引用本文： 劉魯, 金利新, 楊潔茹, 吳濱濱, 張益萌, 韓彥弢, 王春波, 邢立峰. 狹鱈魚皮膠原多肽對去勢大鼠骨微結構影響的研究. 中國修復重建外科雜志, 2017, 31(10): 1214-1219. doi: 10.7507/1002-1892.201704130 復制
骨質疏松癥是一種全身性骨骼疾病，其特征是骨量丟失、骨微結構改變、骨組織脆性增加，導致骨折發生風險增加[1-2]。據近期統計，全世界大約有 20 億骨質疏松患者，僅在美國就有約 2 400 萬人，其每年約有 150 萬名患者發生骨折[3]；因此，骨質疏松癥也成為了當今社會不容忽視的健康問題之一。目前雌激素替代療法是預防和治療骨質疏松癥的首選方案[4]，但長期服用雌激素毒副作用較大。因而，研究毒副作用小、效果顯著的治療方法具有重要臨床意義。研究發現，膠原蛋白肽對骨質疏松癥有一定治療作用，包括：① 刺激成骨細胞合成，降低破骨細胞活性，增強骨形成，改善骨微結構；② 維持骨組織密度；③ 擴大骨皮質面積，增強骨骼強度；④ 降低骨吸收程度[5]。目前研究的膠原蛋白肽主要從阿膠中提取，阿膠是從驢皮中提取出的一種膠原蛋白[6-7]，能夠促進成骨細胞增殖與分化[8]，增加骨中鈣、磷含量及骨質密度。狹鱈魚皮膠原多肽同樣屬于小分子多肽，是狹鱈魚皮經酶解提純后獲得的膠原蛋白肽，其是否具有抗骨質疏松作用尚未見確切報道。為此，我們采用去勢大鼠骨質疏松模型，通過觀察大鼠骨組織形態學、骨形態計量學參數以及降鈣素受體（caltitonin receptor，CTR）、IL-1 的變化，探究狹鱈魚皮膠原多肽對絕經后骨質疏松癥的治療作用。報告如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及主要試劑、儀器
SPF 級成年 Wistar 雌性大鼠 60 只，體質量（250±10）g，由青島派特福德白鼠養殖專業合作社提供。狹鱈魚皮膠原多肽（青島福生食品有限公司）。4% 多聚甲醛（天津光復精細化研究所）；水合氯醛（天津瑞金特化學品有限公司）；EDTA-2Na（北京索萊寶生物科技有限公司）；CTR 測定試劑盒、IL-1 測定試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。
RM2016 切片機（上海徠卡儀器有限公司）；電子天平（上海奧豪斯公司）；DNP-9162 電熱恒溫培養箱（上海三發科學儀器有限公司）；光學顯微鏡（Olympus 公司，日本）；Image-Pro Plus 6.0 軟件（Media Cybernetics 公司，美國）。
1.2 實驗分組及方法
將 60 只 Wistar 雌性大鼠隨機分為 5 組，每組 12 只，分別為正常對照組（A 組）、骨質疏松模型組（B 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽預防組（C 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽低劑量治療組（D 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽高劑量治療組（E 組）。A 組大鼠不制備模型。B、C、D、E 組采用摘除雙側卵巢法建立去勢大鼠骨質疏松模型。腹腔注射 3% 水合氯醛麻醉后，無菌條件下切除大鼠雙側卵巢，局部涂撒青霉素粉，預防感染，關閉切口。術后 7 d 每天腹腔注青霉素 0.2～0.3 mL。
C 組從術前 4 周開始，每天按照 1.0 g/kg 行狹鱈魚皮膠原多肽灌胃，直至術后 6 周。D、E 組從術后 6 周開始每天分別按照 0.5 g/kg 和 1.0 g/kg 行狹鱈魚皮膠原多肽灌胃，連續 6 周。A、B 組于術后同時間點給予等體積生理鹽水灌胃。末次給藥后 24 h，取各組大鼠同上法麻醉后進行觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 一般情況 觀察各組大鼠存活情況以及術后大鼠毛發、精神、活動、反應及飲食情況。
1.3.2 大鼠股骨灰度值測定 取 A、B 組大鼠以仰臥位固定，攝股骨 X 線片，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件測定其灰度值。
1.3.3 組織學觀察 取各組大鼠左側脛骨近端 1/3 骨組織，置于 4% 多聚甲醛固定 48 h，10%EDTA-2Na 微波脫鈣，石蠟包埋，切片，片厚 5 μm。取部分切片常規 HE 染色，光鏡下觀察骨小梁吸收陷窩變化。于 100 倍鏡下，以生長板下 1～4 mm 近皮質處為測量范圍，每張切片隨機選取 3 個視野，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件測算骨組織形態計量學參數[9]，包括骨小梁數量（trabecular number，TN）、平均骨小梁厚度（mean trabecular plate thickness，MTPT）、平均骨小梁間距（mean trabecular plate spacing，MTPS）、骨小梁體積百分比（trabecular bone volume，TBV）、平均骨皮質厚度（mean bone cortical thickness，MBCT），取均值。
1.3.4 免疫組織化學染色 取各組剩余切片脫蠟至水，0.1% 胰蛋白酶抗原修復 25 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），3%H2O2 消化 10 min，過氧化酶室溫孵育 10 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），將一抗（兔抗大鼠 CTR 多克隆抗體和兔抗大鼠 IL-1 多克隆抗體），按 1∶200 比例配制后加入抗體稀釋液中，滴加至切片，37℃ 孵育 1 h，4℃ 過夜；PBS 漂洗 3 次（5 min/次），加入山羊抗兔 IgG 二抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），DAB 染色，自來水沖洗，蘇木素復染，自來水沖洗 4 次，脫水、二甲苯透明、封片。光鏡下觀察，細胞質呈棕黃色顆粒者為陽性細胞。于 400 倍鏡下，取不重疊的 4 個視野，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件計算陽性細胞積分吸光度（IA）值，取均值。
1.4 統計學方法
采用 SPSS22.0 統計軟件進行分析。數據以均數±標準差表示，兩組間比較采用獨立樣本t 檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 LSD 檢驗；檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 一般情況
術中 5 只大鼠死亡，其中 B 組 2 只、C 組 2 只、E 組 1 只；術后感染死亡 2 只，A、B 組各 1 只；因灌胃誤入氣管死亡 5 只，其中 C 組 1 只、D 組 2 只、E 組 2 只；其余大鼠均存活至實驗完成。術后 B 組大鼠毛發稀疏，精神萎靡，行動緩慢，反應遲鈍，飲食變差；A、C、D、E 組大鼠毛發均光亮順滑，精神、活動、反應均正常、飲食良好。
2.2 大鼠股骨灰度值測定
A、B 組大鼠股骨灰度值分別為 110.12±2.01、65.36±2.43，比較差異有統計學意義（t=45.130，P=0.000），表明去勢大鼠骨質疏松模型制備成功。
2.3 組織學觀察
鏡下觀察見，B 組骨小梁吸收陷窩較其余組明顯增多、增大。E 組較 D 組骨小梁吸收陷窩數目減少、骨小梁吸收陷窩減小；與 C 組相比無明顯差異。見圖 1。骨組織形態計量學參數比較：A、C、E 組 TN、MTPS、TBV、MBCT 與 B 組比較，差異有統計學意義（P<0.05）；MTPT 與 B 組比較差異無統計學意義（P>0.05）。D 組僅 MTPS 和 TBV 與 B 組比較差異有統計學意義（P<0.05）。C 組各骨組織形態計量學參數與 D、E 組比較，差異均有統計學意義（P<0.05）；C 組與 A 組比較，除 TN 外，其余各指標比較差異均有統計學意義（P<0.05）。 D、E 組與 A 組比較，僅 D 組 TN、MBCT、MTPS、TBV 及 E 組 MTPS 差異有統計學意義（P<0.05），其余指標比較差異均無統計學意義（P>0.05）。D、E 組間僅 MTPS、TBV、MBCT 比較差異有統計學意義（P<0.05），TN、MTPT 比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
圖1
各組組織學觀察（HE×400）
箭頭示骨小梁吸收陷窩 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure1. Histological observation of each group (HE×400)Arrow indicated trabecular bone a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
表1
各組大鼠骨組織形態計量學參數比較（
）
Table1.
Comparison of histological parameters of bone tissue between groups (
)
2.4 免疫組織化學染色觀察
A、C、D、E 組 CTR、IL-1 表達水平較 B 組降低，C、E 組低于 D 組，差異有統計學意義（P<0.05）；其余組間比較差異均無統計學意義（P>0.05）。見圖 2、3 及表 2。
表2
各組 CTR 及 IL-1 表達水平比較（
）
Table2.
Comparisonof the expression levels of CTR and IL-1 bet-ween groups (
)
圖2
各組 CTR 免疫組織化學染色觀察（DAB×400）
箭頭示陽性細胞 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure2. Immunohistochemical staining of CTR in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
圖3
各組 IL-1 免疫組織化學染色觀察（DAB×400）
箭頭示陽性細胞 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure3. Immunohistochemical staining of IL-1 in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
3 討論
狹鱈魚皮膠原多肽是狹鱈魚皮經酶解法獲得的小分子量多肽，符合國家對水產膠原蛋白粉的要求[10]，研究表明其具有抗氧化、保護成骨細胞[11]、促進鈣吸收的作用[12]。另外，有報道指出狹鱈魚皮膠原蛋白多肽還可用于礦物質缺乏癥、高血壓、糖尿病等慢性病的治療[13]。骨組織形態計量學作為一項重要的參考指標，可對骨顯微結構進行精確定量分析，尤其是對骨小梁網狀系統、骨基質結構、骨表面、骨間質和骨轉換進行精確描述，有助于揭示骨組織生理與病理的改變。結果表明，與 B 組比較，C、E 組 TN、TBV、MBCT 均明顯升高，MTPS 明顯減小，且 C 組優于 E 組。由此可見，狹鱈魚皮膠原多肽能夠增加骨組織中骨小梁數量，增強骨韌性，防止骨基質丟失，減輕骨組織損傷。
骨骼構建是骨形成和骨吸收作用過程，而這一過程主要與成骨細胞和破骨細胞的相互作用有關。當骨吸收強于骨形成時，引起骨量丟失，嚴重時則引發骨質疏松。目前已證實有多種因子參與了該過程，包括 CTR、IL-1 以及 IL-6[14-16]。CTR 是降鈣素的特異性結合位點，廣泛分布于破骨細胞中[17]，同時也是破骨細胞的特征性標志之一。柴建勝等[18]觀察去勢骨質疏松大鼠肝、腦、腎、小腸及股骨中 CTR 的表達，發現 CTR 在肝、腦、腎中呈低表達，而在小腸及股骨中呈高表達。有學者認為，降鈣素與降鈣素受體特異性結合后，通過抑制 RANKL（破骨活化因子）的表達而抑制骨重吸收[19-20]。IL-1 是由巨噬細胞產生的一種具有較高活性的小分子蛋白，主要參與機體炎性反應過程。Brandstr?m 等[21]研究表明，IL-1 通過促進破骨細胞前體的分化與成熟而加快骨吸收，進而增強破骨細胞的活性，并抑制破骨細胞的凋亡。有研究證實，雌激素分泌減少后，表達 IL-1 的細胞增多，IL-1 含量增加[22]，骨髓單核細胞向破骨細胞的轉化加快，破骨細胞數目增多，骨吸收活性增強。不僅如此，IL-1 還可刺激多種結締組織產生膠原酶，降解骨基質中的膠原[23]，引起骨量丟失。IL-6 與 IL-1 相似，也是骨代謝過程中重要的細胞因子，二者之間的關系非常密切。Manolagas 等[24]研究認為 IL-1 能夠以 IL-6 為中介作用于破骨細胞，促進骨吸收；而 IL-6 被認為在骨質疏松的發病過程中發揮重要作用，它能刺激破骨細胞前體增殖與分化，促進破骨細胞形成，增強骨吸收。因此，我們對骨質疏松模型中 CTR、IL-1 兩種因子表達進行了進一步研究。結果顯示，C、D、E 組中 CTR、IL-1 表達水顯著降低，而 C 組與 A 組比較差異無統計學意義，故狹鱈魚皮膠原多肽能夠降低 CTR、IL-1 的表達水平，其作用機制可能是通過抑制破骨細胞活性，起到保護骨組織的作用，但未發現狹鱈魚皮膠原多肽對正常大鼠有預防骨質疏松的作用。雖然本研究中各狹鱈魚皮膠原多肽組 CTR 及 IL-1 表達水平均不同程度降低，但僅代表給予膠原多肽 6 周時情況，隨著治療時間的延長這兩種指標是否進一步變化，將是后續研究問題之一。
骨質疏松癥是一種全身性骨骼疾病，其特征是骨量丟失、骨微結構改變、骨組織脆性增加，導致骨折發生風險增加[1-2]。據近期統計，全世界大約有 20 億骨質疏松患者，僅在美國就有約 2 400 萬人，其每年約有 150 萬名患者發生骨折[3]；因此，骨質疏松癥也成為了當今社會不容忽視的健康問題之一。目前雌激素替代療法是預防和治療骨質疏松癥的首選方案[4]，但長期服用雌激素毒副作用較大。因而，研究毒副作用小、效果顯著的治療方法具有重要臨床意義。研究發現，膠原蛋白肽對骨質疏松癥有一定治療作用，包括：① 刺激成骨細胞合成，降低破骨細胞活性，增強骨形成，改善骨微結構；② 維持骨組織密度；③ 擴大骨皮質面積，增強骨骼強度；④ 降低骨吸收程度[5]。目前研究的膠原蛋白肽主要從阿膠中提取，阿膠是從驢皮中提取出的一種膠原蛋白[6-7]，能夠促進成骨細胞增殖與分化[8]，增加骨中鈣、磷含量及骨質密度。狹鱈魚皮膠原多肽同樣屬于小分子多肽，是狹鱈魚皮經酶解提純后獲得的膠原蛋白肽，其是否具有抗骨質疏松作用尚未見確切報道。為此，我們采用去勢大鼠骨質疏松模型，通過觀察大鼠骨組織形態學、骨形態計量學參數以及降鈣素受體（caltitonin receptor，CTR）、IL-1 的變化，探究狹鱈魚皮膠原多肽對絕經后骨質疏松癥的治療作用。報告如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及主要試劑、儀器
SPF 級成年 Wistar 雌性大鼠 60 只，體質量（250±10）g，由青島派特福德白鼠養殖專業合作社提供。狹鱈魚皮膠原多肽（青島福生食品有限公司）。4% 多聚甲醛（天津光復精細化研究所）；水合氯醛（天津瑞金特化學品有限公司）；EDTA-2Na（北京索萊寶生物科技有限公司）；CTR 測定試劑盒、IL-1 測定試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。
RM2016 切片機（上海徠卡儀器有限公司）；電子天平（上海奧豪斯公司）；DNP-9162 電熱恒溫培養箱（上海三發科學儀器有限公司）；光學顯微鏡（Olympus 公司，日本）；Image-Pro Plus 6.0 軟件（Media Cybernetics 公司，美國）。
1.2 實驗分組及方法
將 60 只 Wistar 雌性大鼠隨機分為 5 組，每組 12 只，分別為正常對照組（A 組）、骨質疏松模型組（B 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽預防組（C 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽低劑量治療組（D 組）、骨質疏松模型+狹鱈魚皮膠原多肽高劑量治療組（E 組）。A 組大鼠不制備模型。B、C、D、E 組采用摘除雙側卵巢法建立去勢大鼠骨質疏松模型。腹腔注射 3% 水合氯醛麻醉后，無菌條件下切除大鼠雙側卵巢，局部涂撒青霉素粉，預防感染，關閉切口。術后 7 d 每天腹腔注青霉素 0.2～0.3 mL。
C 組從術前 4 周開始，每天按照 1.0 g/kg 行狹鱈魚皮膠原多肽灌胃，直至術后 6 周。D、E 組從術后 6 周開始每天分別按照 0.5 g/kg 和 1.0 g/kg 行狹鱈魚皮膠原多肽灌胃，連續 6 周。A、B 組于術后同時間點給予等體積生理鹽水灌胃。末次給藥后 24 h，取各組大鼠同上法麻醉后進行觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 一般情況 觀察各組大鼠存活情況以及術后大鼠毛發、精神、活動、反應及飲食情況。
1.3.2 大鼠股骨灰度值測定 取 A、B 組大鼠以仰臥位固定，攝股骨 X 線片，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件測定其灰度值。
1.3.3 組織學觀察 取各組大鼠左側脛骨近端 1/3 骨組織，置于 4% 多聚甲醛固定 48 h，10%EDTA-2Na 微波脫鈣，石蠟包埋，切片，片厚 5 μm。取部分切片常規 HE 染色，光鏡下觀察骨小梁吸收陷窩變化。于 100 倍鏡下，以生長板下 1～4 mm 近皮質處為測量范圍，每張切片隨機選取 3 個視野，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件測算骨組織形態計量學參數[9]，包括骨小梁數量（trabecular number，TN）、平均骨小梁厚度（mean trabecular plate thickness，MTPT）、平均骨小梁間距（mean trabecular plate spacing，MTPS）、骨小梁體積百分比（trabecular bone volume，TBV）、平均骨皮質厚度（mean bone cortical thickness，MBCT），取均值。
1.3.4 免疫組織化學染色 取各組剩余切片脫蠟至水，0.1% 胰蛋白酶抗原修復 25 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），3%H2O2 消化 10 min，過氧化酶室溫孵育 10 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），將一抗（兔抗大鼠 CTR 多克隆抗體和兔抗大鼠 IL-1 多克隆抗體），按 1∶200 比例配制后加入抗體稀釋液中，滴加至切片，37℃ 孵育 1 h，4℃ 過夜；PBS 漂洗 3 次（5 min/次），加入山羊抗兔 IgG 二抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），DAB 染色，自來水沖洗，蘇木素復染，自來水沖洗 4 次，脫水、二甲苯透明、封片。光鏡下觀察，細胞質呈棕黃色顆粒者為陽性細胞。于 400 倍鏡下，取不重疊的 4 個視野，采用 Image-Pro Plus 6.0 軟件計算陽性細胞積分吸光度（IA）值，取均值。
1.4 統計學方法
采用 SPSS22.0 統計軟件進行分析。數據以均數±標準差表示，兩組間比較采用獨立樣本t 檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 LSD 檢驗；檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 一般情況
術中 5 只大鼠死亡，其中 B 組 2 只、C 組 2 只、E 組 1 只；術后感染死亡 2 只，A、B 組各 1 只；因灌胃誤入氣管死亡 5 只，其中 C 組 1 只、D 組 2 只、E 組 2 只；其余大鼠均存活至實驗完成。術后 B 組大鼠毛發稀疏，精神萎靡，行動緩慢，反應遲鈍，飲食變差；A、C、D、E 組大鼠毛發均光亮順滑，精神、活動、反應均正常、飲食良好。
2.2 大鼠股骨灰度值測定
A、B 組大鼠股骨灰度值分別為 110.12±2.01、65.36±2.43，比較差異有統計學意義（t=45.130，P=0.000），表明去勢大鼠骨質疏松模型制備成功。
2.3 組織學觀察
鏡下觀察見，B 組骨小梁吸收陷窩較其余組明顯增多、增大。E 組較 D 組骨小梁吸收陷窩數目減少、骨小梁吸收陷窩減小；與 C 組相比無明顯差異。見圖 1。骨組織形態計量學參數比較：A、C、E 組 TN、MTPS、TBV、MBCT 與 B 組比較，差異有統計學意義（P<0.05）；MTPT 與 B 組比較差異無統計學意義（P>0.05）。D 組僅 MTPS 和 TBV 與 B 組比較差異有統計學意義（P<0.05）。C 組各骨組織形態計量學參數與 D、E 組比較，差異均有統計學意義（P<0.05）；C 組與 A 組比較，除 TN 外，其余各指標比較差異均有統計學意義（P<0.05）。 D、E 組與 A 組比較，僅 D 組 TN、MBCT、MTPS、TBV 及 E 組 MTPS 差異有統計學意義（P<0.05），其余指標比較差異均無統計學意義（P>0.05）。D、E 組間僅 MTPS、TBV、MBCT 比較差異有統計學意義（P<0.05），TN、MTPT 比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
圖1
各組組織學觀察（HE×400）
箭頭示骨小梁吸收陷窩 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure1. Histological observation of each group (HE×400)Arrow indicated trabecular bone a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
表1
各組大鼠骨組織形態計量學參數比較（
）
Table1.
Comparison of histological parameters of bone tissue between groups (
)
2.4 免疫組織化學染色觀察
A、C、D、E 組 CTR、IL-1 表達水平較 B 組降低，C、E 組低于 D 組，差異有統計學意義（P<0.05）；其余組間比較差異均無統計學意義（P>0.05）。見圖 2、3 及表 2。
表2
各組 CTR 及 IL-1 表達水平比較（
）
Table2.
Comparisonof the expression levels of CTR and IL-1 bet-ween groups (
)
圖2
各組 CTR 免疫組織化學染色觀察（DAB×400）
箭頭示陽性細胞 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure2. Immunohistochemical staining of CTR in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
圖3
各組 IL-1 免疫組織化學染色觀察（DAB×400）
箭頭示陽性細胞 a. A 組；b. B 組；c. C 組；d. D 組；e. E 組
Figure3. Immunohistochemical staining of IL-1 in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
3 討論
狹鱈魚皮膠原多肽是狹鱈魚皮經酶解法獲得的小分子量多肽，符合國家對水產膠原蛋白粉的要求[10]，研究表明其具有抗氧化、保護成骨細胞[11]、促進鈣吸收的作用[12]。另外，有報道指出狹鱈魚皮膠原蛋白多肽還可用于礦物質缺乏癥、高血壓、糖尿病等慢性病的治療[13]。骨組織形態計量學作為一項重要的參考指標，可對骨顯微結構進行精確定量分析，尤其是對骨小梁網狀系統、骨基質結構、骨表面、骨間質和骨轉換進行精確描述，有助于揭示骨組織生理與病理的改變。結果表明，與 B 組比較，C、E 組 TN、TBV、MBCT 均明顯升高，MTPS 明顯減小，且 C 組優于 E 組。由此可見，狹鱈魚皮膠原多肽能夠增加骨組織中骨小梁數量，增強骨韌性，防止骨基質丟失，減輕骨組織損傷。
骨骼構建是骨形成和骨吸收作用過程，而這一過程主要與成骨細胞和破骨細胞的相互作用有關。當骨吸收強于骨形成時，引起骨量丟失，嚴重時則引發骨質疏松。目前已證實有多種因子參與了該過程，包括 CTR、IL-1 以及 IL-6[14-16]。CTR 是降鈣素的特異性結合位點，廣泛分布于破骨細胞中[17]，同時也是破骨細胞的特征性標志之一。柴建勝等[18]觀察去勢骨質疏松大鼠肝、腦、腎、小腸及股骨中 CTR 的表達，發現 CTR 在肝、腦、腎中呈低表達，而在小腸及股骨中呈高表達。有學者認為，降鈣素與降鈣素受體特異性結合后，通過抑制 RANKL（破骨活化因子）的表達而抑制骨重吸收[19-20]。IL-1 是由巨噬細胞產生的一種具有較高活性的小分子蛋白，主要參與機體炎性反應過程。Brandstr?m 等[21]研究表明，IL-1 通過促進破骨細胞前體的分化與成熟而加快骨吸收，進而增強破骨細胞的活性，并抑制破骨細胞的凋亡。有研究證實，雌激素分泌減少后，表達 IL-1 的細胞增多，IL-1 含量增加[22]，骨髓單核細胞向破骨細胞的轉化加快，破骨細胞數目增多，骨吸收活性增強。不僅如此，IL-1 還可刺激多種結締組織產生膠原酶，降解骨基質中的膠原[23]，引起骨量丟失。IL-6 與 IL-1 相似，也是骨代謝過程中重要的細胞因子，二者之間的關系非常密切。Manolagas 等[24]研究認為 IL-1 能夠以 IL-6 為中介作用于破骨細胞，促進骨吸收；而 IL-6 被認為在骨質疏松的發病過程中發揮重要作用，它能刺激破骨細胞前體增殖與分化，促進破骨細胞形成，增強骨吸收。因此，我們對骨質疏松模型中 CTR、IL-1 兩種因子表達進行了進一步研究。結果顯示，C、D、E 組中 CTR、IL-1 表達水顯著降低，而 C 組與 A 組比較差異無統計學意義，故狹鱈魚皮膠原多肽能夠降低 CTR、IL-1 的表達水平，其作用機制可能是通過抑制破骨細胞活性，起到保護骨組織的作用，但未發現狹鱈魚皮膠原多肽對正常大鼠有預防骨質疏松的作用。雖然本研究中各狹鱈魚皮膠原多肽組 CTR 及 IL-1 表達水平均不同程度降低，但僅代表給予膠原多肽 6 周時情況，隨著治療時間的延長這兩種指標是否進一步變化，將是后續研究問題之一。
