引用本文： 張立超, 曹慧芳, 王晨宇, 劉博, 周元龍, 康建省, 侯森林, 喬占英, 劉懷軍. MK-801對梗阻性黃疸大鼠中樞神經抗氧化應激系統的影響. 中國普外基礎與臨床雜志, 2016, 23(4): 411-415. doi: 10.7507/1007-9424.20160110 復制
梗阻性黃疸是指因膽總管結石[1]、膽管狹窄或膽管癌等良[2]、惡性疾病[3]引起的膽管系統阻塞，導致膽汁排泄受阻而使膽紅素返流入血引起的黃疸[4]。膽紅素在腦組織內沉積后導致腦細胞水腫的原因可能是其抑制了神經元的能量代謝[5]。而地卓西平馬來酸鹽（MK-801）作為非競爭性谷氨酸受體拮抗劑，能降低氧化應激反應引起的腦損傷。本研究擬通過氧化應激反應標志物及機體抗氧化應激損傷的酶來類判斷梗阻性黃疸時中樞神經系統的自我保護機理及MK-801在其中所起的作用。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
實驗動物健康雄性SD大鼠共20只，由河北醫科大學實驗動物中心提供，鼠齡6周，體質量250～300 g，人工晝夜各12 h，常規攝食及飲水，所有大鼠適應性喂養1周后再進行實驗。20只大鼠依隨機數字表法隨機分為假手術組、對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組共4組，每組5只。
1.2 主要材料、試劑及儀器
直接膽紅素（DBIL）、總膽汁酸（TBA）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）及總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒均購自南京建成生物科技有限公司。
1.3 模型制作
大鼠術前禁食12 h，禁水4 h[6]。給予氯胺酮（20 mg/kg）腹腔注射麻醉成功后，取上腹正中切口約1 cm長，進腹后于近肝門處找到膽總管。對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組大鼠在距十二指腸上緣1 cm處用6-0 VICRYL可吸收線雙重結扎膽總管，于結扎線中間切斷膽總管[7]；假手術組只游離膽總管但不結扎、不切斷[8]。從術后第1天起，MK-801低劑量組大鼠腹腔注射MK-801的劑量為0.025 mg/（kg·d），MK-801高劑量組大鼠腹腔注射MK-801的劑量為0.25 mg/（kg·d），連續注射10 d；假手術組和對照組以等容量生理鹽水同時點注射。對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組為梗阻性黃疸（obstructive jaundice，OJ）組。建模3 d后于4組大鼠尾靜脈取血1～2 mL，肝素抗凝，2 000 r/min離心15 min（r=12 cm）分離血漿，檢測血TBA和DBIL濃度。模型制作成功后第10天取材行進一步實驗檢查。
1.4 取材
實驗動物處死前禁食12 h，次日用20%烏拉坦（0.12 g/100 g）腹腔注射麻醉，第11天，脫臼法處死大鼠后獲取大腦組織，切取的大腦組織用4℃預冷生理鹽水沖洗后，立即置于液氮中，然后于-80℃保存待檢。
1.5 檢測指標及方法
1.5.1 DBIL及TBA檢測
均采用Olmypus全自動生化分析儀進行檢測。
1.5.2 腦組織中MDA含量測定
實驗操作嚴格按照丙二醛試劑盒說明書進行。結果以每毫克樣本蛋白含有的MDA的納摩爾數表示（nmol/mg prot）。
1.5.3 腦組織中T-AOC測定
實驗操作嚴格按照T-AOC試劑盒說明書進行。結果以每毫克樣本蛋白含有的抗氧化物質單位表示（U/mg prot）。
1.5.4 腦組織中CAT活性測定
實驗操作嚴格按照CAT試劑盒說明書進行，以每毫克組織蛋白每秒鐘分解1μmol的H2O2所消耗的CAT的量定義為一個活性單位，結果以每克樣本蛋白含有的酶的單位表示（U/g prot）。
1.5.5 腦組織中T-SOD活性測定
實驗操作嚴格按照T-SOD試劑盒說明書進行。以每毫克組織蛋白在1 mL反應液中T-SOD的抑制率達到50%時所對應的T-SOD的量定為1個T-SOD活性單位（U），結果則以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位表示（U/mg prot）。
1.6 統計學方法
應用SPSS 19.0統計學軟件進行統計學分析。實驗數據采用均數±標準差（
2 結果
2.1 梗阻性黃疸大鼠模型的建立
假手術組實驗鼠術后當日即恢復飲食及自由活動，小便淡黃，大便黃硬。OJ組（對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組）大鼠術后第2天出現尾尖、耳部等皮膚較薄的部位黃染，并逐漸出現全身黃染，尿液深黃，活動減少，步態不穩，反應遲緩。術后第10天取大腦皮質標本時剖開腹腔，見梗阻性黃疸大鼠近肝側膽總管擴張，肝臟彌漫性腫大，呈黃褐色。
2.2 DBIL和TBA含量檢測結果
術后第3天，對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組大鼠的DBIL及TBA濃度均明顯高于假手術組（P < 0.01），但對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組之間DBIL濃度的差異無統計學意義（P > 0.05）。該結果提示梗阻性黃疸模型成功建立（表 1）。
表1
術后第3天血漿中DBIL和TBA含量檢測結果（2.3 氧化應激損傷及抗氧化應激反應相關標志物檢測結果
2.3.1 MDA含量檢測結果
對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組腦組織中MDA含量均明顯高于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組MDA含量則明顯低于對照組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組間MDA含量的差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
表2
4組大鼠腦組織中各氧化指標檢測結果（2.3.2 T-AOC檢測結果
對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組腦組織中T-AOC含量均明顯高于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的T-AOC又明顯高于對照組（P < 0.05），但MK-801低劑量組和MK-801高劑量組間T-AOC的差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
2.3.3 T-SOD活性檢測結果
對照組腦組織中T-SOD活性明顯低于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組T-SOD活性則明顯高于對照組（P < 0.05），MK-801高劑量組T-SOD活性高于對照組但低于MK-801低劑量組（P < 0.05）。見表 2。
3.3.4 CAT活性檢測結果
對照組腦組織中CAT活性低于假手術組（P < 0.05），而MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的CAT活性明顯高于假手術組及對照組（P < 0.05）；MK-801高劑量組CAT活性較MK-801低劑量組有所下降，但差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
3 討論
梗阻性黃疸在普通外科學中是一種很常見的臨床癥狀群[9]，可引起大量組織及器官的損害[10]，而關于梗阻性黃疸對于中樞神經系統氧化應激損傷的研究也在增多[11]。研究[12]發現，梗阻性黃疸時的高膽紅素血癥對神經細胞有較強的毒性作用，并可以引起中樞神經細胞的氧化應激損傷。梗阻性黃疸時，血清DBIL顯著升高，且比間接膽紅素升高明顯，最終膽紅素在皮膚等部位沉積。TBA[13]由甘氨酸或牛磺酸在肝臟內合成，正常情況下，血液中膽汁酸含量極微，當肝內外膽管發生梗阻時，由于膽管內的壓力增大，膽汁排入腸管受阻，膽汁反流入血，進入體循環，血液中TBA濃度就會升高。因此，血清TBA在梗阻性黃疸檢測指標中其敏感性較高[14]。
本研究通過結扎膽總管，發現術后3 d時血液中DBIL和TBA的濃度較假手術組明顯上升，且結合膽總管結扎組大鼠尿色進行性加深等情況，表明梗阻性黃疸模型建立成功。
梗阻性黃疸可以導致大鼠大腦中直接和間接氧化應激標志物的增高或降低，有研究[15]證實了梗阻性黃疸大鼠腦的氧負離子的增加。O2-的形成是氧分子與電子系列反應的第一步，這些反應最終生成了活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）。一氧化氮與它反應生成的過氧硝酸鹽也是一種很重要的活性自由基簇[16]。有研究[17]發現了梗阻性黃疸和大鼠大腦氧化應激之間的相關性，指出氧化應激是膽紅素介導的腦病的一個重要機理。而大腦中的超氧化物自由基也隨梗阻發生時間的延長而增加[18]。在梗阻性黃疸大鼠模型中[19]，證實了在黃疸發生5 d時即出現了還原性谷胱甘肽和硫醇蛋白的降低，同時有二硫蛋白和脂質過氧化物的上升。
膽紅素的神經毒性與進入中樞神經系統的游離膽紅素水平及暴露時間有關[20]，隨著暴露時間的延長及膽紅素濃度的增加，膽紅素毒性作用加重，神經毒害越嚴重[21]。研究[22]發現，間接膽紅素可導致人腦微血管上皮細胞株的生存力下降，且隨著對間接膽紅素暴露時間的延長，機體通過上調相關保護蛋白β-catenin和caveolin-1的表達，從而對機體產生保護作用。
本研究選擇大腦皮質作為研究組織是因為已有研究[17]發現，梗阻性黃疸時腦皮質比小腦和下丘腦的脂質過氧化更容易發生。膽總管結扎的大鼠模型中，氧負離子的增加最明顯的是在大腦皮質，其次是中腦，小腦幾乎沒有。同時，也有研究[23-24]指出，在衰老和毒性作用的動物模型中，皮質區的氧化應激也比小腦和下丘腦更為明顯。氧化產物和脂質過氧化的區域性差異可能是由于這些區域所含的鐵成分不同所致，而這又影響了氧自由基的產生。大腦的不同部位，如皮質、紋狀體和海馬區富含非血紅素鐵，而這可催化產生自由基[25]。其余的一些研究在皮質區檢測出高含量的谷胱甘肽，含量比其他部位要高，提示神經元和星形膠質細胞代謝狀態及血腦屏障的通透性差異導致。
本研究應用0.025 mg/（kg·d）作為MK-801的低劑量是因為有研究[26]發現，大鼠在這個劑量時可以不顯示出明顯的行為障礙。本研究選擇了4個指標來研究大腦的氧化應激反應，它們在機體氧化應激反應中都有著不同的作用和意義。①MDA為脂質過氧化物的最終產物，也是氧化應激損傷標志物之一[27]，其含量可反映機體內細胞損傷的程度，因檢測方便易行，目前應用較廣。②SOD是機體細胞內重要內生性的使機體免受氧自由基損害的主要防御酶，可清除自由基。SOD存在于線粒體（Mn-SOD）和細胞質（Cu/Zn-SOD）中[28]，可催化超氧自由基轉化為H2O2和O2，保護機體免受氧化應激損傷。MDA水平的高低可以間接反映機體細胞受到自由基攻擊時發生脂質過氧化的嚴重程度，而SOD的活力高低可以反映機體清除氧自由基的能力。本研究發現，對照組SOD含量比假手術組明顯降低，可能與抗氧化物質消耗過多及抗氧化酶屬于蛋白質，易受到自由基攻擊而失活有關[29]。③T-AOC是機體內的各種抗氧化物抗氧化活力的總水平，可清楚地顯示機體抗氧化防御能力的高低，并且比測定單一的抗氧化酶或抗氧化小分子能更好地反映機體的抗氧化狀態。④CAT廣泛存在于生物組織的過氧化物酶，它主要是通過催化H2O2生成H2O和O2，從而阻止H2O2對組織及細胞的損害，同時該酶對OH也具有清除作用，防止自由基對細胞的損傷，構成機體的第一道抗氧化應激損傷的防線。
因此，測定MDA水平、T-SOD活性、CAT及T-AOC 4個指標，可以反映機體脂質過氧化的程度以及機體清除自由基的能力。所以本研究將MDA、T-SOD、T-AOC及CAT 4個指標作為觀察指標。其結果顯示：與假手術組相比，對照組MDA水平升高，T-SOD及CAT降低，但T-AOC活性增加，提示梗阻性黃疸時機體存在氧化應激損傷，使機體產生了抗氧化應激反應。與對照組相比，MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的MDA含量降低，而抗氧化應激指標CAT、T-SOD和T-AOC則相應升高，提示MK-801可以通過一系列反應降低機體的氧化應激損傷，并提供機體抗氧化應激損傷能力。
本研究還發現，MK-801高、低劑量組相比，MDA、CAT和T-AOC檢測結果的差異均無統計學意義，但高劑量組的T-SOD卻明顯降低，提示在梗阻性黃疸時，高低劑量的MK-801均可提高自身的抗氧化應激損傷反應能力，但高劑量組效果卻沒有相應上升，反而某些指標有所下降，這有可能與MK-801引起的機體副反應有關。
本研究也發現，梗阻性黃疸發生時，中樞神經系統的T-SOD和CAT水平下降，但是總體抗氧化能力卻增強，可能有其他反映氧化應激的指標未被檢測，下一步研究可采用蛋白質類氧化應激損傷標志物如硝基酪氨酸（NT）、-SH產物，以及晚期氧化蛋白產物（AOPP）或者應用核酸和染色體的氧化應激損傷標志物如8-羥基脫氧鳥苷（8-OHDG）等來檢測氧化應激損傷，并且檢測HO-1、NQO1等指標以明確機體抗氧化應激損傷能力。
梗阻性黃疸是指因膽總管結石[1]、膽管狹窄或膽管癌等良[2]、惡性疾病[3]引起的膽管系統阻塞，導致膽汁排泄受阻而使膽紅素返流入血引起的黃疸[4]。膽紅素在腦組織內沉積后導致腦細胞水腫的原因可能是其抑制了神經元的能量代謝[5]。而地卓西平馬來酸鹽（MK-801）作為非競爭性谷氨酸受體拮抗劑，能降低氧化應激反應引起的腦損傷。本研究擬通過氧化應激反應標志物及機體抗氧化應激損傷的酶來類判斷梗阻性黃疸時中樞神經系統的自我保護機理及MK-801在其中所起的作用。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
實驗動物健康雄性SD大鼠共20只，由河北醫科大學實驗動物中心提供，鼠齡6周，體質量250～300 g，人工晝夜各12 h，常規攝食及飲水，所有大鼠適應性喂養1周后再進行實驗。20只大鼠依隨機數字表法隨機分為假手術組、對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組共4組，每組5只。
1.2 主要材料、試劑及儀器
直接膽紅素（DBIL）、總膽汁酸（TBA）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）及總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒均購自南京建成生物科技有限公司。
1.3 模型制作
大鼠術前禁食12 h，禁水4 h[6]。給予氯胺酮（20 mg/kg）腹腔注射麻醉成功后，取上腹正中切口約1 cm長，進腹后于近肝門處找到膽總管。對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組大鼠在距十二指腸上緣1 cm處用6-0 VICRYL可吸收線雙重結扎膽總管，于結扎線中間切斷膽總管[7]；假手術組只游離膽總管但不結扎、不切斷[8]。從術后第1天起，MK-801低劑量組大鼠腹腔注射MK-801的劑量為0.025 mg/（kg·d），MK-801高劑量組大鼠腹腔注射MK-801的劑量為0.25 mg/（kg·d），連續注射10 d；假手術組和對照組以等容量生理鹽水同時點注射。對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組為梗阻性黃疸（obstructive jaundice，OJ）組。建模3 d后于4組大鼠尾靜脈取血1～2 mL，肝素抗凝，2 000 r/min離心15 min（r=12 cm）分離血漿，檢測血TBA和DBIL濃度。模型制作成功后第10天取材行進一步實驗檢查。
1.4 取材
實驗動物處死前禁食12 h，次日用20%烏拉坦（0.12 g/100 g）腹腔注射麻醉，第11天，脫臼法處死大鼠后獲取大腦組織，切取的大腦組織用4℃預冷生理鹽水沖洗后，立即置于液氮中，然后于-80℃保存待檢。
1.5 檢測指標及方法
1.5.1 DBIL及TBA檢測
均采用Olmypus全自動生化分析儀進行檢測。
1.5.2 腦組織中MDA含量測定
實驗操作嚴格按照丙二醛試劑盒說明書進行。結果以每毫克樣本蛋白含有的MDA的納摩爾數表示（nmol/mg prot）。
1.5.3 腦組織中T-AOC測定
實驗操作嚴格按照T-AOC試劑盒說明書進行。結果以每毫克樣本蛋白含有的抗氧化物質單位表示（U/mg prot）。
1.5.4 腦組織中CAT活性測定
實驗操作嚴格按照CAT試劑盒說明書進行，以每毫克組織蛋白每秒鐘分解1μmol的H2O2所消耗的CAT的量定義為一個活性單位，結果以每克樣本蛋白含有的酶的單位表示（U/g prot）。
1.5.5 腦組織中T-SOD活性測定
實驗操作嚴格按照T-SOD試劑盒說明書進行。以每毫克組織蛋白在1 mL反應液中T-SOD的抑制率達到50%時所對應的T-SOD的量定為1個T-SOD活性單位（U），結果則以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位表示（U/mg prot）。
1.6 統計學方法
應用SPSS 19.0統計學軟件進行統計學分析。實驗數據采用均數±標準差（
2 結果
2.1 梗阻性黃疸大鼠模型的建立
假手術組實驗鼠術后當日即恢復飲食及自由活動，小便淡黃，大便黃硬。OJ組（對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組）大鼠術后第2天出現尾尖、耳部等皮膚較薄的部位黃染，并逐漸出現全身黃染，尿液深黃，活動減少，步態不穩，反應遲緩。術后第10天取大腦皮質標本時剖開腹腔，見梗阻性黃疸大鼠近肝側膽總管擴張，肝臟彌漫性腫大，呈黃褐色。
2.2 DBIL和TBA含量檢測結果
術后第3天，對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組大鼠的DBIL及TBA濃度均明顯高于假手術組（P < 0.01），但對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組之間DBIL濃度的差異無統計學意義（P > 0.05）。該結果提示梗阻性黃疸模型成功建立（表 1）。
表1
術后第3天血漿中DBIL和TBA含量檢測結果（2.3 氧化應激損傷及抗氧化應激反應相關標志物檢測結果
2.3.1 MDA含量檢測結果
對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組腦組織中MDA含量均明顯高于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組MDA含量則明顯低于對照組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組間MDA含量的差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
表2
4組大鼠腦組織中各氧化指標檢測結果（2.3.2 T-AOC檢測結果
對照組、MK-801低劑量組和MK-801高劑量組腦組織中T-AOC含量均明顯高于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的T-AOC又明顯高于對照組（P < 0.05），但MK-801低劑量組和MK-801高劑量組間T-AOC的差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
2.3.3 T-SOD活性檢測結果
對照組腦組織中T-SOD活性明顯低于假手術組（P < 0.05）；MK-801低劑量組T-SOD活性則明顯高于對照組（P < 0.05），MK-801高劑量組T-SOD活性高于對照組但低于MK-801低劑量組（P < 0.05）。見表 2。
3.3.4 CAT活性檢測結果
對照組腦組織中CAT活性低于假手術組（P < 0.05），而MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的CAT活性明顯高于假手術組及對照組（P < 0.05）；MK-801高劑量組CAT活性較MK-801低劑量組有所下降，但差異無統計學意義（P > 0.05）。見表 2。
3 討論
梗阻性黃疸在普通外科學中是一種很常見的臨床癥狀群[9]，可引起大量組織及器官的損害[10]，而關于梗阻性黃疸對于中樞神經系統氧化應激損傷的研究也在增多[11]。研究[12]發現，梗阻性黃疸時的高膽紅素血癥對神經細胞有較強的毒性作用，并可以引起中樞神經細胞的氧化應激損傷。梗阻性黃疸時，血清DBIL顯著升高，且比間接膽紅素升高明顯，最終膽紅素在皮膚等部位沉積。TBA[13]由甘氨酸或牛磺酸在肝臟內合成，正常情況下，血液中膽汁酸含量極微，當肝內外膽管發生梗阻時，由于膽管內的壓力增大，膽汁排入腸管受阻，膽汁反流入血，進入體循環，血液中TBA濃度就會升高。因此，血清TBA在梗阻性黃疸檢測指標中其敏感性較高[14]。
本研究通過結扎膽總管，發現術后3 d時血液中DBIL和TBA的濃度較假手術組明顯上升，且結合膽總管結扎組大鼠尿色進行性加深等情況，表明梗阻性黃疸模型建立成功。
梗阻性黃疸可以導致大鼠大腦中直接和間接氧化應激標志物的增高或降低，有研究[15]證實了梗阻性黃疸大鼠腦的氧負離子的增加。O2-的形成是氧分子與電子系列反應的第一步，這些反應最終生成了活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）。一氧化氮與它反應生成的過氧硝酸鹽也是一種很重要的活性自由基簇[16]。有研究[17]發現了梗阻性黃疸和大鼠大腦氧化應激之間的相關性，指出氧化應激是膽紅素介導的腦病的一個重要機理。而大腦中的超氧化物自由基也隨梗阻發生時間的延長而增加[18]。在梗阻性黃疸大鼠模型中[19]，證實了在黃疸發生5 d時即出現了還原性谷胱甘肽和硫醇蛋白的降低，同時有二硫蛋白和脂質過氧化物的上升。
膽紅素的神經毒性與進入中樞神經系統的游離膽紅素水平及暴露時間有關[20]，隨著暴露時間的延長及膽紅素濃度的增加，膽紅素毒性作用加重，神經毒害越嚴重[21]。研究[22]發現，間接膽紅素可導致人腦微血管上皮細胞株的生存力下降，且隨著對間接膽紅素暴露時間的延長，機體通過上調相關保護蛋白β-catenin和caveolin-1的表達，從而對機體產生保護作用。
本研究選擇大腦皮質作為研究組織是因為已有研究[17]發現，梗阻性黃疸時腦皮質比小腦和下丘腦的脂質過氧化更容易發生。膽總管結扎的大鼠模型中，氧負離子的增加最明顯的是在大腦皮質，其次是中腦，小腦幾乎沒有。同時，也有研究[23-24]指出，在衰老和毒性作用的動物模型中，皮質區的氧化應激也比小腦和下丘腦更為明顯。氧化產物和脂質過氧化的區域性差異可能是由于這些區域所含的鐵成分不同所致，而這又影響了氧自由基的產生。大腦的不同部位，如皮質、紋狀體和海馬區富含非血紅素鐵，而這可催化產生自由基[25]。其余的一些研究在皮質區檢測出高含量的谷胱甘肽，含量比其他部位要高，提示神經元和星形膠質細胞代謝狀態及血腦屏障的通透性差異導致。
本研究應用0.025 mg/（kg·d）作為MK-801的低劑量是因為有研究[26]發現，大鼠在這個劑量時可以不顯示出明顯的行為障礙。本研究選擇了4個指標來研究大腦的氧化應激反應，它們在機體氧化應激反應中都有著不同的作用和意義。①MDA為脂質過氧化物的最終產物，也是氧化應激損傷標志物之一[27]，其含量可反映機體內細胞損傷的程度，因檢測方便易行，目前應用較廣。②SOD是機體細胞內重要內生性的使機體免受氧自由基損害的主要防御酶，可清除自由基。SOD存在于線粒體（Mn-SOD）和細胞質（Cu/Zn-SOD）中[28]，可催化超氧自由基轉化為H2O2和O2，保護機體免受氧化應激損傷。MDA水平的高低可以間接反映機體細胞受到自由基攻擊時發生脂質過氧化的嚴重程度，而SOD的活力高低可以反映機體清除氧自由基的能力。本研究發現，對照組SOD含量比假手術組明顯降低，可能與抗氧化物質消耗過多及抗氧化酶屬于蛋白質，易受到自由基攻擊而失活有關[29]。③T-AOC是機體內的各種抗氧化物抗氧化活力的總水平，可清楚地顯示機體抗氧化防御能力的高低，并且比測定單一的抗氧化酶或抗氧化小分子能更好地反映機體的抗氧化狀態。④CAT廣泛存在于生物組織的過氧化物酶，它主要是通過催化H2O2生成H2O和O2，從而阻止H2O2對組織及細胞的損害，同時該酶對OH也具有清除作用，防止自由基對細胞的損傷，構成機體的第一道抗氧化應激損傷的防線。
因此，測定MDA水平、T-SOD活性、CAT及T-AOC 4個指標，可以反映機體脂質過氧化的程度以及機體清除自由基的能力。所以本研究將MDA、T-SOD、T-AOC及CAT 4個指標作為觀察指標。其結果顯示：與假手術組相比，對照組MDA水平升高，T-SOD及CAT降低，但T-AOC活性增加，提示梗阻性黃疸時機體存在氧化應激損傷，使機體產生了抗氧化應激反應。與對照組相比，MK-801低劑量組和MK-801高劑量組的MDA含量降低，而抗氧化應激指標CAT、T-SOD和T-AOC則相應升高，提示MK-801可以通過一系列反應降低機體的氧化應激損傷，并提供機體抗氧化應激損傷能力。
本研究還發現，MK-801高、低劑量組相比，MDA、CAT和T-AOC檢測結果的差異均無統計學意義，但高劑量組的T-SOD卻明顯降低，提示在梗阻性黃疸時，高低劑量的MK-801均可提高自身的抗氧化應激損傷反應能力，但高劑量組效果卻沒有相應上升，反而某些指標有所下降，這有可能與MK-801引起的機體副反應有關。
本研究也發現，梗阻性黃疸發生時，中樞神經系統的T-SOD和CAT水平下降，但是總體抗氧化能力卻增強，可能有其他反映氧化應激的指標未被檢測，下一步研究可采用蛋白質類氧化應激損傷標志物如硝基酪氨酸（NT）、-SH產物，以及晚期氧化蛋白產物（AOPP）或者應用核酸和染色體的氧化應激損傷標志物如8-羥基脫氧鳥苷（8-OHDG）等來檢測氧化應激損傷，并且檢測HO-1、NQO1等指標以明確機體抗氧化應激損傷能力。
