引用本文： 朱昀, 肖穎彬, 馮澤洲, 何思毅, 李經緯, 程偉. MicroRNA-1、MicroRNA-133、MicroRNA-34a及其可能靶蛋白Ankyrin-B在心房顫動患者心房組織中的表達及意義. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2014, 21(2): 244-248. doi: 10.7507/1007-4848.20140070 復制
心房顫動（房顫）是臨床上最常見的心律失常之一，其發病率隨年齡的增長而增加，而80歲以上的人群發病率可達8% [1]。房顫可引起心力衰竭、腦卒中、癡呆等嚴重后果。有研究表明，房顫患者腦卒中發病率較非房顫患者高5倍，并且其致殘率更高[2]；房顫的發生、發展主要是由于心房結構重構和電重構引起[3-5]，兩者相輔相成，而電重構在房顫的形成中起著十分重要的作用。電重構是以離子通道表達以及功能變化為基礎，其中鈣離子穩態失調是其中主要因素之一，有70%以上的房顫患者心房肌細胞ICaL發生變化，但目前我們對于離子通道表達和功能變化的機制還不完全清楚[6-7]。
目前，已有很多研究人員發現多種微小核糖核酸（microRNA）參與心臟病理生理過程，其中microRNA-1（microR-1）、microRNA-133（microR-133）等micro-RNAs與許多離子通道蛋白以及microRNA-34a（micro-R-34a）與組織纖維化都存在著密切的關系[8-10]，而離子通道的改變與組織纖維化都是房顫發生、發展的基本環節。生物信息學網站預測結果發現，microR-133及microR-34a都與錨蛋白-B（Ankyrin-B）的基因ANK2的3`端非翻譯（3`UTR）區有特異性結合位點，而Ankyrin-B蛋白參與了多種遺傳性及獲得性心臟病的發生、發展。
為此，我們通過采集風濕性心瓣膜病瓣膜置換術患者的右心耳組織，檢測microR-1、microR-133、microR-34a及其可能靶蛋白Ankyrin-B在房顫患者和竇性心律患者的表達差異及其相關性，旨在研究microRNA是否通過Ankyrin-B參與心房顫動的發生、發展。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
我們的研究經本院倫理委員會批準、在術前征得患者及家屬同意并簽署知情同意書。所有入選患者（共40例）術前均有1年以上不同程度的活動后胸悶、心悸、勞累，無暈厥及咯血史。入院查體：所有患者心尖部和/或胸骨右緣第2肋間聞及2/6～4/6級收縮期和/或舒張期雜音，雙肺呼吸清晰，未聞及干濕性啰音，間斷性雙下肢指凹性水腫18例。所有患者術前均經超聲心動圖、胸部X線及心電圖等檢查明確診斷。根據心電圖檢查結果分為心房顫動組（房顫組）與竇性心律組，每組各20例，兩組患者臨床資料見表 1。
表1
房顫組與竇性心律組患者臨床資料[（1.2 方法
1.2.1 標本的采集
采用靜脈吸入復合全身麻醉，經胸骨正中切口徑路手術，常規建立體外循環，術中均經右心房、房間隔徑路進行瓣膜置換術。切開右心房后取右心耳組織，分成3份，2份存于液氮中、另1份存于4%多聚甲醛中固定，用于后續免疫組織化學法、蛋白免疫印跡法Western Blotting法檢測Ankyrin-B表達，逆轉錄-實時定量聚合酶鏈式反應（RTQ-PCR）檢測microR-1、microR-133和microR-34a的表達情況。
1.2.2 檢測指標和方法
1.2.2.1 microR-1、microR-133及microR-34a檢測
使用Trizol試劑（15596-026，Invitrogen，USA）按其說明書進行，液氮研磨提取右心耳組織總RNA。以U6為內參，使用反轉錄試劑盒PrimeScript?RT reagentKit（Perfect Real Time，RR037A，Takara，Japan）及相應莖環引物（廣州銳博）合成互補脫氧核糖核酸（cDNA）的第一鏈。U6、microR-1、microR-133及microR-34a各自的上下游引物（廣州銳博生物科技有限公司）及熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）試劑盒SYBR?Premix Ex TaqTMGC（Perfect Real Time，RR071A，Takara，Japan），于ABI 7500熒光定量PCR儀上，兩步法進行熒光定量PCR，最后采用ΔΔCt法，通過收集熒光數值，相對定量進行計算。
1.2.2.2 免疫組織化學法檢測Ankyrin-B蛋白
將于4%多聚甲醛（SN383，南京生興生物技術有限公司）中固定的組織進行石蠟切片，3% H2O2室溫孵育5 min，蒸餾水沖洗，磷酸鹽緩沖液（PBS）（0.1 mmol/L，ZLI9061，中杉金橋，北京）浸泡5 min，微波抗原修復。5%牛血清白蛋白（BSA）（ST023，碧云天，蘇州）室溫封閉1 h，一抗（Ankyrin-B兔抗人多克隆抗體1∶200，sc-28560，Santa Cruz，USA）4℃過夜。PBS清洗每次5 min，共3次，HRP標記二抗（辣根過氧化物酶標記山羊抗兔多克隆抗體1∶800，A0208，碧云天，蘇州）室溫孵育30 min，PBS沖洗每次5 min，共3次。之后按二氨基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒（P0203，碧云天，蘇州）說明書，DAB顯色，蒸餾水充分沖洗，復染，中性樹脂封片，在顯微鏡下觀察。
1.2.2.3 Western Blotting檢測組織Ankyrin-B蛋白
從液氮中取出凍存的心房組織100 mg，置于液氮預冷的研缽中，用液氮研磨組織成粉狀，移入冷卻的1.5 ml EP管中，加入十二烷基硫酸鈉（SDS）裂解液（P0010S，碧云天，蘇州）1 ml，反復吹打0.5 min，置于冰上反應30 min。12 000 g，4 ℃，25 min離心，吸取上清于新的1.5 ml EP管。BCA試劑盒（P0018，碧云天，蘇州）檢測蛋白濃度，SDS裂解液調整各管蛋白濃度后，加入5 x上樣緩沖液（P0015，碧云天，蘇州）沸水中充分變性蛋白5 min。加入8%聚丙烯酰胺凝膠中100 V恒壓電泳，之后將蛋白質從聚丙烯酰胺凝膠中轉移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，后于5%脫脂奶粉中封閉2 h。分別于兔抗人Ankyrin-B多克隆抗體（1∶200）及兔抗人β-actin多克隆抗體（bs-0061R，博奧森，1∶1 000），4 ℃過夜。HRP標記的羊抗兔多克隆抗體（1∶1 000），室溫1 h。加入ECL Plus化學發光試劑（P0018，碧云天，蘇州）凝膠成像儀顯影，測定目的和內參條帶的灰度值。將目的條帶的灰度值與內參條帶的灰度值比值結果作為目的蛋白的相對表達量。
1.3 統計學分析
熒光定量PCR采用ΔΔCT法進行計算，Western Blotting的結果用計算灰度值的軟件（ImageJ 1.46）統計灰度值比值。計量資料以均數±標準差（
2 結 果
2.1 microR-1、microR-133及microR-34a的表達
房顫組患者右心房組織中的microR-1表達較竇性心律組顯著降低（0.559±0.252 vs. 3.997±1.251；t=-21.455，P=0.000），microR-133的表達較竇性心律組顯著降低（0.630±0.238 vs. 5.514±1.549；t=24.133，P=0.000），而microR-34a的表達較竇性心律組增高（4.783±2.012 vs.1.350±0.638，t=12.596，P=0.000），見圖 1。
圖1
熒光定量PCR檢測兩組心房microR-1，microR-133及microR-34a的表達
注：AF：房顫，SR：竇性心律；* AF組與SR組比較
2.2 免疫組織化學檢測結果
組織石蠟切片免疫組織化學檢測顯示黃褐色顆粒狀為Ankyrin-B蛋白表達陽性，于光學顯微鏡下可以清楚觀察到房顫患者的組織切片中黃褐色表達較竇性心律組明顯降低，見圖 2。
圖2
Ankyrin-B在心房組織中的表達 免疫組織化學染色 ×40
注：A：房顫組；B：竇性心律組
2.3 Western Blotting檢測結果
Ankyrin-B及內參β-actin蛋白特異性條帶見圖 3A，條帶經ImageJ軟件（Sun Microsystems，USA）分析目的條帶灰度值與相應內參條帶灰度值比值而得，其表達水平統計結果見圖 3B。房顫組心房組織Ankyrin-B表達較竇性心律組明顯降低，且差異有統計學意義（0.66±0.45 vs. 1.09±0.42；t=-3.396，P=0.001）。
圖3
Western Blotting檢測結果
注：A：Western Blotting檢測Ankyrin-B蛋白的表達，其中從左至右依次為房顫組、竇性心律組、房顫組、竇性心律組的不同標本。B：條帶灰度比值，房顫組與竇性心律組間比較 *
3 討 論
我們的研究檢測行心瓣膜置換術房顫患者與竇性心律患者的右心耳組織microR-1、microR-133、microR-34a及蛋白Ankyrin-B的表達變化，PCR、Western Blotting及組織切片的結果顯示，在房顫患者中microR-1、microR-133及蛋白Ankyrin-B的表達較竇性心律患者降低，而microR-34a在房顫患者中表達增高。
最近的研究表明，多種microRNAs的異常表達在心肌肥厚、纖維化、衰老以及心律失常中起著至關重要的作用[11]。MicroRNA是一段約22 bp的單鏈RNA，其可以通過與靶mRNA的3`UTR某段序列特異性結合，從而阻止蛋白質翻譯或直接降解mRNA，抑制該蛋白的表達[12]。MicroR-1及microR-133均屬于肌肉相關microRNAs [13-15]，有文獻報道，在腺病毒轉染介導的microR-1過表達心肌細胞中，可以通過其對PP2A調節亞基B56α的調節，促進自發性Ca2+釋放，并增加CaMII依賴性RyR2磷酸化。PP2A是多功能的絲/蘇氨酸磷酸酶，和心臟的β-腎上腺素信號有關，可以調節多種離子通道和轉運蛋白，如L-型鈣通道、蘭尼堿受體、IP3R和Na+ /K+——三磷酸腺苷（ATP）酶等。而PP2A的另一個調節亞基B56δ又是microR-133的調節靶點[16]。MicroR-34a在多組織纖維化中起著重要的作用[17]。近年來發現，microR-34a在心臟衰老及纖維化中起著重要的作用，在纖維化嚴重的心臟microR-34a表達增加，其可能通過調節PUNTS（即PPP1R10）調節端粒長度、DNA損傷等，從而參與心臟衰老的調節。
而我們之前查詢生物信息學網站，這些micro-RNAs相關的靶蛋白Ankyrin-B在多種遺傳性以及獲得性心臟病中都發揮著重要的作用[18]。錨蛋白是廣泛表達的銜接蛋白，目前的研究發現，錨蛋白家族主要有Ankyrin-R、Ankyrin-B和Ankyrin-G，他們分別由基因Ankyrin-1、Ankyrin-2和Ankyrin-3編碼表達。其中Ankyrin-R的表達只局限于紅細胞、神經元以及骨骼肌，而Ankyrin-B和Ankyrin-G則廣泛表達。在心臟中Ankyrin-B和Ankyrin-G通過調節壓力門控鈉離子通道、鈣離子通道、細胞骨架成分、關鍵細胞轉運蛋白以及離子泵等，參與心肌細胞的興奮性調節。有文獻報道了2個因為Ankyrin-2基因變異造成的嚴重高滲透性竇房結功能不全的家族，這2個家族均伴有不同程度的房顫[19]。且Ankyrin-B與Na+ /Ca2+交換體、Na+ /Ca2+——ATP酶以及三磷酸肌醇受體（IP3R）有機地結合在一起[20-23]。有研究發現，Ankyrin-B參與PP2A的調節，Ankyrin-B可以和PP2A的調節亞單位B56α結合，缺乏Ankyrin-B的心肌細胞B56α表達也顯著下降，從而PP2A催化亞單位活性增加[24]。研究還發現Ankyrin-B和獲得性心臟病有密切關系[25]，利用心肌梗塞動物模型研究發現心肌梗塞邊緣區心肌細胞的Ankyrin-B蛋白表達下調；另外Na+ /Ca2+——ATP酶的表達下降，IP3R和Na+ /Ca2+交換體的表達無明顯變化，但其分布發生改變，同時PP2A的表達升高3倍。在梗塞邊緣區域的心肌細胞出現異常的鈣離子處理能力、離子電流的變化及后去極化以及異常折返的形成，這些變化和房顫早期電重構十分相似。在我們的實驗中檢測到，行風濕性心瓣膜置換術的房顫患者組織Ankyrin-B的表達較竇性心律患者明顯降低，這與microR-34a的表達、作用及其預測結果相一致。
因此，我們推斷microR-34a可能通過調節Ankyrin-B蛋白的表達從而參與房顫的發生、發展。MicroR-34a在通常情況下參與組織纖維化的過程，而Ankyrin-B在以往的研究中主要在電生理方面起到了重要的作用，從我們的結果推測，microR-34a與Ankyrin-B可能通過彼此的相互作用，從而雙方也參與了對方的領域，即microR-34a在房顫的電生理變化及Ankyrin-B參與了房顫的纖維化過程。兩者之間的直接作用關系，我們將在后續的Agomir、Antagomir及雙熒光素酶報告基因的實驗中進一步證實。雖然我們的實驗結果顯示microR-1及microR-133與Ankyrin-B可能沒有直接作用，但是否存在著間接關系尚待后續的實驗進一步驗證。
心房顫動（房顫）是臨床上最常見的心律失常之一，其發病率隨年齡的增長而增加，而80歲以上的人群發病率可達8% [1]。房顫可引起心力衰竭、腦卒中、癡呆等嚴重后果。有研究表明，房顫患者腦卒中發病率較非房顫患者高5倍，并且其致殘率更高[2]；房顫的發生、發展主要是由于心房結構重構和電重構引起[3-5]，兩者相輔相成，而電重構在房顫的形成中起著十分重要的作用。電重構是以離子通道表達以及功能變化為基礎，其中鈣離子穩態失調是其中主要因素之一，有70%以上的房顫患者心房肌細胞ICaL發生變化，但目前我們對于離子通道表達和功能變化的機制還不完全清楚[6-7]。
目前，已有很多研究人員發現多種微小核糖核酸（microRNA）參與心臟病理生理過程，其中microRNA-1（microR-1）、microRNA-133（microR-133）等micro-RNAs與許多離子通道蛋白以及microRNA-34a（micro-R-34a）與組織纖維化都存在著密切的關系[8-10]，而離子通道的改變與組織纖維化都是房顫發生、發展的基本環節。生物信息學網站預測結果發現，microR-133及microR-34a都與錨蛋白-B（Ankyrin-B）的基因ANK2的3`端非翻譯（3`UTR）區有特異性結合位點，而Ankyrin-B蛋白參與了多種遺傳性及獲得性心臟病的發生、發展。
為此，我們通過采集風濕性心瓣膜病瓣膜置換術患者的右心耳組織，檢測microR-1、microR-133、microR-34a及其可能靶蛋白Ankyrin-B在房顫患者和竇性心律患者的表達差異及其相關性，旨在研究microRNA是否通過Ankyrin-B參與心房顫動的發生、發展。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
我們的研究經本院倫理委員會批準、在術前征得患者及家屬同意并簽署知情同意書。所有入選患者（共40例）術前均有1年以上不同程度的活動后胸悶、心悸、勞累，無暈厥及咯血史。入院查體：所有患者心尖部和/或胸骨右緣第2肋間聞及2/6～4/6級收縮期和/或舒張期雜音，雙肺呼吸清晰，未聞及干濕性啰音，間斷性雙下肢指凹性水腫18例。所有患者術前均經超聲心動圖、胸部X線及心電圖等檢查明確診斷。根據心電圖檢查結果分為心房顫動組（房顫組）與竇性心律組，每組各20例，兩組患者臨床資料見表 1。
表1
房顫組與竇性心律組患者臨床資料[（1.2 方法
1.2.1 標本的采集
采用靜脈吸入復合全身麻醉，經胸骨正中切口徑路手術，常規建立體外循環，術中均經右心房、房間隔徑路進行瓣膜置換術。切開右心房后取右心耳組織，分成3份，2份存于液氮中、另1份存于4%多聚甲醛中固定，用于后續免疫組織化學法、蛋白免疫印跡法Western Blotting法檢測Ankyrin-B表達，逆轉錄-實時定量聚合酶鏈式反應（RTQ-PCR）檢測microR-1、microR-133和microR-34a的表達情況。
1.2.2 檢測指標和方法
1.2.2.1 microR-1、microR-133及microR-34a檢測
使用Trizol試劑（15596-026，Invitrogen，USA）按其說明書進行，液氮研磨提取右心耳組織總RNA。以U6為內參，使用反轉錄試劑盒PrimeScript?RT reagentKit（Perfect Real Time，RR037A，Takara，Japan）及相應莖環引物（廣州銳博）合成互補脫氧核糖核酸（cDNA）的第一鏈。U6、microR-1、microR-133及microR-34a各自的上下游引物（廣州銳博生物科技有限公司）及熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）試劑盒SYBR?Premix Ex TaqTMGC（Perfect Real Time，RR071A，Takara，Japan），于ABI 7500熒光定量PCR儀上，兩步法進行熒光定量PCR，最后采用ΔΔCt法，通過收集熒光數值，相對定量進行計算。
1.2.2.2 免疫組織化學法檢測Ankyrin-B蛋白
將于4%多聚甲醛（SN383，南京生興生物技術有限公司）中固定的組織進行石蠟切片，3% H2O2室溫孵育5 min，蒸餾水沖洗，磷酸鹽緩沖液（PBS）（0.1 mmol/L，ZLI9061，中杉金橋，北京）浸泡5 min，微波抗原修復。5%牛血清白蛋白（BSA）（ST023，碧云天，蘇州）室溫封閉1 h，一抗（Ankyrin-B兔抗人多克隆抗體1∶200，sc-28560，Santa Cruz，USA）4℃過夜。PBS清洗每次5 min，共3次，HRP標記二抗（辣根過氧化物酶標記山羊抗兔多克隆抗體1∶800，A0208，碧云天，蘇州）室溫孵育30 min，PBS沖洗每次5 min，共3次。之后按二氨基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒（P0203，碧云天，蘇州）說明書，DAB顯色，蒸餾水充分沖洗，復染，中性樹脂封片，在顯微鏡下觀察。
1.2.2.3 Western Blotting檢測組織Ankyrin-B蛋白
從液氮中取出凍存的心房組織100 mg，置于液氮預冷的研缽中，用液氮研磨組織成粉狀，移入冷卻的1.5 ml EP管中，加入十二烷基硫酸鈉（SDS）裂解液（P0010S，碧云天，蘇州）1 ml，反復吹打0.5 min，置于冰上反應30 min。12 000 g，4 ℃，25 min離心，吸取上清于新的1.5 ml EP管。BCA試劑盒（P0018，碧云天，蘇州）檢測蛋白濃度，SDS裂解液調整各管蛋白濃度后，加入5 x上樣緩沖液（P0015，碧云天，蘇州）沸水中充分變性蛋白5 min。加入8%聚丙烯酰胺凝膠中100 V恒壓電泳，之后將蛋白質從聚丙烯酰胺凝膠中轉移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，后于5%脫脂奶粉中封閉2 h。分別于兔抗人Ankyrin-B多克隆抗體（1∶200）及兔抗人β-actin多克隆抗體（bs-0061R，博奧森，1∶1 000），4 ℃過夜。HRP標記的羊抗兔多克隆抗體（1∶1 000），室溫1 h。加入ECL Plus化學發光試劑（P0018，碧云天，蘇州）凝膠成像儀顯影，測定目的和內參條帶的灰度值。將目的條帶的灰度值與內參條帶的灰度值比值結果作為目的蛋白的相對表達量。
1.3 統計學分析
熒光定量PCR采用ΔΔCT法進行計算，Western Blotting的結果用計算灰度值的軟件（ImageJ 1.46）統計灰度值比值。計量資料以均數±標準差（
2 結 果
2.1 microR-1、microR-133及microR-34a的表達
房顫組患者右心房組織中的microR-1表達較竇性心律組顯著降低（0.559±0.252 vs. 3.997±1.251；t=-21.455，P=0.000），microR-133的表達較竇性心律組顯著降低（0.630±0.238 vs. 5.514±1.549；t=24.133，P=0.000），而microR-34a的表達較竇性心律組增高（4.783±2.012 vs.1.350±0.638，t=12.596，P=0.000），見圖 1。
圖1
熒光定量PCR檢測兩組心房microR-1，microR-133及microR-34a的表達
注：AF：房顫，SR：竇性心律；* AF組與SR組比較
2.2 免疫組織化學檢測結果
組織石蠟切片免疫組織化學檢測顯示黃褐色顆粒狀為Ankyrin-B蛋白表達陽性，于光學顯微鏡下可以清楚觀察到房顫患者的組織切片中黃褐色表達較竇性心律組明顯降低，見圖 2。
圖2
Ankyrin-B在心房組織中的表達 免疫組織化學染色 ×40
注：A：房顫組；B：竇性心律組
2.3 Western Blotting檢測結果
Ankyrin-B及內參β-actin蛋白特異性條帶見圖 3A，條帶經ImageJ軟件（Sun Microsystems，USA）分析目的條帶灰度值與相應內參條帶灰度值比值而得，其表達水平統計結果見圖 3B。房顫組心房組織Ankyrin-B表達較竇性心律組明顯降低，且差異有統計學意義（0.66±0.45 vs. 1.09±0.42；t=-3.396，P=0.001）。
圖3
Western Blotting檢測結果
注：A：Western Blotting檢測Ankyrin-B蛋白的表達，其中從左至右依次為房顫組、竇性心律組、房顫組、竇性心律組的不同標本。B：條帶灰度比值，房顫組與竇性心律組間比較 *
3 討 論
我們的研究檢測行心瓣膜置換術房顫患者與竇性心律患者的右心耳組織microR-1、microR-133、microR-34a及蛋白Ankyrin-B的表達變化，PCR、Western Blotting及組織切片的結果顯示，在房顫患者中microR-1、microR-133及蛋白Ankyrin-B的表達較竇性心律患者降低，而microR-34a在房顫患者中表達增高。
最近的研究表明，多種microRNAs的異常表達在心肌肥厚、纖維化、衰老以及心律失常中起著至關重要的作用[11]。MicroRNA是一段約22 bp的單鏈RNA，其可以通過與靶mRNA的3`UTR某段序列特異性結合，從而阻止蛋白質翻譯或直接降解mRNA，抑制該蛋白的表達[12]。MicroR-1及microR-133均屬于肌肉相關microRNAs [13-15]，有文獻報道，在腺病毒轉染介導的microR-1過表達心肌細胞中，可以通過其對PP2A調節亞基B56α的調節，促進自發性Ca2+釋放，并增加CaMII依賴性RyR2磷酸化。PP2A是多功能的絲/蘇氨酸磷酸酶，和心臟的β-腎上腺素信號有關，可以調節多種離子通道和轉運蛋白，如L-型鈣通道、蘭尼堿受體、IP3R和Na+ /K+——三磷酸腺苷（ATP）酶等。而PP2A的另一個調節亞基B56δ又是microR-133的調節靶點[16]。MicroR-34a在多組織纖維化中起著重要的作用[17]。近年來發現，microR-34a在心臟衰老及纖維化中起著重要的作用，在纖維化嚴重的心臟microR-34a表達增加，其可能通過調節PUNTS（即PPP1R10）調節端粒長度、DNA損傷等，從而參與心臟衰老的調節。
而我們之前查詢生物信息學網站，這些micro-RNAs相關的靶蛋白Ankyrin-B在多種遺傳性以及獲得性心臟病中都發揮著重要的作用[18]。錨蛋白是廣泛表達的銜接蛋白，目前的研究發現，錨蛋白家族主要有Ankyrin-R、Ankyrin-B和Ankyrin-G，他們分別由基因Ankyrin-1、Ankyrin-2和Ankyrin-3編碼表達。其中Ankyrin-R的表達只局限于紅細胞、神經元以及骨骼肌，而Ankyrin-B和Ankyrin-G則廣泛表達。在心臟中Ankyrin-B和Ankyrin-G通過調節壓力門控鈉離子通道、鈣離子通道、細胞骨架成分、關鍵細胞轉運蛋白以及離子泵等，參與心肌細胞的興奮性調節。有文獻報道了2個因為Ankyrin-2基因變異造成的嚴重高滲透性竇房結功能不全的家族，這2個家族均伴有不同程度的房顫[19]。且Ankyrin-B與Na+ /Ca2+交換體、Na+ /Ca2+——ATP酶以及三磷酸肌醇受體（IP3R）有機地結合在一起[20-23]。有研究發現，Ankyrin-B參與PP2A的調節，Ankyrin-B可以和PP2A的調節亞單位B56α結合，缺乏Ankyrin-B的心肌細胞B56α表達也顯著下降，從而PP2A催化亞單位活性增加[24]。研究還發現Ankyrin-B和獲得性心臟病有密切關系[25]，利用心肌梗塞動物模型研究發現心肌梗塞邊緣區心肌細胞的Ankyrin-B蛋白表達下調；另外Na+ /Ca2+——ATP酶的表達下降，IP3R和Na+ /Ca2+交換體的表達無明顯變化，但其分布發生改變，同時PP2A的表達升高3倍。在梗塞邊緣區域的心肌細胞出現異常的鈣離子處理能力、離子電流的變化及后去極化以及異常折返的形成，這些變化和房顫早期電重構十分相似。在我們的實驗中檢測到，行風濕性心瓣膜置換術的房顫患者組織Ankyrin-B的表達較竇性心律患者明顯降低，這與microR-34a的表達、作用及其預測結果相一致。
因此，我們推斷microR-34a可能通過調節Ankyrin-B蛋白的表達從而參與房顫的發生、發展。MicroR-34a在通常情況下參與組織纖維化的過程，而Ankyrin-B在以往的研究中主要在電生理方面起到了重要的作用，從我們的結果推測，microR-34a與Ankyrin-B可能通過彼此的相互作用，從而雙方也參與了對方的領域，即microR-34a在房顫的電生理變化及Ankyrin-B參與了房顫的纖維化過程。兩者之間的直接作用關系，我們將在后續的Agomir、Antagomir及雙熒光素酶報告基因的實驗中進一步證實。雖然我們的實驗結果顯示microR-1及microR-133與Ankyrin-B可能沒有直接作用，但是否存在著間接關系尚待后續的實驗進一步驗證。
