引用本文： 陳躍鑫, 王文達, 葉煒, 李天佳, 劉昌偉. 沙格雷酯抑制大鼠頸動脈球囊損傷后內膜增生和平滑肌細胞增殖. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(5): 571-575. doi: 10.7507/1007-9424.20150151 復制
經皮血管腔內成形術（percutaneous transluminal angioplasty，PTA）是目前治療外周動脈疾病的常用手段，盡管無論從產品還是技術方面，PTA已經取得了巨大的進步，但是PTA后血管再狹窄仍然是目前尚未解決的主要問題之一，有文獻[1-3]報道，其發生率仍高達39.0%～74.3%。血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖和遷移是導致新生內膜增生和血管再狹窄的主要原因，在發生再狹窄的過程中，許多細胞因子參與其中并發揮作用，這些細胞因子包括5-羥色胺（serotonin，5-HT）、血管緊張素Ⅱ、內皮素、血小板源性生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）等，這些細胞因子通過細胞表面的受體激活細胞內信號通路，誘導VSMC增殖[4]。沙格雷酯是一種新型的選擇性5-HT2A受體拮抗劑，能抑制5-HT誘導的血小板聚集并抑制血管收縮，可用于改善慢性動脈閉塞癥引起的潰瘍、疼痛、冷感等缺血性癥狀，這一適應證已在國內獲得批準并上市應用[5-6]。同時，作為5-HT受體拮抗劑，沙格雷酯能在體外抑制5-HT誘導的VSMC的增殖[7]，因此可用于降低冠狀動脈支架內再狹窄率，提高其通暢率[8]。在以往的研究[9]中，傳統藥物氯吡格雷被證實能減少血管損傷后的新生內膜增生。但目前尚無研究比較沙格雷酯和傳統藥物氯吡格雷兩種藥物對血管損傷后新生內膜增生、VSMC增殖的影響。增殖細胞核抗原（proliferative cell nuclear antigen，PCNA）是一種相對分子質量為36×103的蛋白質，在細胞核內合成，并存在于細胞核內。PCNA在細胞中的表達可作為評價細胞增殖狀態的一個指標。本研究的目的即利用大鼠頸動脈球囊損傷動物模型，將沙格雷酯組與空白對照組和氯吡格雷組對照，研究其對新生內膜的抑制作用，并通過監測PCNA的表達間接比較VSMC增殖的狀態。
1 材料與方法
本研究為前瞻性隨機對照動物實驗，在研究開始前通過北京協和醫院倫理委員會批準，研究嚴格遵照國家科學技術委員會《實驗動物管理條例》實行。
1.1 實驗動物及材料
1.1.1 動物
實驗選用SPF級健康雄性SD大鼠（n=24），周齡8周，體質量（202±23）g。大鼠均在北京協和醫院動物中心清潔級實驗室飼養。
1.1.2 主要材料
4 F Fogarty球囊導管，上海微創醫療器械有限公司；沙格雷酯（商品名：安步樂克），三菱制藥公司；氯吡格雷（商品名：波利維），賽諾菲安萬特（杭州）制藥有限公司；抗大鼠PCNA單克隆抗體（濃度1∶1 000），艾博抗（上海）貿易有限公司。
1.2 方法
1.2.1 動物分組與用藥
24只大鼠按隨機數字表法被隨機分為3組（空白對照組、沙格雷酯組和氯吡格雷組），每組8只。所有大鼠從術前第7 d開始直到術后第14 d被處死，期間飼喂高脂飲食。術前第7 d開始由專人使用大鼠喂藥器給大鼠飼喂藥物，一直持續到術后第14 d，手術當天不暫停。分組用藥方案為：空白對照組在研究期間不飼喂任何藥物；沙格雷酯組在研究期間每天飼喂沙格雷酯100 mg/kg；氯吡格雷組在研究期間每天飼喂氯吡格雷20 mg/kg。
1.2.2 大鼠頸動脈球囊損傷模型的建立
SD大鼠稱重后，腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉（1 mL/100 g）進行麻醉。麻醉成功后，將大鼠固定于解剖臺上，于大鼠左側頸部做斜形切口，解剖大鼠左側的頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈，分別套阻斷帶備用。向頸總靜脈內注射肝素（200 U/kg）進行全身肝素化，然后依次阻斷頸內動脈和頸總動脈，切開頸外動脈，經過頸外動脈逆行置入4 F Fogarty球囊導管（球囊長度2 cm）至頸總動脈分叉部位近段2 cm處，利用壓力泵以5個大氣壓的壓力分3次球囊擴張頸總動脈，每次擴張時間10 s。取出球囊導管，結扎頸外動脈。關閉頸部切口。
1.2.3 大鼠頸動脈球囊損傷標本取材
上述大鼠繼續飼喂高脂飲食和藥物14 d后，再次進行麻醉（方法同上）。麻醉成功后，固定于操作臺上，從原切口進入，逐層分離，取頸動脈分叉部位下方約2 cm的頸總動脈標本，注意去除脂肪和血管周圍組織。固定于4%的甲醛溶液中。取材完成后，通過頸靜脈注射空氣針，處死大鼠。
1.2.4 標本處理和組織形態學分析
將取材的標本（總長度2 cm）均分為4個部分，每部分0.5 cm，包埋于石蠟中進行切片，厚度5μm。對切片進行HE染色，每個部分觀測兩個切片。每個切片取8個點，觀察內膜、中膜的厚度和面積，內膜增生的程度以內膜和中膜厚度比（內膜厚度/中膜厚度）和內膜和中膜面積比（內膜面積/中膜面積）表達。
1.2.5 免疫組織化學方法檢測平滑肌細胞增殖情況
3%過氧化氫甲醇溶液室溫浸泡標本3次，每次5 min，阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS反復洗脫3次。然后在含有10%非活化馬血清（horse serum，HS）的PBS中室溫下孵育30 min，以減少非特異性結合。PBS反復洗脫3次。以抗大鼠PCNA單克隆抗體〔濃度1∶1 000，艾博抗（上海）貿易有限公司〕的PBS（溶液中含有1.5% HS）在室溫下孵育60 min。再次用PBS反復洗脫3次。然后HE反染色。VSMC中，細胞核染成棕色的細胞被視為PCNA陽性細胞，提示細胞增殖。應用VIDAS計算機圖像分析系統隨機檢測每個切片中8個高倍（×400）視野，測量PCNA陽性細胞吸光度值、個數和VSMC總數，計算VSMC中PCNA陽性細胞率（PCNA陽性細胞數/VSMC總數×100%），并計算各項平均值。
1.3 統計學方法
采用SPSS軟件（Chicago IL，USA，第19版）對數據進行分析。數據用均數±標準差（
2 結果
2.1 組織形態學變化情況
組織形態學分析結果見圖 1和表 1。空白對照組相對于沙格雷酯組和氯吡格雷組，球囊損傷后頸動脈內膜明顯增厚（圖 1）。從表 1可見，頸動脈球囊損傷后第14 d時，中膜的厚度和面積在沙格雷酯組和氯吡格雷組雖均低于空白對照組，但差異并無統計學意義（P > 0.05）。內膜的厚度和面積以及內膜/中膜厚度比和面積比在沙格雷酯組和氯吡格雷組均明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P < 0.001）。沙格雷酯組與空白對照組相比，平均內膜厚度和面積分別減少了75.15%（P < 0.001）和83.72%（P < 0.001），平均內膜/中膜厚度比和平均內膜/中膜面積比分別減少了76.12%（P < 0.001）和84.01%（P < 0.001）；氯吡格雷酯組與空白對照組相比，平均內膜厚度和平均內膜面積分別減少了72.79%（P < 0.001）和81.40%（P < 0.001），平均內膜/中膜厚度比和平均內膜/中膜面積比分別減少了73.13%（P < 0.001）和81.98%（P < 0.001）。沙格雷酯組與氯吡格雷組比較，各項指標比較差異均無統計學意義（P > 0.05）。
表1
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片的組織形態學分析結果（
圖1
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片HE染色結果。1A：空白對照組（??×200）；1B：沙格雷酯組（??×20）；1C：氯吡格雷組（??×100）。I：內膜；M：中膜；紅色細線：內彈力層；綠色細線：外彈力層
2.2 免疫組織化學染色結果
免疫組織化學檢測結果見表 2。從表 2可見，與空白對照組比較，沙格雷酯組和氯吡格雷組PCNA表達的吸光度值和陽性細胞率均明顯降低（P < 0.001），但沙格雷酯組和氯吡格雷組間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。
表2
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片中PCNA的表達結果（3 討論
VSMC和內皮細胞在保持動脈壁的結構和功能上扮演著重要的角色。當動脈表面的內皮被球囊擴張的過程破壞時，內膜損傷的區域將迅速被血小板黏附聚集覆蓋。活化的血小板釋放包括PDGF和堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）在內的多種生長因子和血管活性物質，促進中膜中的平滑肌細胞開始增殖并向內膜遷移，并合成分泌大量的細胞外基質[10-11]。氯吡格雷能通過抑制血小板功能，減少PDGF、bFGF等的表達[12-13]，減少動脈損傷后動脈壁的病理改變[14-15]，顯著抑制血管損傷的新生內膜增生[16-17]，與本研究結果相符合。
在體外研究和臨床研究[14]中均已經證實，在血管損傷部位，激活了的血小板還能分泌出5-HT，從而使其局部濃度顯著升高。5-HT能經過5-HT2A受體介導直接作用于動脈的VSMC，從而促進VSMC的收縮和增殖，而且5-HT可能同時會上調PDGF、bFGF等其他生長因子和緩激肽等其他血管活性物質，從而進一步促進VSMC的增殖[18-19]。沙格雷酯通過選擇性地拮抗5-HT2A受體，能抑制5-HT誘導的血小板聚集并抑制VSMC收縮和增殖，從而達到減少新生內膜增生的作用[20]；與此同時，5-HT2A受體的抑制可以間接增加5-HT對血管內皮細胞5-HT1B受體的作用，產生更多的一氧化氮從而擴血管、增加血流[21]。本研究結果顯示，與空白對照組相比，沙格雷酯能將球囊損傷后大鼠頸動脈內膜增生厚度降低75.15%（P < 0.001），這與一些已經發表的研究結果[4, 8, 12, 15]是類似的。
PCNA又稱細胞周期蛋白，是一種核內蛋白質，是DNA聚合酶δ的輔助因子，集中分布于增殖細胞有絲分裂的G1晚期和S早期的核仁，參與DNA合成和復制，其合成率與細胞DNA復制直接相關，PCNA表達為細胞進入細胞周期進行DNA復制和分裂增殖所必需，可作為判斷細胞增殖與否的直接而可靠的指標[22]。本研究采用免疫組織化學技術觀察到沙格雷酯組和氯吡格雷組大鼠VSMC中的PCNA表達，無論是PCNA陽性細胞率還是吸光度均顯著低于空白對照組，這種作用是在多種胞內信息傳遞環節的參與下發生的[23-24]。
本研究沿襲了最常采用的小動物頸動脈球囊損傷模型，為了減少年齡與性別對研究結果的影響，本研究中采用了同樣周齡的雄性大鼠。本研究結果顯示，與空白對照組相比，沙格雷酯和氯吡格雷能明顯降低球囊損傷后大鼠頸動脈內膜增生厚度（P < 0.001），而沙格雷酯組與氯吡格雷組相比兩組之間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。
本研究還存在一些局限：①研究的實驗動物數量較少，使統計分析的效能受到影響。②高脂喂養的動物模型，在動脈受到球囊損傷后，其內膜增生的過程和病理生理改變與人類的動脈行球囊擴張或支架后的修復過程尚存在一定的差異。如前者，由于高脂飲食的影響，在內膜下富有大量的脂質沉積，并可見到大量的吞噬脂質的巨噬細胞。因此，本動物模型的結果還不能被不加限制地推廣到人類。③阿司匹林是最傳統的也是最常規使用的抗血小板藥物，也是在諸多實踐指南中被最多地推薦應用于血管成形術后的抗血小板藥物[25]。本研究并沒有將阿司匹林的應用納入到實驗中。事實上，在臨床應用中，雙重抗血小板方案正在越來越廣泛地被應用和接受，這種雙重抗血小板方案可以是阿司匹林聯用氯吡格雷，也可以是阿司匹林聯用沙格雷酯或其他的抗血小板藥物。本研究的結果可能對雙重抗血小板方案的選擇提供一些思路。④本研究中，沒有檢測PDGF等關鍵生長因子的表達情況，尚不清楚在實驗組尤其是沙格雷酯組，PDGF的表達是否受到抑制，與氯吡格雷是否存在差異，這可以作為下一步研究的方向之一。
經皮血管腔內成形術（percutaneous transluminal angioplasty，PTA）是目前治療外周動脈疾病的常用手段，盡管無論從產品還是技術方面，PTA已經取得了巨大的進步，但是PTA后血管再狹窄仍然是目前尚未解決的主要問題之一，有文獻[1-3]報道，其發生率仍高達39.0%～74.3%。血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖和遷移是導致新生內膜增生和血管再狹窄的主要原因，在發生再狹窄的過程中，許多細胞因子參與其中并發揮作用，這些細胞因子包括5-羥色胺（serotonin，5-HT）、血管緊張素Ⅱ、內皮素、血小板源性生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）等，這些細胞因子通過細胞表面的受體激活細胞內信號通路，誘導VSMC增殖[4]。沙格雷酯是一種新型的選擇性5-HT2A受體拮抗劑，能抑制5-HT誘導的血小板聚集并抑制血管收縮，可用于改善慢性動脈閉塞癥引起的潰瘍、疼痛、冷感等缺血性癥狀，這一適應證已在國內獲得批準并上市應用[5-6]。同時，作為5-HT受體拮抗劑，沙格雷酯能在體外抑制5-HT誘導的VSMC的增殖[7]，因此可用于降低冠狀動脈支架內再狹窄率，提高其通暢率[8]。在以往的研究[9]中，傳統藥物氯吡格雷被證實能減少血管損傷后的新生內膜增生。但目前尚無研究比較沙格雷酯和傳統藥物氯吡格雷兩種藥物對血管損傷后新生內膜增生、VSMC增殖的影響。增殖細胞核抗原（proliferative cell nuclear antigen，PCNA）是一種相對分子質量為36×103的蛋白質，在細胞核內合成，并存在于細胞核內。PCNA在細胞中的表達可作為評價細胞增殖狀態的一個指標。本研究的目的即利用大鼠頸動脈球囊損傷動物模型，將沙格雷酯組與空白對照組和氯吡格雷組對照，研究其對新生內膜的抑制作用，并通過監測PCNA的表達間接比較VSMC增殖的狀態。
1 材料與方法
本研究為前瞻性隨機對照動物實驗，在研究開始前通過北京協和醫院倫理委員會批準，研究嚴格遵照國家科學技術委員會《實驗動物管理條例》實行。
1.1 實驗動物及材料
1.1.1 動物
實驗選用SPF級健康雄性SD大鼠（n=24），周齡8周，體質量（202±23）g。大鼠均在北京協和醫院動物中心清潔級實驗室飼養。
1.1.2 主要材料
4 F Fogarty球囊導管，上海微創醫療器械有限公司；沙格雷酯（商品名：安步樂克），三菱制藥公司；氯吡格雷（商品名：波利維），賽諾菲安萬特（杭州）制藥有限公司；抗大鼠PCNA單克隆抗體（濃度1∶1 000），艾博抗（上海）貿易有限公司。
1.2 方法
1.2.1 動物分組與用藥
24只大鼠按隨機數字表法被隨機分為3組（空白對照組、沙格雷酯組和氯吡格雷組），每組8只。所有大鼠從術前第7 d開始直到術后第14 d被處死，期間飼喂高脂飲食。術前第7 d開始由專人使用大鼠喂藥器給大鼠飼喂藥物，一直持續到術后第14 d，手術當天不暫停。分組用藥方案為：空白對照組在研究期間不飼喂任何藥物；沙格雷酯組在研究期間每天飼喂沙格雷酯100 mg/kg；氯吡格雷組在研究期間每天飼喂氯吡格雷20 mg/kg。
1.2.2 大鼠頸動脈球囊損傷模型的建立
SD大鼠稱重后，腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉（1 mL/100 g）進行麻醉。麻醉成功后，將大鼠固定于解剖臺上，于大鼠左側頸部做斜形切口，解剖大鼠左側的頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈，分別套阻斷帶備用。向頸總靜脈內注射肝素（200 U/kg）進行全身肝素化，然后依次阻斷頸內動脈和頸總動脈，切開頸外動脈，經過頸外動脈逆行置入4 F Fogarty球囊導管（球囊長度2 cm）至頸總動脈分叉部位近段2 cm處，利用壓力泵以5個大氣壓的壓力分3次球囊擴張頸總動脈，每次擴張時間10 s。取出球囊導管，結扎頸外動脈。關閉頸部切口。
1.2.3 大鼠頸動脈球囊損傷標本取材
上述大鼠繼續飼喂高脂飲食和藥物14 d后，再次進行麻醉（方法同上）。麻醉成功后，固定于操作臺上，從原切口進入，逐層分離，取頸動脈分叉部位下方約2 cm的頸總動脈標本，注意去除脂肪和血管周圍組織。固定于4%的甲醛溶液中。取材完成后，通過頸靜脈注射空氣針，處死大鼠。
1.2.4 標本處理和組織形態學分析
將取材的標本（總長度2 cm）均分為4個部分，每部分0.5 cm，包埋于石蠟中進行切片，厚度5μm。對切片進行HE染色，每個部分觀測兩個切片。每個切片取8個點，觀察內膜、中膜的厚度和面積，內膜增生的程度以內膜和中膜厚度比（內膜厚度/中膜厚度）和內膜和中膜面積比（內膜面積/中膜面積）表達。
1.2.5 免疫組織化學方法檢測平滑肌細胞增殖情況
3%過氧化氫甲醇溶液室溫浸泡標本3次，每次5 min，阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS反復洗脫3次。然后在含有10%非活化馬血清（horse serum，HS）的PBS中室溫下孵育30 min，以減少非特異性結合。PBS反復洗脫3次。以抗大鼠PCNA單克隆抗體〔濃度1∶1 000，艾博抗（上海）貿易有限公司〕的PBS（溶液中含有1.5% HS）在室溫下孵育60 min。再次用PBS反復洗脫3次。然后HE反染色。VSMC中，細胞核染成棕色的細胞被視為PCNA陽性細胞，提示細胞增殖。應用VIDAS計算機圖像分析系統隨機檢測每個切片中8個高倍（×400）視野，測量PCNA陽性細胞吸光度值、個數和VSMC總數，計算VSMC中PCNA陽性細胞率（PCNA陽性細胞數/VSMC總數×100%），并計算各項平均值。
1.3 統計學方法
采用SPSS軟件（Chicago IL，USA，第19版）對數據進行分析。數據用均數±標準差（
2 結果
2.1 組織形態學變化情況
組織形態學分析結果見圖 1和表 1。空白對照組相對于沙格雷酯組和氯吡格雷組，球囊損傷后頸動脈內膜明顯增厚（圖 1）。從表 1可見，頸動脈球囊損傷后第14 d時，中膜的厚度和面積在沙格雷酯組和氯吡格雷組雖均低于空白對照組，但差異并無統計學意義（P > 0.05）。內膜的厚度和面積以及內膜/中膜厚度比和面積比在沙格雷酯組和氯吡格雷組均明顯低于空白對照組，差異有統計學意義（P < 0.001）。沙格雷酯組與空白對照組相比，平均內膜厚度和面積分別減少了75.15%（P < 0.001）和83.72%（P < 0.001），平均內膜/中膜厚度比和平均內膜/中膜面積比分別減少了76.12%（P < 0.001）和84.01%（P < 0.001）；氯吡格雷酯組與空白對照組相比，平均內膜厚度和平均內膜面積分別減少了72.79%（P < 0.001）和81.40%（P < 0.001），平均內膜/中膜厚度比和平均內膜/中膜面積比分別減少了73.13%（P < 0.001）和81.98%（P < 0.001）。沙格雷酯組與氯吡格雷組比較，各項指標比較差異均無統計學意義（P > 0.05）。
表1
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片的組織形態學分析結果（
圖1
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片HE染色結果。1A：空白對照組（??×200）；1B：沙格雷酯組（??×20）；1C：氯吡格雷組（??×100）。I：內膜；M：中膜；紅色細線：內彈力層；綠色細線：外彈力層
2.2 免疫組織化學染色結果
免疫組織化學檢測結果見表 2。從表 2可見，與空白對照組比較，沙格雷酯組和氯吡格雷組PCNA表達的吸光度值和陽性細胞率均明顯降低（P < 0.001），但沙格雷酯組和氯吡格雷組間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。
表2
大鼠球囊損傷模型頸動脈切片中PCNA的表達結果（3 討論
VSMC和內皮細胞在保持動脈壁的結構和功能上扮演著重要的角色。當動脈表面的內皮被球囊擴張的過程破壞時，內膜損傷的區域將迅速被血小板黏附聚集覆蓋。活化的血小板釋放包括PDGF和堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）在內的多種生長因子和血管活性物質，促進中膜中的平滑肌細胞開始增殖并向內膜遷移，并合成分泌大量的細胞外基質[10-11]。氯吡格雷能通過抑制血小板功能，減少PDGF、bFGF等的表達[12-13]，減少動脈損傷后動脈壁的病理改變[14-15]，顯著抑制血管損傷的新生內膜增生[16-17]，與本研究結果相符合。
在體外研究和臨床研究[14]中均已經證實，在血管損傷部位，激活了的血小板還能分泌出5-HT，從而使其局部濃度顯著升高。5-HT能經過5-HT2A受體介導直接作用于動脈的VSMC，從而促進VSMC的收縮和增殖，而且5-HT可能同時會上調PDGF、bFGF等其他生長因子和緩激肽等其他血管活性物質，從而進一步促進VSMC的增殖[18-19]。沙格雷酯通過選擇性地拮抗5-HT2A受體，能抑制5-HT誘導的血小板聚集并抑制VSMC收縮和增殖，從而達到減少新生內膜增生的作用[20]；與此同時，5-HT2A受體的抑制可以間接增加5-HT對血管內皮細胞5-HT1B受體的作用，產生更多的一氧化氮從而擴血管、增加血流[21]。本研究結果顯示，與空白對照組相比，沙格雷酯能將球囊損傷后大鼠頸動脈內膜增生厚度降低75.15%（P < 0.001），這與一些已經發表的研究結果[4, 8, 12, 15]是類似的。
PCNA又稱細胞周期蛋白，是一種核內蛋白質，是DNA聚合酶δ的輔助因子，集中分布于增殖細胞有絲分裂的G1晚期和S早期的核仁，參與DNA合成和復制，其合成率與細胞DNA復制直接相關，PCNA表達為細胞進入細胞周期進行DNA復制和分裂增殖所必需，可作為判斷細胞增殖與否的直接而可靠的指標[22]。本研究采用免疫組織化學技術觀察到沙格雷酯組和氯吡格雷組大鼠VSMC中的PCNA表達，無論是PCNA陽性細胞率還是吸光度均顯著低于空白對照組，這種作用是在多種胞內信息傳遞環節的參與下發生的[23-24]。
本研究沿襲了最常采用的小動物頸動脈球囊損傷模型，為了減少年齡與性別對研究結果的影響，本研究中采用了同樣周齡的雄性大鼠。本研究結果顯示，與空白對照組相比，沙格雷酯和氯吡格雷能明顯降低球囊損傷后大鼠頸動脈內膜增生厚度（P < 0.001），而沙格雷酯組與氯吡格雷組相比兩組之間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。
本研究還存在一些局限：①研究的實驗動物數量較少，使統計分析的效能受到影響。②高脂喂養的動物模型，在動脈受到球囊損傷后，其內膜增生的過程和病理生理改變與人類的動脈行球囊擴張或支架后的修復過程尚存在一定的差異。如前者，由于高脂飲食的影響，在內膜下富有大量的脂質沉積，并可見到大量的吞噬脂質的巨噬細胞。因此，本動物模型的結果還不能被不加限制地推廣到人類。③阿司匹林是最傳統的也是最常規使用的抗血小板藥物，也是在諸多實踐指南中被最多地推薦應用于血管成形術后的抗血小板藥物[25]。本研究并沒有將阿司匹林的應用納入到實驗中。事實上，在臨床應用中，雙重抗血小板方案正在越來越廣泛地被應用和接受，這種雙重抗血小板方案可以是阿司匹林聯用氯吡格雷，也可以是阿司匹林聯用沙格雷酯或其他的抗血小板藥物。本研究的結果可能對雙重抗血小板方案的選擇提供一些思路。④本研究中，沒有檢測PDGF等關鍵生長因子的表達情況，尚不清楚在實驗組尤其是沙格雷酯組，PDGF的表達是否受到抑制，與氯吡格雷是否存在差異，這可以作為下一步研究的方向之一。
