引用本文： 郁雷, 高麗. 小鼠腹部心臟移植模型建立及并發癥預防. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2014, 21(2): 249-252. doi: 10.7507/1007-4848.20140071 復制
自1964年Abbott等[1]首次成功建立小鼠心臟移植模型以來，經過近半世紀的發展，小鼠心臟移植模型已成為研究器官移植后免疫排斥反應和驗證免疫抑制藥物療效的重要實驗模型[2]。尤其自Ono等[2]在1969年通過將血管吻合方式改成端-側吻合從而提高了受體的生存率以來，小鼠腹部心臟移植模型得到了更為廣泛的應用。在小鼠腹部心臟移植模型建立的練習過程中，我們總結了146只小鼠手術經驗和主要并發癥的預防方法，以期為同行提供借鑒。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及相關材料
實驗動物：B6小鼠（B6，H2b）和CBA小鼠（H2k），8～12周齡，體重（25±3）g，雄性。小鼠由哈爾濱醫科大學附屬二院動物實驗中心提供，飼養于哈爾濱醫科大學附屬二院SPF級動物實驗室，飼養方法參照哈醫大附屬二院實驗室動物飼養方法。本研究獲得我院倫理委員會的批準。
藥物：（1）麻醉藥物：戊巴比妥（2.5 g/50 ml）2.5 ml，阿托品（0.5 mg/1 ml）1 ml，注入到100 ml生理鹽水中；（2）抗凝藥物：肝素鈉（5 000 U/5 ml）1 ml注入到100 ml生理鹽水中，每次下腔靜脈內注射1.0 ml肝素鈉溶液。
應用儀器和工具：（1）顯微手術鏡（Topcon OMS.75 operation microscope）；（2）顯微手術器械：顯微手術鑷（PEER-VIGOR 4）、顯微血管夾（MIZUHO 07-941-01 K7-22）、顯微手術剪（4 DELTA）、Bear 10-0黑尼龍線、NESCOSUTURE 7-0絲質縫合線、DEXON 3-0可吸收縫線。
1.2 手術的基本步驟
麻醉：根據小鼠體重（0.04 ml/g）腹腔內注射巴比妥類麻醉藥物，5 min后觀察小鼠狀態，小鼠無躁動可以接受手術。
受體手術：將小鼠固定確切后，用70%濃度酒精消毒，無需腹部備皮，沿腹部正中切開皮膚及腹膜，長度約4 cm，避免損傷腸管，放置開腹器，棉簽牽引小腸腸管，顯微鏡下剪開部分小腸韌帶，避免損傷腸系膜血管。濕紗布保護腸管，將腸管布置于術野上方，將生殖腺和膀胱布置于術野下方，溫濕紗布覆蓋保護，暴露術野。細紗布條穿過乙狀結腸系膜，將乙狀結腸和直腸牽向左側，顯露后腹膜。雙手各持一枚棉簽將后腹膜鈍性分離顯露腎動脈以下的主動脈和下腔靜脈，這時要注意觀察神經的走行和主動脈、下腔靜脈與腰深動靜脈之間的交通支。用7-0絲線結扎交通支，避免損傷兩側的神經。分離主動脈和下腔靜脈表面的系膜和滋養血管，電凝筆燒斷。用棉棒將主動脈和下腔靜脈表面的系膜剝離，裸化血管以利于吻合。
供體手術：麻醉后固定小鼠，沿肋弓下緣剪開皮膚和腹膜，顯露下腔靜脈，注入含有10 U肝素鈉的1 ml生理鹽水（10 U/ml），1 min后剪斷腹主動脈和下腔靜脈。W型剪開兩側肋骨和胸骨，充分暴露胸腔，用冷生理鹽水心臟降溫。鈍性分離左右兩側胸腺，避免取心臟的過程中連帶取下胸腺組織影響實驗結果。用7-0絲線分別結扎并切斷上、下腔靜脈。在主動脈和肺動脈分叉近端剪斷，盡可能將主動脈和肺動脈的殘端留得長一些以方便吻合。靠近肺門處用7-0絲線成束結扎肺門血管。將移植心臟取下，完成供體手術。取下移植心臟后從升主動脈注入生理鹽水直至心臟顏色變淺，將移植心臟放入4 ℃生理鹽水中備用。
供體心臟植入手術：將供體心臟放置于受體腹腔右側，將兩枚血管夾留置于腎動脈和主動脈髂血管分叉之間，以阻斷主動脈和下腔靜脈血流。于主動脈中央處進針（1 ml注射器配備Micro-3針頭）注入0.05 ml肝素鈉溶液清除動脈內的殘留血液，以避免術后血栓形成。由針孔進入顯微手術剪，向上縱行剪開血管，長度與供體心臟升主動脈直徑一致。吻合前用棉棒擠出血管和心臟中的空氣避免血栓和空氣栓塞。用10-0無損傷縫線先在主動脈開口上方和下方各縫合一針（先縫合上方后縫合下方），用連續縫合將升主動脈和腹主動脈行端-側吻合（逆時針方向）。同法，肺動脈和下腔靜脈行端-側吻合（順時針方向）。吻合確切后松開血管夾，觀察吻合口情況，同時用棉簽按壓吻合口以達到止血目的。待移植心臟復跳良好后，將小腸等器官恢復原位。關腹前腹腔內滴入1 ml生理鹽水補充血容量，用3-0可吸收縫線連續縫合關閉腹腔。術后將小鼠移至熱光源下促進蘇醒。
1.3 統計學分析
實驗數據用均數±標準差（
2 結 果
2.1 小鼠腹部心臟移植的學習曲線
全部手術由1名醫生獨立完成，并且無小鼠腹部心臟移植模型的手術經驗。如果移植心臟將在術后24 h以內停搏則判斷為手術失敗。首次成功出現于第15只手術練習。總的手術成功率為72%（105/146）。前50只手術的成功率為38%（19/50），后50只手術的成功率為98%（49/50）。通過對146只的小鼠心臟移植手術練習，總結出小鼠腹部心臟移植的學習曲線。我們將手術成功率穩定在90%以上作為可以進行實驗的標準，從開始練習到可以進行實驗需要累積90只小鼠的模型手術經驗，見圖 1、2。146只手術平均手術時間為（83±27）min（其中最短手術時間為49 min，最長手術時間為170 min）。穩定手術成功率90%以上需要累積手術時間達到140～150 h。
圖1
平均手術時間隨著手術例數增長的變化關系 ? ?圖 2 手術練習例數與手術成功率之間的關系（學習曲線）
2.2 手術失敗原因
導致手術失敗的因素很多，手術之前的麻醉藥物劑量的控制，術中盲目粗暴操作，手術后并發癥的出現都可能導致手術的失敗。模型練習的146只手術中手術成功105只（72%），手術失敗41只（28%）。大多數的失敗手術出現在前50只的練習。練習的早期以移植心臟復跳失敗為主；隨著對手術步驟的熟悉，血管的吻合變成決定手術成功的關鍵。從受體和供體角度來看，手術中受體的死亡直接導致動物模型建立的失敗。模型建立練習的初期，由于手術時間過長，尤其是移植心臟的吻合時間過長導致移植心臟的缺血，從而導致移植心臟復跳失敗。導致手術失敗的原因包括吻合口出血或術中損傷重要血管導致的失血性休克（16只，39%）、術后移植心臟復跳失敗（7只，17%）、吻合口狹窄（7只，17%）、重要器官的栓塞（包括血栓栓塞和空氣栓塞）（5只，12%）、麻醉藥物過量導致呼吸抑制（4只，10%）、術后腹腔感染（2只，5%）等。其中失血性休克、移植心臟復跳失敗和吻合口狹窄是導致手術失敗的最主要因素。
3 討 論
自Ono等[2]通過將血管吻合方式改成端-側吻合從而提高了受體的生存率以來，小鼠腹部心臟移植模型得以廣泛地應用到移植免疫方面的研究。Niimi [3]通過3 000只小鼠腹部心臟移植手術的練習，將手術時間縮短至30 min。近些年隨著手術方法不斷改進，在此手術的基礎上又有一些新的術式被發明[4-11]。但作為研究移植排斥反應經典的動物模型，其價值仍無法替代[12-17]。雖然已經有文獻報道對此模型的建立加以闡述[18-20]，但是還無文獻報道模型建立過程中失敗的原因和預防對策。因此我們總結出學習建立小鼠腹部心臟移植模型過程中的關鍵步驟和手術并發癥，希望能對要掌握這項技術的同道有所幫助。
手術的初期階段由于缺少顯微手術經驗，手術進度可能很慢，手術時間往往達到2 h，并且受體的生存率很低，此時熟悉手術的基本步驟是手術練習的目的。除此之外要注意手術的細節，開始階段養成良好的手術習慣非常重要，也是保證手術成功率和縮短手術時間的基礎。當漸漸熟悉手術過程后，容易片面重視手術時間的縮短，建議練習初期更要重視成功率的提高，手術時間會隨著手術例數的增加逐漸縮短。練習的過程中要重視前輩提供的建議，最好在可視顯微鏡下操作，讓有手術經驗的術者立刻就能指出手術操作中的錯誤，從而立即加以改正。作者在手術學習的過程中，正是由于前輩兩次的手術現場指點大幅度提高了手術的成功率。
血管吻合是小鼠心臟移植手術的關鍵步驟，吻合不確切將造成吻合口出血，從而容易導致失血性休克，再次縫合很容易導致吻合口狹窄。建議血管的吻合用10-0的線以降低術后吻合口出血和血栓的發生率。熟練掌握血管吻合技術是心臟移植手術成功的關鍵。出血導致的出血性休克是小鼠腹部心臟移植手術失敗的最主要原因。小鼠本身的血容量就比較少，25 g小鼠的全身血容量僅有2 ml，其次小鼠術后血容量補充也比較困難。在減少出血上有以下幾點建議：（1）在處理小腸系膜韌帶的過程中，需要在顯微鏡下操作，避免損傷腸系膜血管造成出血；（2）在處理下腔靜脈與腰深動靜脈之間的交通支時，首先要看清交通支的走行后再穿線結扎，因為交通支的活動性較小，打結時要打原位節，否則會造成交通支出血；（3）在取移植心臟的過程中要動作精確輕柔，避免對移植心臟損傷，尤其在處理主動脈和肺動脈的過程中避免對心房造成損傷，在吻合血管的過程中，避免縫合針和顯微鑷對心臟的損傷；（4）關腹前可以將1 ml溫生理鹽水注入腹腔中擴充小鼠血容量。
移植心臟吻合口出血的處理：松開血管夾后吻合口少量的出血屬于正常現象，用棉簽輕輕壓迫數秒就可以達到止血目的，若松開血管夾后吻合口仍有活動性出血則需要再次放置血管夾，尋找出血點縫合止血。縫合一般不采用“8”字縫合，縫合進針不易過深，避免造成吻合口狹窄。血管吻合的針距：無論主動脈或肺動脈的吻合一般都是一側4針（不包括血管上、下兩端固定的2針），其中第1針和第4針要靠近血管上下兩端的固定針，第1針距固定針的距離一般為其距第2針距離的1/2。第2、3針平分第1針和第4針的距離。進針點到血管開口邊緣的距離一般為血管寬度的1/3，出針點到主動脈和肺動脈邊緣的距離可以略微寬一些，這樣既可以達到吻合確實的目的，也不至于造成吻合后的血管狹窄。收線時要將動脈長度略微縮短為宜，可以減少術后吻合口出血。
吻合口狹窄的預防：以下情況常常會出現吻合口狹窄：（1）吻合血管時縫合到對側的血管造成人為的血管閉合，因此每一針都務求確切，模棱兩可的縫合只會延長手術時間和增加對組織的破壞；（2）針距過密或進針距離血管邊緣過寬都會造成血管狹窄。
移植心臟復跳失敗的預防：最重要的還是要確保血管吻合的質量。確保血管吻合質量的基礎上縮短移植心臟血管的吻合時間，尤其在練習手術初期，吻合時間過長導致移植心臟復跳失敗是手術失敗的最主要原因。
麻醉藥物的控制：麻醉效果的好壞直接關系到手術的成功，麻醉過深會造成呼吸抑制導致受體死亡，麻醉過淺會影響手術。麻醉過深造成受體死亡是手術失敗的主要原因之一，即使對手術過程已經很熟悉也會在麻醉的過程中出現失誤，這可能與我們采用的麻醉方式的安全窗比較窄有關。首先要嚴格控制麻醉藥物的劑量，抽取麻醉藥物前將麻醉藥物充分混勻，嚴格按體重給麻醉藥物（每克體重0.04 ml麻醉藥物）。通過觀察靜脈的顏色（比正常靜脈顏色更顯暗紅色）和受體呼吸情況（呼吸淺慢）可以判斷是否麻醉過深。一旦發生麻醉過深，受體的死亡率很高，建議停止手術，關腹后放置于熱源下促進受體蘇醒。麻醉過淺的情況往往發生在手術練習的初期階段，當麻醉劑注射到皮下或者注射到腹腔內臟器（如生殖腺）就會出現麻醉過淺的情況。當發生麻醉過淺時，可以增加麻醉藥劑量，但每次追加劑量0.2 ml為宜，開腹后發現麻醉過淺也可以通過利用腸管的表面麻醉來達到理想的麻醉狀態，每次5滴（約0.2 ml）。在增加麻醉藥的過程中也要控制每次增加的劑量，避免發生麻醉藥過量。
腹腔感染的預防：預防腹腔感染最基本的原則就是無菌手術，每次手術的器械都需要經過消毒處理。除此之外還要注意對腸管的保護。2例腹腔感染經過尸體解剖，發現感染的部位都在乙狀結腸周圍，可能是顯微鑷對腸管造成的損傷。
綜上所述，通過對146只小鼠腹部心臟移植模型學習過程的回顧，血管吻合是模型建立的關鍵步驟，也是手術的難點。血管吻合時，要控制好針距，掌握血管的端側吻合技術，這是控制術后吻合口出血、吻合口狹窄的關鍵。縮短移植心臟的缺血時間是保證移植心臟復跳的重要因素。除此之外，麻醉藥物的劑量控制、腹腔感染的預防也是手術成功的關鍵因素。
自1964年Abbott等[1]首次成功建立小鼠心臟移植模型以來，經過近半世紀的發展，小鼠心臟移植模型已成為研究器官移植后免疫排斥反應和驗證免疫抑制藥物療效的重要實驗模型[2]。尤其自Ono等[2]在1969年通過將血管吻合方式改成端-側吻合從而提高了受體的生存率以來，小鼠腹部心臟移植模型得到了更為廣泛的應用。在小鼠腹部心臟移植模型建立的練習過程中，我們總結了146只小鼠手術經驗和主要并發癥的預防方法，以期為同行提供借鑒。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及相關材料
實驗動物：B6小鼠（B6，H2b）和CBA小鼠（H2k），8～12周齡，體重（25±3）g，雄性。小鼠由哈爾濱醫科大學附屬二院動物實驗中心提供，飼養于哈爾濱醫科大學附屬二院SPF級動物實驗室，飼養方法參照哈醫大附屬二院實驗室動物飼養方法。本研究獲得我院倫理委員會的批準。
藥物：（1）麻醉藥物：戊巴比妥（2.5 g/50 ml）2.5 ml，阿托品（0.5 mg/1 ml）1 ml，注入到100 ml生理鹽水中；（2）抗凝藥物：肝素鈉（5 000 U/5 ml）1 ml注入到100 ml生理鹽水中，每次下腔靜脈內注射1.0 ml肝素鈉溶液。
應用儀器和工具：（1）顯微手術鏡（Topcon OMS.75 operation microscope）；（2）顯微手術器械：顯微手術鑷（PEER-VIGOR 4）、顯微血管夾（MIZUHO 07-941-01 K7-22）、顯微手術剪（4 DELTA）、Bear 10-0黑尼龍線、NESCOSUTURE 7-0絲質縫合線、DEXON 3-0可吸收縫線。
1.2 手術的基本步驟
麻醉：根據小鼠體重（0.04 ml/g）腹腔內注射巴比妥類麻醉藥物，5 min后觀察小鼠狀態，小鼠無躁動可以接受手術。
受體手術：將小鼠固定確切后，用70%濃度酒精消毒，無需腹部備皮，沿腹部正中切開皮膚及腹膜，長度約4 cm，避免損傷腸管，放置開腹器，棉簽牽引小腸腸管，顯微鏡下剪開部分小腸韌帶，避免損傷腸系膜血管。濕紗布保護腸管，將腸管布置于術野上方，將生殖腺和膀胱布置于術野下方，溫濕紗布覆蓋保護，暴露術野。細紗布條穿過乙狀結腸系膜，將乙狀結腸和直腸牽向左側，顯露后腹膜。雙手各持一枚棉簽將后腹膜鈍性分離顯露腎動脈以下的主動脈和下腔靜脈，這時要注意觀察神經的走行和主動脈、下腔靜脈與腰深動靜脈之間的交通支。用7-0絲線結扎交通支，避免損傷兩側的神經。分離主動脈和下腔靜脈表面的系膜和滋養血管，電凝筆燒斷。用棉棒將主動脈和下腔靜脈表面的系膜剝離，裸化血管以利于吻合。
供體手術：麻醉后固定小鼠，沿肋弓下緣剪開皮膚和腹膜，顯露下腔靜脈，注入含有10 U肝素鈉的1 ml生理鹽水（10 U/ml），1 min后剪斷腹主動脈和下腔靜脈。W型剪開兩側肋骨和胸骨，充分暴露胸腔，用冷生理鹽水心臟降溫。鈍性分離左右兩側胸腺，避免取心臟的過程中連帶取下胸腺組織影響實驗結果。用7-0絲線分別結扎并切斷上、下腔靜脈。在主動脈和肺動脈分叉近端剪斷，盡可能將主動脈和肺動脈的殘端留得長一些以方便吻合。靠近肺門處用7-0絲線成束結扎肺門血管。將移植心臟取下，完成供體手術。取下移植心臟后從升主動脈注入生理鹽水直至心臟顏色變淺，將移植心臟放入4 ℃生理鹽水中備用。
供體心臟植入手術：將供體心臟放置于受體腹腔右側，將兩枚血管夾留置于腎動脈和主動脈髂血管分叉之間，以阻斷主動脈和下腔靜脈血流。于主動脈中央處進針（1 ml注射器配備Micro-3針頭）注入0.05 ml肝素鈉溶液清除動脈內的殘留血液，以避免術后血栓形成。由針孔進入顯微手術剪，向上縱行剪開血管，長度與供體心臟升主動脈直徑一致。吻合前用棉棒擠出血管和心臟中的空氣避免血栓和空氣栓塞。用10-0無損傷縫線先在主動脈開口上方和下方各縫合一針（先縫合上方后縫合下方），用連續縫合將升主動脈和腹主動脈行端-側吻合（逆時針方向）。同法，肺動脈和下腔靜脈行端-側吻合（順時針方向）。吻合確切后松開血管夾，觀察吻合口情況，同時用棉簽按壓吻合口以達到止血目的。待移植心臟復跳良好后，將小腸等器官恢復原位。關腹前腹腔內滴入1 ml生理鹽水補充血容量，用3-0可吸收縫線連續縫合關閉腹腔。術后將小鼠移至熱光源下促進蘇醒。
1.3 統計學分析
實驗數據用均數±標準差（
2 結 果
2.1 小鼠腹部心臟移植的學習曲線
全部手術由1名醫生獨立完成，并且無小鼠腹部心臟移植模型的手術經驗。如果移植心臟將在術后24 h以內停搏則判斷為手術失敗。首次成功出現于第15只手術練習。總的手術成功率為72%（105/146）。前50只手術的成功率為38%（19/50），后50只手術的成功率為98%（49/50）。通過對146只的小鼠心臟移植手術練習，總結出小鼠腹部心臟移植的學習曲線。我們將手術成功率穩定在90%以上作為可以進行實驗的標準，從開始練習到可以進行實驗需要累積90只小鼠的模型手術經驗，見圖 1、2。146只手術平均手術時間為（83±27）min（其中最短手術時間為49 min，最長手術時間為170 min）。穩定手術成功率90%以上需要累積手術時間達到140～150 h。
圖1
平均手術時間隨著手術例數增長的變化關系 ? ?圖 2 手術練習例數與手術成功率之間的關系（學習曲線）
2.2 手術失敗原因
導致手術失敗的因素很多，手術之前的麻醉藥物劑量的控制，術中盲目粗暴操作，手術后并發癥的出現都可能導致手術的失敗。模型練習的146只手術中手術成功105只（72%），手術失敗41只（28%）。大多數的失敗手術出現在前50只的練習。練習的早期以移植心臟復跳失敗為主；隨著對手術步驟的熟悉，血管的吻合變成決定手術成功的關鍵。從受體和供體角度來看，手術中受體的死亡直接導致動物模型建立的失敗。模型建立練習的初期，由于手術時間過長，尤其是移植心臟的吻合時間過長導致移植心臟的缺血，從而導致移植心臟復跳失敗。導致手術失敗的原因包括吻合口出血或術中損傷重要血管導致的失血性休克（16只，39%）、術后移植心臟復跳失敗（7只，17%）、吻合口狹窄（7只，17%）、重要器官的栓塞（包括血栓栓塞和空氣栓塞）（5只，12%）、麻醉藥物過量導致呼吸抑制（4只，10%）、術后腹腔感染（2只，5%）等。其中失血性休克、移植心臟復跳失敗和吻合口狹窄是導致手術失敗的最主要因素。
3 討 論
自Ono等[2]通過將血管吻合方式改成端-側吻合從而提高了受體的生存率以來，小鼠腹部心臟移植模型得以廣泛地應用到移植免疫方面的研究。Niimi [3]通過3 000只小鼠腹部心臟移植手術的練習，將手術時間縮短至30 min。近些年隨著手術方法不斷改進，在此手術的基礎上又有一些新的術式被發明[4-11]。但作為研究移植排斥反應經典的動物模型，其價值仍無法替代[12-17]。雖然已經有文獻報道對此模型的建立加以闡述[18-20]，但是還無文獻報道模型建立過程中失敗的原因和預防對策。因此我們總結出學習建立小鼠腹部心臟移植模型過程中的關鍵步驟和手術并發癥，希望能對要掌握這項技術的同道有所幫助。
手術的初期階段由于缺少顯微手術經驗，手術進度可能很慢，手術時間往往達到2 h，并且受體的生存率很低，此時熟悉手術的基本步驟是手術練習的目的。除此之外要注意手術的細節，開始階段養成良好的手術習慣非常重要，也是保證手術成功率和縮短手術時間的基礎。當漸漸熟悉手術過程后，容易片面重視手術時間的縮短，建議練習初期更要重視成功率的提高，手術時間會隨著手術例數的增加逐漸縮短。練習的過程中要重視前輩提供的建議，最好在可視顯微鏡下操作，讓有手術經驗的術者立刻就能指出手術操作中的錯誤，從而立即加以改正。作者在手術學習的過程中，正是由于前輩兩次的手術現場指點大幅度提高了手術的成功率。
血管吻合是小鼠心臟移植手術的關鍵步驟，吻合不確切將造成吻合口出血，從而容易導致失血性休克，再次縫合很容易導致吻合口狹窄。建議血管的吻合用10-0的線以降低術后吻合口出血和血栓的發生率。熟練掌握血管吻合技術是心臟移植手術成功的關鍵。出血導致的出血性休克是小鼠腹部心臟移植手術失敗的最主要原因。小鼠本身的血容量就比較少，25 g小鼠的全身血容量僅有2 ml，其次小鼠術后血容量補充也比較困難。在減少出血上有以下幾點建議：（1）在處理小腸系膜韌帶的過程中，需要在顯微鏡下操作，避免損傷腸系膜血管造成出血；（2）在處理下腔靜脈與腰深動靜脈之間的交通支時，首先要看清交通支的走行后再穿線結扎，因為交通支的活動性較小，打結時要打原位節，否則會造成交通支出血；（3）在取移植心臟的過程中要動作精確輕柔，避免對移植心臟損傷，尤其在處理主動脈和肺動脈的過程中避免對心房造成損傷，在吻合血管的過程中，避免縫合針和顯微鑷對心臟的損傷；（4）關腹前可以將1 ml溫生理鹽水注入腹腔中擴充小鼠血容量。
移植心臟吻合口出血的處理：松開血管夾后吻合口少量的出血屬于正常現象，用棉簽輕輕壓迫數秒就可以達到止血目的，若松開血管夾后吻合口仍有活動性出血則需要再次放置血管夾，尋找出血點縫合止血。縫合一般不采用“8”字縫合，縫合進針不易過深，避免造成吻合口狹窄。血管吻合的針距：無論主動脈或肺動脈的吻合一般都是一側4針（不包括血管上、下兩端固定的2針），其中第1針和第4針要靠近血管上下兩端的固定針，第1針距固定針的距離一般為其距第2針距離的1/2。第2、3針平分第1針和第4針的距離。進針點到血管開口邊緣的距離一般為血管寬度的1/3，出針點到主動脈和肺動脈邊緣的距離可以略微寬一些，這樣既可以達到吻合確實的目的，也不至于造成吻合后的血管狹窄。收線時要將動脈長度略微縮短為宜，可以減少術后吻合口出血。
吻合口狹窄的預防：以下情況常常會出現吻合口狹窄：（1）吻合血管時縫合到對側的血管造成人為的血管閉合，因此每一針都務求確切，模棱兩可的縫合只會延長手術時間和增加對組織的破壞；（2）針距過密或進針距離血管邊緣過寬都會造成血管狹窄。
移植心臟復跳失敗的預防：最重要的還是要確保血管吻合的質量。確保血管吻合質量的基礎上縮短移植心臟血管的吻合時間，尤其在練習手術初期，吻合時間過長導致移植心臟復跳失敗是手術失敗的最主要原因。
麻醉藥物的控制：麻醉效果的好壞直接關系到手術的成功，麻醉過深會造成呼吸抑制導致受體死亡，麻醉過淺會影響手術。麻醉過深造成受體死亡是手術失敗的主要原因之一，即使對手術過程已經很熟悉也會在麻醉的過程中出現失誤，這可能與我們采用的麻醉方式的安全窗比較窄有關。首先要嚴格控制麻醉藥物的劑量，抽取麻醉藥物前將麻醉藥物充分混勻，嚴格按體重給麻醉藥物（每克體重0.04 ml麻醉藥物）。通過觀察靜脈的顏色（比正常靜脈顏色更顯暗紅色）和受體呼吸情況（呼吸淺慢）可以判斷是否麻醉過深。一旦發生麻醉過深，受體的死亡率很高，建議停止手術，關腹后放置于熱源下促進受體蘇醒。麻醉過淺的情況往往發生在手術練習的初期階段，當麻醉劑注射到皮下或者注射到腹腔內臟器（如生殖腺）就會出現麻醉過淺的情況。當發生麻醉過淺時，可以增加麻醉藥劑量，但每次追加劑量0.2 ml為宜，開腹后發現麻醉過淺也可以通過利用腸管的表面麻醉來達到理想的麻醉狀態，每次5滴（約0.2 ml）。在增加麻醉藥的過程中也要控制每次增加的劑量，避免發生麻醉藥過量。
腹腔感染的預防：預防腹腔感染最基本的原則就是無菌手術，每次手術的器械都需要經過消毒處理。除此之外還要注意對腸管的保護。2例腹腔感染經過尸體解剖，發現感染的部位都在乙狀結腸周圍，可能是顯微鑷對腸管造成的損傷。
綜上所述，通過對146只小鼠腹部心臟移植模型學習過程的回顧，血管吻合是模型建立的關鍵步驟，也是手術的難點。血管吻合時，要控制好針距，掌握血管的端側吻合技術，這是控制術后吻合口出血、吻合口狹窄的關鍵。縮短移植心臟的缺血時間是保證移植心臟復跳的重要因素。除此之外，麻醉藥物的劑量控制、腹腔感染的預防也是手術成功的關鍵因素。
