引用本文： 李靖, 巫麗娟, 胡雪嬌, 趙珍珍, 呂陽花, 應斌武. ATG3 基因多態性與中國西部結核病患者的易感性及癥狀相關性研究. 華西醫學, 2019, 34(8): 850-856. doi: 10.7507/1002-0179.201907071 復制
結核病仍是全球最主要的健康問題[1]，近年來有大量關于結核病發生發展的研究報道，有研究表明宿主遺傳基因對結核病易感性有影響[2-4]，同時也可影響結核病的癥狀和臨床治療轉歸[5-6]；進一步研究表明，結核病的發展和臨床表現與宿主遺傳多態性顯著相關[7]，許多基因位點已被確定與結核病的發生有關，包括 Wnt 信號通路的遺傳變異[8]、細胞因子和趨化因子[9]、Toll 樣受體[10]、HLA II 基因 rs557011、rs9271378 和 rs9272785 單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）[11]以及 SFRP1 基因 rs4736958 和 rs7832767 SNP[12]等。然而，這些研究還不足以完全理解結核病的發生發展，其具體發病機制尚不完全清楚。近年來，人們對自噬的興趣和認識不斷增加，研究發現自噬在抗結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的免疫應答中起著不可或缺的作用[13]，并在宿主的抗結核防御中發揮重要作用[14-17]。然而關于自噬相關基因與結核病易感性關系的研究相對較少。自噬相關基因 3（autophagy-related gene 3，ATG3）是細胞自噬信號轉導的重要組成部分，有研究指出，MTB 能調控細胞微 RNA（microRNA，miRNA）表達以維持其自身存活，如 miRNA-155 能抑制 ATG3 基因的表達而影響自噬[18]，但 AGT3 與結核病遺傳易感性的關系尚未確定，研究 ATG3 基因 SNP 是否參與結核病的發生發展具有重要意義。因此，我們開展了一項中國西部居民病例對照研究，以了解 ATG3 SNP 與結核病發生發展和臨床指標的關系。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 研究對象
納入 2014 年 12 月—2015 年 11 月于四川大學華西醫院就診的全部疑似結核病患者和同期不相關健康體檢者按納入排除標準進行篩選，最終確定 476 例結核病患者進入結核病組，475 例健康體檢者進入健康對照組。納入標準：① 結核病組：參考我國肺結核診斷標準[19]，由 2 名經驗豐富的醫生根據典型結核病癥狀、MTB 的微生物學和放射學證據確診的活動性肺結核病患者。② 健康對照組：既往無結核病史，影像學檢查無異常，痰涂片、MTB 核酸檢測結果為陰性，體檢結果正常。排除標準（符合其一即排除）：① 人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒血清學檢測呈陽性者；② 系統性慢性疾病如高血壓、糖尿病等；③ 腫瘤患者；④ 使用免疫抑制劑或增強劑的患者；⑤ 自身免疫性疾病；⑥ 其他呼吸系統疾病如肺部感染和慢性阻塞性肺疾病等。本病例對照研究經四川大學華西醫院臨床試驗與生物醫學倫理專委會審查通過［2014 年審（198）號］，所有研究對象均提供書面知情同意書以參與研究。
1.2 研究方法
1.2.1 SNP 選擇原則
參考文獻[20]，候選 SNP 必須全部滿足以下原則：① 優先考慮基因啟動子區或非翻譯區的功能調控性 SNP 位點；② 在中國北京漢族人群中的最小等位基因頻率（minor allele frequency，MAF）≥10%；③ 目標 SNP 遵循連鎖不平衡值 r2>0.8；④ 能成功設計出聚合酶鏈式反應引物，預實驗證明引物的可用性；⑤ 目標 SNP 位點附近盡量避免其他 SNP 的干擾。
1.2.2 基因分型
使用乙二胺四乙酸抗凝管采集所有受試者的外周靜脈血 3～5 mL。采用德國 Qiagen 公司的 QIAamp? DNA Blood Midi 試劑從血樣中提取基因組 DNA，采用上海天昊生物技術公司的“2×48-Plex SNPscan TM Kit”高通量基因分型技術對 ATG3 基因上篩選出的 SNP 進行分型，以雙蒸水為陰性對照。為控制質量，隨機抽取 DNA 質量較高的 10% 樣本進行了重復分析，質量控制樣本的符合率為 100%。
1.2.3 臨床數據收集及實驗室指標檢測
① 從病歷中查閱研究人群的人口學資料和臨床資料，包括年齡、性別、治療情況、基礎疾病等。② 實驗室檢測指標：全血細胞計數采用全自動血液學分析儀 XE-5000TM（日本 Sysmex 公司），生化項目檢測采用 Cobas 701（德國 Roche 公司），C 反應蛋白（C-reactive protein，CRP）檢測采用 IMMAGE 800（美國 Beckman Coulter 公司），紅細胞沉降率（血沉）采用全自動血沉分析儀（意大利 Alifax 公司）測定。MTB 病原學檢測包括涂片抗酸染色鏡檢、MTB 培養和 MTB-DNA 分子檢測，其中 MTB 培養用 MGIT 960 系統（美國 Becton Dickinson 公司），MTB-DNA 檢測采用實時熒光定量分析儀 LightCycler 480Ⅱ（德國 Roche 公司）。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 22.0、PLINK software（version 1.90）和 Haploview software（version 4.2）進行數據統計分析。正態分布計量資料采用均數±標準差表示，非正態分布的計量資料采用中位數（最小值，最大值）表示；計數資料采用絕對數或百分比表示。正態分布的計量資料兩組間比較采用 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。非正態分布或不符合參數檢驗適用條件的計量資料，兩組間比較采用 Mann-Whitney 秩和檢驗，多組間比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗。計數資料組間比較采用 χ2檢驗或 Fisher 確切概率法。應用哈迪-溫伯格平衡法（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）進行遺傳平衡檢驗，采用 PLINK 軟件對 ATG3 基因 SNP 的等位基因、基因型和遺傳模型在結核病組和健康對照組中的分布情況進行分析，采用 logistic 回歸模型，多因素分析時根據年齡、性別進行校正，再采用 Bonferroni 方法進行多重檢驗校正，以評價 SNP、結核特征與易感性之間的關系。利用 Haploview 軟件分析單倍型。其關聯強度以比值比（odds ratio，OR）和 95% 置信區間（confidence interval，CI）表示。檢驗水準 α=0.05，雙側檢驗，MAF≥10%。
2 結果
2.1 人口特征和實驗室臨床信息
結核病組和健康對照組的患者年齡和性別相匹配，在年齡或性別上比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與健康對照組相比，結核病組的血小板計數、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、CRP 和血沉水平均明顯高于健康對照組（P<0.001）。結核病組的血紅蛋白、紅細胞比容和紅細胞計數水平均低于健康對照組（P<0.001）。結核病組患者接受實驗室指標檢查、抗酸染色、MTB-DNA、結核培養的比例分別為 100%（476/476）、93.70%（446/476）、64.92%（309/476）、19.54%（93/476），接受過結核病培養檢查的結核病患者數量相對較少，只有 93 例結核病患者接受過結核病培養檢查；在結核病組中，MTB-DNA 陽性率為 55.99%（173/309），明顯高于顯微鏡涂片陽性率 31.39%（140/446）和細菌培養陽性率 24.73%（23/93）；臨床表現以咳嗽（64.50%）、發熱（44.54%）為主；360 例患者入院時接受了 CT 掃描，其中 67.78%（244/360）出現了雙側影像異常表現，28.33%（102/360）出現了單側影像異常表現，3.89%（14/360）未出現影像異常表現。見表 1、2。
表1
結核病組和健康對照組的人口特征和實驗室信息
表2
結核病組臨床信息（n=476）
2.2 ATG3 基因的 SNP 與西部人群結核病易感性的相關性
根據 SNP 的篩選原則，最終確定了 ATG3 基因中的 3 個 SNP（rs2638029、rs2638037、rs3732817），這些 SNP 在 476 例結核病患者和 475 例健康對照個體中均成功進行了基因分型，各基因型頻率分布符合 HWE（P>0.05），見表 3。
表3
ATG3 基因內 3 個 SNP 基本信息
結核病組與健康對照組 3 個 SNP 位點在等位基因頻率、基因型分布、不同遺傳模型分析中，經性別、年齡校正后，除 rs2638037 的 GA 基因型［OR=1.375，95%CI（1.048，1.805），P=0.022］、顯性模型 GG+GA［OR=1.326，95%CI（1.024，1.717），P=0.032］外，其余差異均無統計學意義（P>0.05）。但經 Bonferroni 校正后 GA 基因型及顯性模型亦均無統計學意義（P=0.132、0.201），見表 4～6。
表4
rs2638029 G>C 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
表6
rs3732817 A>G 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
表5
rs2638037 A>G 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
2.3 單倍型分析
對 ATG3 基因多態性進行的單倍型分析，發現 3 個 SNP 呈現強連鎖不平衡（linkage disequilibrium，LD），系數 D'> 0.92，形成一個單倍型，見圖 1。結核病組和健康對照組的單倍型頻率及其與結核病風險的關聯見表 7，單倍型 CGA 與結核易感性相關［OR=1.262，95%CI（1.001，1.593），P=0.048］。
圖1
單倍型分析
表7
ATG3 單倍型分析與結核病風險的相關性
2.4 rs2638037 SNP 與結核病臨床癥狀及實驗室指標的相關性
根據 SNP rs2638037 不同基因型與常見結核病癥狀及實驗室指標之間的潛在關系，可見 43.33%（13/30）的 GG 型患者有體重減輕癥狀，23.78%（44/185）的 GA 型患者有體重減輕癥狀，而 AA 型患者 34.48%（90/261）有體重減輕癥狀，體重減輕在不同基因型分組結核病患者中的例數，差異有統計學意義（P=0.017），而其他臨床參數及實驗室指標與 rs2638037 基因型無統計學意義（P>0.05），見表 8。
表8
rs2638037 SNP 與結核病患者臨床特征的關系
3 討論
自噬是一種保護性機制，在體內感染研究中，自噬相關基因可調節單核細胞中 MTB 特異性通路從而影響結核易感性[21-24]。我們假設 ATG3 基因上存在結核易感性候選位點，對此進行了 3 個 SNP（rs2638029、rs2638037 和 rs3732817）與結核病發生發展的相關研究。本研究發現經年齡、性別校正后的 rs2638037 基因座的顯性模型（GG+GA vs. AA）及 GA 基因型的受試者與 AA 基因型相比患結核病的風險增高，但對 P 值再經 Bonferroni 校正后則沒有相關性，單倍型 CGA 與結核易感性相關，結核病患者的體重減輕與 rs2638037 基因型有關。
與中國其他地區相比，西部地區結核病的年發病率明顯較高，每 10 萬人中就有 695 例結核病[25]。MTB 感染會導致一系列結果，包括潛伏感染、免疫低下、亞臨床疾病和癥狀性結核病，宿主的遺傳變異可能會影響到結核病發病的任何階段。雖然有研究表明 IRGM（一種自噬基因）中的多態性與多種群體中的結核病有關[26-28]，也有報道自噬相關基因的其他 SNP 如 rs12297124 與結核感染有關[29]。但對于結核病患者，我們在 PubMed 上尚未找到關于 SNP rs2638037 的相關文獻；在本研究中，ATG3 基因的 3 個 SNP 形成的單倍型 CGA 與中國西部人群的結核病感染風險相關。ATG3 基因編碼的自噬相關蛋白有助于微管相關蛋白輕鏈 3 與脂質磷脂酰乙醇胺的結合[30]，該基因的 SNP 如何調節人類 MTB 易感性，如何影響結核病的臨床癥狀，其機制尚不清楚。有研究指出 ATG3 過表達能抑制蛋白激酶 B（protein kinase B，AKT）和哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的磷酸化水平，推測 ATG3 過表達在人乳腺癌細胞（michigan cancer foundation-7，MCF-7）中能夠抑制 AKT/mTOR 信號途徑促進細胞自噬[31]。杜晨陽等[32]的研究指出 miRNA-30a-3p 能通過下調自噬相關基因 ATG3 轉錄物表達降低肝癌細胞自噬水平。我們推測位于 ATG3 基因內含子區域的 SNP rs2638037 可能影響 ATG3 與許多 miRNA 之間的相互作用，并使 ATG3 轉錄物表達失調，ATG3 的調節功能尚需進一步的功能研究。
本研究是第 1 次提出 SNP rs2638037 多態性與結核病臨床疾病特征相關聯。但本研究還存在一些局限性。首先，納入結核病組樣本量較小，因此必須研究更多的樣本和不同的群體。其次，由于研究條件限制，未對 ATG3 基因進行結核感染免疫調節機制研究。此外，rs2638037 基因型與體重減輕需要進一步研究和功能實驗驗證。
總之，ATG3 基因中 3 個 SNP 的單倍型 CGA 可能與結核病的發生發展有關，中國西部結核病患者的 SNP rs2638037 可能與臨床癥狀有關，未來仍需深入研究。
結核病仍是全球最主要的健康問題[1]，近年來有大量關于結核病發生發展的研究報道，有研究表明宿主遺傳基因對結核病易感性有影響[2-4]，同時也可影響結核病的癥狀和臨床治療轉歸[5-6]；進一步研究表明，結核病的發展和臨床表現與宿主遺傳多態性顯著相關[7]，許多基因位點已被確定與結核病的發生有關，包括 Wnt 信號通路的遺傳變異[8]、細胞因子和趨化因子[9]、Toll 樣受體[10]、HLA II 基因 rs557011、rs9271378 和 rs9272785 單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）[11]以及 SFRP1 基因 rs4736958 和 rs7832767 SNP[12]等。然而，這些研究還不足以完全理解結核病的發生發展，其具體發病機制尚不完全清楚。近年來，人們對自噬的興趣和認識不斷增加，研究發現自噬在抗結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的免疫應答中起著不可或缺的作用[13]，并在宿主的抗結核防御中發揮重要作用[14-17]。然而關于自噬相關基因與結核病易感性關系的研究相對較少。自噬相關基因 3（autophagy-related gene 3，ATG3）是細胞自噬信號轉導的重要組成部分，有研究指出，MTB 能調控細胞微 RNA（microRNA，miRNA）表達以維持其自身存活，如 miRNA-155 能抑制 ATG3 基因的表達而影響自噬[18]，但 AGT3 與結核病遺傳易感性的關系尚未確定，研究 ATG3 基因 SNP 是否參與結核病的發生發展具有重要意義。因此，我們開展了一項中國西部居民病例對照研究，以了解 ATG3 SNP 與結核病發生發展和臨床指標的關系。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 研究對象
納入 2014 年 12 月—2015 年 11 月于四川大學華西醫院就診的全部疑似結核病患者和同期不相關健康體檢者按納入排除標準進行篩選，最終確定 476 例結核病患者進入結核病組，475 例健康體檢者進入健康對照組。納入標準：① 結核病組：參考我國肺結核診斷標準[19]，由 2 名經驗豐富的醫生根據典型結核病癥狀、MTB 的微生物學和放射學證據確診的活動性肺結核病患者。② 健康對照組：既往無結核病史，影像學檢查無異常，痰涂片、MTB 核酸檢測結果為陰性，體檢結果正常。排除標準（符合其一即排除）：① 人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒血清學檢測呈陽性者；② 系統性慢性疾病如高血壓、糖尿病等；③ 腫瘤患者；④ 使用免疫抑制劑或增強劑的患者；⑤ 自身免疫性疾病；⑥ 其他呼吸系統疾病如肺部感染和慢性阻塞性肺疾病等。本病例對照研究經四川大學華西醫院臨床試驗與生物醫學倫理專委會審查通過［2014 年審（198）號］，所有研究對象均提供書面知情同意書以參與研究。
1.2 研究方法
1.2.1 SNP 選擇原則
參考文獻[20]，候選 SNP 必須全部滿足以下原則：① 優先考慮基因啟動子區或非翻譯區的功能調控性 SNP 位點；② 在中國北京漢族人群中的最小等位基因頻率（minor allele frequency，MAF）≥10%；③ 目標 SNP 遵循連鎖不平衡值 r2>0.8；④ 能成功設計出聚合酶鏈式反應引物，預實驗證明引物的可用性；⑤ 目標 SNP 位點附近盡量避免其他 SNP 的干擾。
1.2.2 基因分型
使用乙二胺四乙酸抗凝管采集所有受試者的外周靜脈血 3～5 mL。采用德國 Qiagen 公司的 QIAamp? DNA Blood Midi 試劑從血樣中提取基因組 DNA，采用上海天昊生物技術公司的“2×48-Plex SNPscan TM Kit”高通量基因分型技術對 ATG3 基因上篩選出的 SNP 進行分型，以雙蒸水為陰性對照。為控制質量，隨機抽取 DNA 質量較高的 10% 樣本進行了重復分析，質量控制樣本的符合率為 100%。
1.2.3 臨床數據收集及實驗室指標檢測
① 從病歷中查閱研究人群的人口學資料和臨床資料，包括年齡、性別、治療情況、基礎疾病等。② 實驗室檢測指標：全血細胞計數采用全自動血液學分析儀 XE-5000TM（日本 Sysmex 公司），生化項目檢測采用 Cobas 701（德國 Roche 公司），C 反應蛋白（C-reactive protein，CRP）檢測采用 IMMAGE 800（美國 Beckman Coulter 公司），紅細胞沉降率（血沉）采用全自動血沉分析儀（意大利 Alifax 公司）測定。MTB 病原學檢測包括涂片抗酸染色鏡檢、MTB 培養和 MTB-DNA 分子檢測，其中 MTB 培養用 MGIT 960 系統（美國 Becton Dickinson 公司），MTB-DNA 檢測采用實時熒光定量分析儀 LightCycler 480Ⅱ（德國 Roche 公司）。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 22.0、PLINK software（version 1.90）和 Haploview software（version 4.2）進行數據統計分析。正態分布計量資料采用均數±標準差表示，非正態分布的計量資料采用中位數（最小值，最大值）表示；計數資料采用絕對數或百分比表示。正態分布的計量資料兩組間比較采用 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。非正態分布或不符合參數檢驗適用條件的計量資料，兩組間比較采用 Mann-Whitney 秩和檢驗，多組間比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗。計數資料組間比較采用 χ2檢驗或 Fisher 確切概率法。應用哈迪-溫伯格平衡法（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）進行遺傳平衡檢驗，采用 PLINK 軟件對 ATG3 基因 SNP 的等位基因、基因型和遺傳模型在結核病組和健康對照組中的分布情況進行分析，采用 logistic 回歸模型，多因素分析時根據年齡、性別進行校正，再采用 Bonferroni 方法進行多重檢驗校正，以評價 SNP、結核特征與易感性之間的關系。利用 Haploview 軟件分析單倍型。其關聯強度以比值比（odds ratio，OR）和 95% 置信區間（confidence interval，CI）表示。檢驗水準 α=0.05，雙側檢驗，MAF≥10%。
2 結果
2.1 人口特征和實驗室臨床信息
結核病組和健康對照組的患者年齡和性別相匹配，在年齡或性別上比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與健康對照組相比，結核病組的血小板計數、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、CRP 和血沉水平均明顯高于健康對照組（P<0.001）。結核病組的血紅蛋白、紅細胞比容和紅細胞計數水平均低于健康對照組（P<0.001）。結核病組患者接受實驗室指標檢查、抗酸染色、MTB-DNA、結核培養的比例分別為 100%（476/476）、93.70%（446/476）、64.92%（309/476）、19.54%（93/476），接受過結核病培養檢查的結核病患者數量相對較少，只有 93 例結核病患者接受過結核病培養檢查；在結核病組中，MTB-DNA 陽性率為 55.99%（173/309），明顯高于顯微鏡涂片陽性率 31.39%（140/446）和細菌培養陽性率 24.73%（23/93）；臨床表現以咳嗽（64.50%）、發熱（44.54%）為主；360 例患者入院時接受了 CT 掃描，其中 67.78%（244/360）出現了雙側影像異常表現，28.33%（102/360）出現了單側影像異常表現，3.89%（14/360）未出現影像異常表現。見表 1、2。
表1
結核病組和健康對照組的人口特征和實驗室信息
表2
結核病組臨床信息（n=476）
2.2 ATG3 基因的 SNP 與西部人群結核病易感性的相關性
根據 SNP 的篩選原則，最終確定了 ATG3 基因中的 3 個 SNP（rs2638029、rs2638037、rs3732817），這些 SNP 在 476 例結核病患者和 475 例健康對照個體中均成功進行了基因分型，各基因型頻率分布符合 HWE（P>0.05），見表 3。
表3
ATG3 基因內 3 個 SNP 基本信息
結核病組與健康對照組 3 個 SNP 位點在等位基因頻率、基因型分布、不同遺傳模型分析中，經性別、年齡校正后，除 rs2638037 的 GA 基因型［OR=1.375，95%CI（1.048，1.805），P=0.022］、顯性模型 GG+GA［OR=1.326，95%CI（1.024，1.717），P=0.032］外，其余差異均無統計學意義（P>0.05）。但經 Bonferroni 校正后 GA 基因型及顯性模型亦均無統計學意義（P=0.132、0.201），見表 4～6。
表4
rs2638029 G>C 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
表6
rs3732817 A>G 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
表5
rs2638037 A>G 等位基因、基因型及遺傳模型在兩組分布情況［例（%）］
2.3 單倍型分析
對 ATG3 基因多態性進行的單倍型分析，發現 3 個 SNP 呈現強連鎖不平衡（linkage disequilibrium，LD），系數 D'> 0.92，形成一個單倍型，見圖 1。結核病組和健康對照組的單倍型頻率及其與結核病風險的關聯見表 7，單倍型 CGA 與結核易感性相關［OR=1.262，95%CI（1.001，1.593），P=0.048］。
圖1
單倍型分析
表7
ATG3 單倍型分析與結核病風險的相關性
2.4 rs2638037 SNP 與結核病臨床癥狀及實驗室指標的相關性
根據 SNP rs2638037 不同基因型與常見結核病癥狀及實驗室指標之間的潛在關系，可見 43.33%（13/30）的 GG 型患者有體重減輕癥狀，23.78%（44/185）的 GA 型患者有體重減輕癥狀，而 AA 型患者 34.48%（90/261）有體重減輕癥狀，體重減輕在不同基因型分組結核病患者中的例數，差異有統計學意義（P=0.017），而其他臨床參數及實驗室指標與 rs2638037 基因型無統計學意義（P>0.05），見表 8。
表8
rs2638037 SNP 與結核病患者臨床特征的關系
3 討論
自噬是一種保護性機制，在體內感染研究中，自噬相關基因可調節單核細胞中 MTB 特異性通路從而影響結核易感性[21-24]。我們假設 ATG3 基因上存在結核易感性候選位點，對此進行了 3 個 SNP（rs2638029、rs2638037 和 rs3732817）與結核病發生發展的相關研究。本研究發現經年齡、性別校正后的 rs2638037 基因座的顯性模型（GG+GA vs. AA）及 GA 基因型的受試者與 AA 基因型相比患結核病的風險增高，但對 P 值再經 Bonferroni 校正后則沒有相關性，單倍型 CGA 與結核易感性相關，結核病患者的體重減輕與 rs2638037 基因型有關。
與中國其他地區相比，西部地區結核病的年發病率明顯較高，每 10 萬人中就有 695 例結核病[25]。MTB 感染會導致一系列結果，包括潛伏感染、免疫低下、亞臨床疾病和癥狀性結核病，宿主的遺傳變異可能會影響到結核病發病的任何階段。雖然有研究表明 IRGM（一種自噬基因）中的多態性與多種群體中的結核病有關[26-28]，也有報道自噬相關基因的其他 SNP 如 rs12297124 與結核感染有關[29]。但對于結核病患者，我們在 PubMed 上尚未找到關于 SNP rs2638037 的相關文獻；在本研究中，ATG3 基因的 3 個 SNP 形成的單倍型 CGA 與中國西部人群的結核病感染風險相關。ATG3 基因編碼的自噬相關蛋白有助于微管相關蛋白輕鏈 3 與脂質磷脂酰乙醇胺的結合[30]，該基因的 SNP 如何調節人類 MTB 易感性，如何影響結核病的臨床癥狀，其機制尚不清楚。有研究指出 ATG3 過表達能抑制蛋白激酶 B（protein kinase B，AKT）和哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的磷酸化水平，推測 ATG3 過表達在人乳腺癌細胞（michigan cancer foundation-7，MCF-7）中能夠抑制 AKT/mTOR 信號途徑促進細胞自噬[31]。杜晨陽等[32]的研究指出 miRNA-30a-3p 能通過下調自噬相關基因 ATG3 轉錄物表達降低肝癌細胞自噬水平。我們推測位于 ATG3 基因內含子區域的 SNP rs2638037 可能影響 ATG3 與許多 miRNA 之間的相互作用，并使 ATG3 轉錄物表達失調，ATG3 的調節功能尚需進一步的功能研究。
本研究是第 1 次提出 SNP rs2638037 多態性與結核病臨床疾病特征相關聯。但本研究還存在一些局限性。首先，納入結核病組樣本量較小，因此必須研究更多的樣本和不同的群體。其次，由于研究條件限制，未對 ATG3 基因進行結核感染免疫調節機制研究。此外，rs2638037 基因型與體重減輕需要進一步研究和功能實驗驗證。
總之，ATG3 基因中 3 個 SNP 的單倍型 CGA 可能與結核病的發生發展有關，中國西部結核病患者的 SNP rs2638037 可能與臨床癥狀有關，未來仍需深入研究。
