儀器中行擴增反應，程序設定為：95 ℃ 初始變性 10 min；95 ℃ 變性 15 s，60 ℃ 退火 60 s，40 個循環。每個樣品均設定 3 次重復檢測，計算平均值。以 GAPDH 作為內參，以 2–ΔΔCq法計算 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的相對表達量[5]。
1.3.3 免疫組織化學方法檢測 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達
所有組織經 4% 多聚甲醛固定后進行脫水、透明、浸蠟及石蠟包埋，制備 3 μm 石蠟切片，經脫蠟及水合后，用檸檬酸鈉行抗原修復，以過氧化氫消除內源性過氧化酶后，于 10% 山羊血清中封閉 30 min，于 4 ℃ 條件下用 SDF-1 及 CXCR4 一抗過夜孵育切片。以 PBS 孵育的切片作為陰性對照。PBS 清洗后，將山羊抗兔 IgG 二抗室溫下孵育切片 1 h。PBS 洗滌 3 次，DAB 顯色后在光鏡下觀察蛋白染色情況，陽性染色為細胞質呈棕黃色。采用雙盲法對細胞染色比例及染色程度進行判定，染色細胞比例為 0～10%，標記為“–”；染色細胞比例為 10%～20%，染色弱至中等，標記為“+”；染色細胞比例為 10%～20%，染色強，標記為“++”；染色細胞比例>50%，或染色細胞比例為 21%～50% 而染色強，標記為“+++”。其中，（–）定義為陰性表達，（+）、（++）和（+++）定義為陽性表達[6]。
1.4 隨訪
所有患者術后采用電話或復診方式進行隨訪，術后隨訪 12 個月，以影像學結合病理學活檢的方式對患者的預后進行評定。預后不良為術后 12 個月內病情復發，如肛周膿腫患者進展為肛瘺或混合痔進展為脫肛。
1.5 統計學方法
采用統計學軟件 SPSS 22.0 進行數據分析。計量資料以均數±標準差（±s）描述，2 組間比較行成組 t 檢驗；計數資料采用例（%）進行描述，統計方法采用成組 χ2 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 2 組病灶組織中 SDF-1 和 CXCR4 mRNA 及其蛋白的表達
qRT-PCR 結果顯示，肛周膿腫組組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達水平均相應高于混合痔組組織，差異均有統計學意義（P<0.05），具體見表 1。免疫組織化學染色結果（圖 1）顯示，肛周膿腫組組織中 SDF-1 蛋白的表達陽性率為 61.7%（29/47），CXCR4 蛋白的表達陽性率為 53.2%（25/47），相應高于混合痔組的 20.7%（12/58）和 17.2%（10/58），差異均有統計學意義（χ2=18.348，P<0.001；χ2=15.099，P<0.001）。2 組病灶組織中 SDF-1 和 CXCR4 蛋白的具體表達情況見表 2。
表1
2 組病灶組織中 SDF-1 mRNA 和 CXCR4 mRNA 的表達水平（）
圖1
示 2 組病灶組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達（SP ×400）
a：肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白的表達；b：混合痔組織中 SDF-1 蛋白的表達；c：肛周膿腫壁組織中 CXCR4 蛋白的表達；d：混合痔組織中 CXCR4 蛋白的表達
表2
2 組病灶組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達（例）
2.2 肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與患者臨床病理學特征的關系
肛周膿腫患者組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與患者的性別、年齡、膿腫位置及病程均無關（P>0.05），但與膿腫直徑、愈合時間及肛瘺均有關（P<0.05）。膿腫直徑≥5 cm、愈合時間≥4 周和肛瘺患者肛周膿腫組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的陽性表達率均相應高于膿腫直徑<5 cm、愈合時間<4 周和非肛瘺患者（P<0.05），具體見表 3。
表3
肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與臨床病理學特征的關系（例）
2.3 肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與復發的關系
肛周膿腫患者均進行隨訪，無失訪者，隨訪時間均為 12 個月。術后復發 10 例，未復發 37 例，術后未復發率為 78.7%。其中，SDF-1 蛋白陽性組的術后未復發率為 69.0%，SDF-1 蛋白陰性組為 94.4%。CXCR4 蛋白陽性組的術后未復發率為 64.0%，CXCR4 蛋白陰性組為 95.5%。SDF-1 蛋白陰性組和 CXCR4 蛋白陰性組的術后未復發率均相應低于 SDF-1 蛋白陽性組及 CXCR4 蛋白陽性組，差異均有統計學意義（P<0.05），具體見表 4。
表4
肛周膿腫壁組織中 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與復發的關系
3 討論
肛周膿腫屬于臨床常見的急性化膿性感染疾病之一，目前對于該病的感染機制已進行了大量研究，但分子機制研究較少。部分研究顯示，肛周膿腫組織與正常組織間炎性分子蛋白表達的差異可能是導致發病的重要因素[8-10]，因此探究新的差異表達蛋白是研究肛周膿腫分子發生機制的重要途徑。SDF-1 屬于 CXC 趨化因子家族成員，CXCR4 為 SDF-1 的特異性受體，兩者結合后促使細胞間的信號傳遞及細胞轉移，進而參與多種疾病的發生和發展[11-13]。據文獻[14]報道，在關節炎骨滑膜細胞中，SDF-1 蛋白表達上調后可促使炎性因子水平升高，進而高表達 CXCR4 蛋白，提示 SDF-1/CXCR4 通路在關節炎的發生中發揮重要作用。此外，SDF-1/CXCR4 蛋白表達上調與肺炎的發生有關，而抑制 CXCR4 蛋白的表達后可顯著減輕肺部的炎癥反應[15-16]。臨床研究[17]顯示，潰瘍性結腸炎患者外周血中 SDF-1 mRNA 及 CD4+CXCR4+T 淋巴細胞比例均顯著高于正常者，且與腸道病變的嚴重程度密切相關。近期研究[18-19]發現，細胞 SDF-1/CXCR4 蛋白表達的異常與腸道腫瘤的發生有關。張磊等[18]在結直腸腺癌中研究發現，SDF-1/CXCR4 蛋白表達均上調，且與癌細胞的浸潤轉移有關。陳志京等[19]通過研究發現，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白在結直腸癌中高表達，且可能與結直腸癌的進展和轉移有關。以上研究提示，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白表達水平的升高與腸道炎癥和腫瘤的發生有關。目前，SDF-1 蛋白及其受體 CXCR4 蛋白與肛周膿腫的關系研究較少。
本研究發現，SDF-1 和 CXCR4 的 mRNA 及其蛋白在肛周膿腫患者組織中的表達水平高于混合痔組織，提示 SDF-1 和 CXCR4 的 mRNA 及其蛋白表達的上調可能在肛周膿腫的發生和發展中起重要作用。Ramonell 等[20]研究發現，CXCR4 阻滯劑可減少 CD4+T 細胞衰竭，提高膿毒癥小鼠模型的存活率，表明 CXCR4 蛋白參與膿毒癥的發生和發展。與此相似，本研究發現，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的表達與膿腫直徑、肛瘺發生和愈合時間有關，提示 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白可能參與肛周膿腫的病理進展過程。盡管 SDF-1 和 CXCR4 分子在肛周膿腫發生和發展中的作用尚不明確，但有研究[21]表明，血液中 SDF-1 和 CXCR4 蛋白水平升高后可以招募大量炎性因子，從而加重手術感染患者的病情，引發敗血癥。另有研究[22]發現，SDF-1 和 CXCR4 蛋白可能通過調控腫瘤免疫監視進而促進腫瘤細胞的增殖、遷移和組織侵襲。根據以上研究推測，SDF-1 和 CXCR4 蛋白水平升高后可能通過促進炎癥反應，參與肛周膿腫感染的發生。
膿腫復發及演變為肛瘺給肛周膿腫患者的生活帶來嚴重困擾。研究[23]表明，30% 的肛周膿腫患者術后發展為肛瘺。因此，探尋影響肛周膿腫患者術后復發的機制，對疾病預后的改善具有重要的臨床意義。Weixler 等[24]研究發現，CXCR4 蛋白與結直腸癌患者疾病進展為晚期和不良預后有關，CXCR4 蛋白低表達者的生存率高于高表達者。膿毒癥患者的血清 SDF-1 蛋白濃度明顯升高，且與存活率顯著相關[25]。這些研究提示，SDF-1 和 CXCR4 蛋白的表達情況可能影響患者的預后。本研究發現，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白陽性表達者的術后復發率高于陰性表達患者，表明 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白的陽性表達與肛周膿腫的復發有關，提示 SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白可能是肛周膿腫患者預后的生物標志物及潛在治療靶標。
綜上所述，SDF-1 和 CXCR4 分子在肛周膿腫患者局部組織中的表達上調，且兩者的表達均與膿腫直徑、愈合時間、肛瘺以及復發有關。而探究肛周膿腫的發生機制，對疾病的靶向治療方式以及術后復發預防均具有重要的臨床意義，本研究具有一定的參考價值。然而，本研究還存在一些局限性值得進一步討論。首先，本研究所納入的樣本量較少，SDF-1 蛋白和 CXCR4 蛋白表達及預后的關系需要在更大隊列中進行驗證。其次，本研究僅選擇混合痔患者組織作為對照，而對其他肛部疾病組織中的表達情況未做探討，后續需進一步分析 SDF-1 和 CXCR4 分子在其他肛腸疾病中的作用。第三，本研究雖從臨床角度對基礎實驗結論進行分析總結，但 SDF-1 和 CXCR4 分子的高表達受較多因素的影響，因此可能需要聯合其他指標預測肛周膿腫復發，以提高預測靈敏度和準確度。最后，在后續研究中，需要在肛周膿腫中評估 SDF-1 和 CXCR4 分子的預后價值，以期闡明其與疾病發生的潛在關系。
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作者貢獻聲明：郝治主要負責研究設計、試驗設計、數據收集、討論分析和論文撰寫；甄宏博主要負責數據統計和核對，檢測所測得數據的真實性；龔海峰主任主要負責論文質量控制和預審查看，并負責通訊事宜。
倫理聲明：本研究已通過北京市第一中西醫結合醫院的倫理審核批準。
