引用本文： 陶昕彤, 周易, 趙珍珍, 王念, 周娟, 宋興勃. 四川大學華西醫院乙型肝炎病毒基因分型和耐藥突變分析. 華西醫學, 2019, 34(8): 890-894. doi: 10.7507/1002-0179.201907065 復制
乙型肝炎（乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起一種傳染性強、難以根除、危害嚴重的慢性傳染性疾病，可發展為肝硬化和肝癌，威脅人類生命。目前乙肝已成為一個全球化的健康問題，每年大約有 65 萬人死于 HBV 相關的肝硬化和肝癌[1]；我國慢性乙肝患者約有 2 000 萬人[2]，對我國公共衛生事業造成巨大負擔。HBV 基因型至少可分為 9 種型別（A-J）[3]，且不同地域流行的型別不同，我國以 B、C 型為主。研究表明，乙肝患者的臨床特點、治療效果以及疾病進展與 HBV 基因型密切相關[4-5]。核苷（酸）類似物［nucleos（t）ide analogue，NA］能有效抑制 HBV 病毒復制，緩解病情，但易產生耐藥突變，給臨床治療帶來困擾。因此，有效開展 HBV 基因分型檢測和耐藥突變檢測對臨床治療方案的選擇具有重大意義。本研究擬從分子水平檢測分析四川大學華西醫院 HBV 基因型分布和耐藥突變情況，為慢性乙肝患者的個體化治療提供理論依據。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 樣本來源
納入 2016 年 1 月—2018 年 12 月到四川大學華西醫院就診的檢測 HBV 表面抗原陽性及 HBV-DNA≥1×104 U/mL 的慢性乙肝患者為研究對象。所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015 年版）》[6]的標準，且排除其他病毒性感染及其他可能導致肝臟病變的疾病。本研究已獲得患者或家屬的知情同意，通過四川大學華西醫院生物醫學倫理委員會審批［2019 年審（151）號］。
1.2 儀器與試劑
采用 HBV 及耐藥突變檢測試劑盒（上海申友生物技術有限責任公司），實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 LightCycler 480（瑞士羅氏公司），微量加樣槍（德國艾本德公司），瞬時離心機 D1008E（美國 Scilogex 公司），微量旋渦混勻器 WH-11（上海滬西分析儀器廠），高速臺式離心機（德國艾本德公司），測序儀 3500dx（美國 ABI 公司），普通聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 Veriti-26（美國 ABI 公司）。
1.3 方法
1.3.1 DNA 提取和測序
按照申友試劑盒說明書嚴格操作：分離 HBV 患者血漿 1 mL，通過磁珠法提取 HBV DNA，按照 37 μL PCR 反應液、3 μL 反應酶、10 μL 樣本的比例加樣完成后，充分混勻，離心后上機，運行設定的 PCR 程序；PCR 結束后，每孔加入 2 μL SAP 酶和 1 μL PCR 產物，震蕩混勻，將 PCR 管放入普通 PCR 儀中進行產物純化，37℃ 60 min，80℃ 15 min，最后 4℃ 保存；程序結束之后，每孔加入 3 μL 純化后 PCR 產物，1 μL 測序試劑，2 μL 測序引物，充分混勻后離心，上機運行測序 PCR 程序；按每孔 10 μL 產物純化試劑+ 45 μL 稀釋液+ 10 μL 測序 PCR 產物的比例加樣，在混勻器上混勻 3 000 r/min×30 min，離心 500 g×3 min，吸 10 μL 上清在測序儀上進行檢測。
1.3.2 HBV 基因分型分析
測序結束后用 Chromas 軟件分析處理彩色測序圖譜，用美國國立生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）提供的病毒基因分型工具進行 HBV 分型比對。
1.3.3 HBV 耐藥突變檢測
測序結束后用 Chromas 軟件分析處理彩色測序圖譜，與 NCBI 提供的 HBV 基因參考序列進行比對，人工判讀測序圖譜中的突變位點；常見突變位點的耐藥信息參考《歐洲肝病協會 HBV 感染臨床操作指南》[7]以及試劑盒說明書。
1.4 觀察指標
觀察納入對象的一般情況和 HBV 基因型的分布與耐藥情況。根據以往經驗，HBV 感染者一部分為新生兒或 20 歲以下的青少年，多數處于潛伏期；20～40 歲為乙肝發病高峰期；40 歲以上的發病率有所下降，因此以 20、40、60 歲進行分組。
1.5 統計學方法
采用 SPSS 23.0 進行統計分析。計量資料以均數±標準差表示。計數資料采用例數和百分比表示，組間比較采用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 四川大學華西醫院慢性乙肝患者感染 HBV 基因型分布
共收集病例 786 例。其中男 551 例，女 235 例，年齡（41±12）歲；漢族 749 例，藏族 37 例。共檢測出了 B 基因型［489 例（62.2%）］、C 基因型［291 例（37.0%）］、D 基因型［6 例（0.8%）］3 種 HBV 基因型，B 型為主要基因型。3 種基因型中的性別、年齡分布、民族占比各不相同，但 B、C 基因型間的性別差異無統計學意義（χ2=1.036，P=0.309），年齡分布（χ2=8.590，P<0.05）、民族（χ2=30.606，P<0.05）間差異有統計學意義。見表 1。
表1
3 種 HBV 基因型的分布、發生耐藥突變和耐藥株分布情況［例（%）］
2.2 四川大學華西醫院慢性乙肝患者不同基因型 HBV 的耐藥發生情況
786 例患者中，發生耐藥突變 627 例，總突變率 79.8%。B 基因型中檢出耐藥突變 390 例，突變率 79.8%；C 基因型中檢出耐藥突變 231 例，突變率 79.4%；D 基因型中全部均檢出耐藥突變［6 例（100%）］；B 基因型和 C 基因型差異無統計學意義（χ2=0.016，P=0.899）。在檢出耐藥突變人群中，耐單藥突變 83 例，耐多藥突變 364 例；突變例數在 B 基因型和 C 基因型中的差異有統計學意義（χ2=11.002，P<0.05）。NA 耐藥株主要是拉米夫定+替比夫定耐藥株 262 例（33.3%），拉米夫定+替比夫定+恩替卡韋耐藥株 102 例（13.0%），阿德福韋酯耐藥株 83 例（10.6%），未檢出替諾福韋耐藥株的病例。B、C 基因型中不同藥物耐藥株之間的數量差異有統計學意義（χ2=14.356，P<0.01）。見表 1。
2.3 不同基因型 HBV 的常見耐藥突變位點
最常見的突變為 M204I，共 179 例（22.8%），且在 B 型和 C 型中均是最常見突變；其次是混合突變 L180M+M204V/I，共 83 例（10.6%）；這兩種高頻突變均引起拉米夫定和替比夫定耐藥。與阿德福韋酯耐藥相關的 A181V/T、N236T 以及 A181V/T+N236T 突變分別為 46 例（5.9%）、14 例（1.8%）、23 例（2.9%），A181V/T 突變例數多于 N236T 突變，且 C 基因型的 A181V/T 突變率高于 B 基因型（χ2=23.885，P<0.01）。同時，還檢測到 102 例對拉米夫定、替比夫定和恩替卡韋均耐藥的多點混合突變，其中，L180M+M204V/I+M250V 多見于 B 基因型，L180M+M204V/I+V173L 多在 C 基因型中檢出。未檢出替諾福韋相關 A194T 耐藥突變。見表 2。
表2
3 種 HBV 基因型中常見耐藥突變的數量（例）
3 討論
HBV 感染是一個全球性的公共衛生問題，具有較高的發病率和死亡率[1]。據世界衛生組織報道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中慢性 HBV 攜帶者有 2.4 億[8]。受疫苗接種政策和人口移徙等若干因素影響，不同地區 HBV 的流行病學差異較大[6]。HBV 病毒在自然選擇、宿主免疫力、藥物治療等多重因素作用下易產生耐藥突變，導致患者病情反復，病毒難以根除，給臨床抗病毒治療造成極大困擾。因此，研究 HBV 基因型分布特征以及耐藥突變模式，對減少耐藥發生和提高臨床治療有效性具有重要意義。
HBV 現被分為至少 9 種基因型（A-J），且分布具有地域性差異。A 型始于非洲，現常見于西歐和北美[9]，D 型主要分布于地中海地區，E 基因型多見于非洲。而我國不同地區流行的型別也不盡相同，還存在民族差異。匯總各地數據可以看出，我國整體上以 B 型和 C 型為主，北方地區 C 型多見，南方地區 B 型多見，漢族人群中以 B、C 型為主，少數民族地區以 A 型和 D 型為主[10]。乙肝患者的臨床特點、治療效果以及疾病進展與 HBV 基因型密切相關。研究表明，與 B 基因型患者相比，C 基因型患者預后較差，更易進展為肝硬化和肝癌[3, 11]；乙型肝炎病毒 e 抗原陽性患者在接受干擾素-α 抗病毒治療時，A 基因型和 B 基因型應答率更高[12]。本研究共檢出 B、C、D 型 3 種基因型，表明本地區以 B 型為主（62.2%），C 型次之（37.0%），不同于我國北方地區 HBV 基因型分布，與國內既往報道的南方地區 HBV 基因型分布基本一致[13]。漢族人群中占主導的基因型是 B 型（64.6%），C 型次之（35.2%），而藏族人群中優勢基因型是 C 型（73.0%），與本地區既往研究和其他多民族地區的報道一致[14-15]，但 D 基因型占比較少（13.5%），可能是因為本研究中藏族患者樣本數量較少，后續仍需擴大樣本量。在 786 例受檢者中，男性人數顯著大于女性人數，且在每種基因型中仍是男性人數占多數。在本研究中，B 型 HBV 感染者偏向年輕化，21～40 年齡段的人數最多，40 歲以下患者人數多于 40 歲以上；C 基因型感染者中 40 歲以上中老年感染者人數多于青年人。
本研究中對 786 例患者的 HBV P 基因 RT 區進行了常見耐藥突變分析，發現 627 例發生耐藥突變，B 型和 C 型發生耐藥的比例基本相同（79.8% vs. 79.4%），D 型則 100% 發生耐藥突變，由此可見，本地區的耐藥突變率遠高于其他地區[16-17]。本研究既有檢出單一耐藥位點突變，也有多重耐藥位點突變，以 M204I 為例數最多，其次為 L180M+M204V，這兩種突變均導致拉米夫定和替比夫定耐藥。拉米夫定和替比夫定是治療 HBV 感染常用的核苷類藥物，具有較好的病毒學應答效果，但是隨著治療時間延長，病毒耐藥突變的發生率較高[18]，在本研究中，患者對拉米夫定和替比夫定的耐藥率是最高的，這也與多地的報道相吻合[19-20]。除此之外，阿德福韋酯因與其他核苷類似物無交叉耐藥，在抗 HBV 治療中越來越受重視，但本研究表明與阿德福韋酯耐藥相關的 A181V/T、N236T、A181V/T+N236T 出現頻率也較高，3 種突變的總突變率為 10.6%，C 基因型的 A181V/T 突變率高于 B 基因型，這與本地區 2015 年的研究結果一致[16]。還有 102 例在 L180M+M204V/I 的基礎上進一步出現了 M250V、V173L、T184A/G/S/I、S202G/I，總突變率為 13.0%，導致除了拉米夫定和替比夫定之外的恩替卡韋的耐藥。有研究報道在我國北部 C 基因型多重耐藥的發生率較 B 基因型高，且更傾向發生 rt184/rt202 突變模式，而 B 基因型更傾向于發生 rt250[21]，但在本研究中情況不同，B、C 基因型發生多重耐藥的頻率相近，個別位點的出現頻率有差異，M250V 常見于 B 基因型，V173L 則在 C 基因型中出現率更高，差異有統計學意義（χ2=10.752，P<0.01）。
研究表明我國 80% 的患者在使用拉米夫定、阿德福韋酯這些低耐藥基因屏障藥物作為初治藥物[22]，是我國 HBV 耐藥率居高不下的重要因素，本研究也提示本地區患者仍大量使用低耐藥屏障的 NA 作為初治藥物。雖然恩替卡韋耐藥基因屏障高，但本地區恩替卡韋耐藥率與以往報道相比明顯上升[16]，且高于其他地區[23-24]，這提示長期使用初代 NA 也會增加高耐藥屏障 NA 的耐藥風險，應減少拉米夫定和替比夫定的使用；對于已出現 M204V/I 的患者，應更加謹慎合理選擇用藥，并且及時檢測是否出現新的耐藥位點，避免由于多重耐藥而導致病情的進一步加重。
綜上所述，乙型肝炎的抗病毒治療雖已日趨成熟，但相關耐藥問題仍是臨床的一大挑戰。本研究通過對 HBV 基因分型和耐藥突變位點的檢測，分析了四川大學華西醫院 HBV 基因型分布特點和耐藥突變模式，對改善用藥方案、提高治療療效具有指導意義，為制定個體化精準治療提供科學依據。
乙型肝炎（乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起一種傳染性強、難以根除、危害嚴重的慢性傳染性疾病，可發展為肝硬化和肝癌，威脅人類生命。目前乙肝已成為一個全球化的健康問題，每年大約有 65 萬人死于 HBV 相關的肝硬化和肝癌[1]；我國慢性乙肝患者約有 2 000 萬人[2]，對我國公共衛生事業造成巨大負擔。HBV 基因型至少可分為 9 種型別（A-J）[3]，且不同地域流行的型別不同，我國以 B、C 型為主。研究表明，乙肝患者的臨床特點、治療效果以及疾病進展與 HBV 基因型密切相關[4-5]。核苷（酸）類似物［nucleos（t）ide analogue，NA］能有效抑制 HBV 病毒復制，緩解病情，但易產生耐藥突變，給臨床治療帶來困擾。因此，有效開展 HBV 基因分型檢測和耐藥突變檢測對臨床治療方案的選擇具有重大意義。本研究擬從分子水平檢測分析四川大學華西醫院 HBV 基因型分布和耐藥突變情況，為慢性乙肝患者的個體化治療提供理論依據。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 樣本來源
納入 2016 年 1 月—2018 年 12 月到四川大學華西醫院就診的檢測 HBV 表面抗原陽性及 HBV-DNA≥1×104 U/mL 的慢性乙肝患者為研究對象。所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015 年版）》[6]的標準，且排除其他病毒性感染及其他可能導致肝臟病變的疾病。本研究已獲得患者或家屬的知情同意，通過四川大學華西醫院生物醫學倫理委員會審批［2019 年審（151）號］。
1.2 儀器與試劑
采用 HBV 及耐藥突變檢測試劑盒（上海申友生物技術有限責任公司），實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 LightCycler 480（瑞士羅氏公司），微量加樣槍（德國艾本德公司），瞬時離心機 D1008E（美國 Scilogex 公司），微量旋渦混勻器 WH-11（上海滬西分析儀器廠），高速臺式離心機（德國艾本德公司），測序儀 3500dx（美國 ABI 公司），普通聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 Veriti-26（美國 ABI 公司）。
1.3 方法
1.3.1 DNA 提取和測序
按照申友試劑盒說明書嚴格操作：分離 HBV 患者血漿 1 mL，通過磁珠法提取 HBV DNA，按照 37 μL PCR 反應液、3 μL 反應酶、10 μL 樣本的比例加樣完成后，充分混勻，離心后上機，運行設定的 PCR 程序；PCR 結束后，每孔加入 2 μL SAP 酶和 1 μL PCR 產物，震蕩混勻，將 PCR 管放入普通 PCR 儀中進行產物純化，37℃ 60 min，80℃ 15 min，最后 4℃ 保存；程序結束之后，每孔加入 3 μL 純化后 PCR 產物，1 μL 測序試劑，2 μL 測序引物，充分混勻后離心，上機運行測序 PCR 程序；按每孔 10 μL 產物純化試劑+ 45 μL 稀釋液+ 10 μL 測序 PCR 產物的比例加樣，在混勻器上混勻 3 000 r/min×30 min，離心 500 g×3 min，吸 10 μL 上清在測序儀上進行檢測。
1.3.2 HBV 基因分型分析
測序結束后用 Chromas 軟件分析處理彩色測序圖譜，用美國國立生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）提供的病毒基因分型工具進行 HBV 分型比對。
1.3.3 HBV 耐藥突變檢測
測序結束后用 Chromas 軟件分析處理彩色測序圖譜，與 NCBI 提供的 HBV 基因參考序列進行比對，人工判讀測序圖譜中的突變位點；常見突變位點的耐藥信息參考《歐洲肝病協會 HBV 感染臨床操作指南》[7]以及試劑盒說明書。
1.4 觀察指標
觀察納入對象的一般情況和 HBV 基因型的分布與耐藥情況。根據以往經驗，HBV 感染者一部分為新生兒或 20 歲以下的青少年，多數處于潛伏期；20～40 歲為乙肝發病高峰期；40 歲以上的發病率有所下降，因此以 20、40、60 歲進行分組。
1.5 統計學方法
采用 SPSS 23.0 進行統計分析。計量資料以均數±標準差表示。計數資料采用例數和百分比表示，組間比較采用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 四川大學華西醫院慢性乙肝患者感染 HBV 基因型分布
共收集病例 786 例。其中男 551 例，女 235 例，年齡（41±12）歲；漢族 749 例，藏族 37 例。共檢測出了 B 基因型［489 例（62.2%）］、C 基因型［291 例（37.0%）］、D 基因型［6 例（0.8%）］3 種 HBV 基因型，B 型為主要基因型。3 種基因型中的性別、年齡分布、民族占比各不相同，但 B、C 基因型間的性別差異無統計學意義（χ2=1.036，P=0.309），年齡分布（χ2=8.590，P<0.05）、民族（χ2=30.606，P<0.05）間差異有統計學意義。見表 1。
表1
3 種 HBV 基因型的分布、發生耐藥突變和耐藥株分布情況［例（%）］
2.2 四川大學華西醫院慢性乙肝患者不同基因型 HBV 的耐藥發生情況
786 例患者中，發生耐藥突變 627 例，總突變率 79.8%。B 基因型中檢出耐藥突變 390 例，突變率 79.8%；C 基因型中檢出耐藥突變 231 例，突變率 79.4%；D 基因型中全部均檢出耐藥突變［6 例（100%）］；B 基因型和 C 基因型差異無統計學意義（χ2=0.016，P=0.899）。在檢出耐藥突變人群中，耐單藥突變 83 例，耐多藥突變 364 例；突變例數在 B 基因型和 C 基因型中的差異有統計學意義（χ2=11.002，P<0.05）。NA 耐藥株主要是拉米夫定+替比夫定耐藥株 262 例（33.3%），拉米夫定+替比夫定+恩替卡韋耐藥株 102 例（13.0%），阿德福韋酯耐藥株 83 例（10.6%），未檢出替諾福韋耐藥株的病例。B、C 基因型中不同藥物耐藥株之間的數量差異有統計學意義（χ2=14.356，P<0.01）。見表 1。
2.3 不同基因型 HBV 的常見耐藥突變位點
最常見的突變為 M204I，共 179 例（22.8%），且在 B 型和 C 型中均是最常見突變；其次是混合突變 L180M+M204V/I，共 83 例（10.6%）；這兩種高頻突變均引起拉米夫定和替比夫定耐藥。與阿德福韋酯耐藥相關的 A181V/T、N236T 以及 A181V/T+N236T 突變分別為 46 例（5.9%）、14 例（1.8%）、23 例（2.9%），A181V/T 突變例數多于 N236T 突變，且 C 基因型的 A181V/T 突變率高于 B 基因型（χ2=23.885，P<0.01）。同時，還檢測到 102 例對拉米夫定、替比夫定和恩替卡韋均耐藥的多點混合突變，其中，L180M+M204V/I+M250V 多見于 B 基因型，L180M+M204V/I+V173L 多在 C 基因型中檢出。未檢出替諾福韋相關 A194T 耐藥突變。見表 2。
表2
3 種 HBV 基因型中常見耐藥突變的數量（例）
3 討論
HBV 感染是一個全球性的公共衛生問題，具有較高的發病率和死亡率[1]。據世界衛生組織報道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中慢性 HBV 攜帶者有 2.4 億[8]。受疫苗接種政策和人口移徙等若干因素影響，不同地區 HBV 的流行病學差異較大[6]。HBV 病毒在自然選擇、宿主免疫力、藥物治療等多重因素作用下易產生耐藥突變，導致患者病情反復，病毒難以根除，給臨床抗病毒治療造成極大困擾。因此，研究 HBV 基因型分布特征以及耐藥突變模式，對減少耐藥發生和提高臨床治療有效性具有重要意義。
HBV 現被分為至少 9 種基因型（A-J），且分布具有地域性差異。A 型始于非洲，現常見于西歐和北美[9]，D 型主要分布于地中海地區，E 基因型多見于非洲。而我國不同地區流行的型別也不盡相同，還存在民族差異。匯總各地數據可以看出，我國整體上以 B 型和 C 型為主，北方地區 C 型多見，南方地區 B 型多見，漢族人群中以 B、C 型為主，少數民族地區以 A 型和 D 型為主[10]。乙肝患者的臨床特點、治療效果以及疾病進展與 HBV 基因型密切相關。研究表明，與 B 基因型患者相比，C 基因型患者預后較差，更易進展為肝硬化和肝癌[3, 11]；乙型肝炎病毒 e 抗原陽性患者在接受干擾素-α 抗病毒治療時，A 基因型和 B 基因型應答率更高[12]。本研究共檢出 B、C、D 型 3 種基因型，表明本地區以 B 型為主（62.2%），C 型次之（37.0%），不同于我國北方地區 HBV 基因型分布，與國內既往報道的南方地區 HBV 基因型分布基本一致[13]。漢族人群中占主導的基因型是 B 型（64.6%），C 型次之（35.2%），而藏族人群中優勢基因型是 C 型（73.0%），與本地區既往研究和其他多民族地區的報道一致[14-15]，但 D 基因型占比較少（13.5%），可能是因為本研究中藏族患者樣本數量較少，后續仍需擴大樣本量。在 786 例受檢者中，男性人數顯著大于女性人數，且在每種基因型中仍是男性人數占多數。在本研究中，B 型 HBV 感染者偏向年輕化，21～40 年齡段的人數最多，40 歲以下患者人數多于 40 歲以上；C 基因型感染者中 40 歲以上中老年感染者人數多于青年人。
本研究中對 786 例患者的 HBV P 基因 RT 區進行了常見耐藥突變分析，發現 627 例發生耐藥突變，B 型和 C 型發生耐藥的比例基本相同（79.8% vs. 79.4%），D 型則 100% 發生耐藥突變，由此可見，本地區的耐藥突變率遠高于其他地區[16-17]。本研究既有檢出單一耐藥位點突變，也有多重耐藥位點突變，以 M204I 為例數最多，其次為 L180M+M204V，這兩種突變均導致拉米夫定和替比夫定耐藥。拉米夫定和替比夫定是治療 HBV 感染常用的核苷類藥物，具有較好的病毒學應答效果，但是隨著治療時間延長，病毒耐藥突變的發生率較高[18]，在本研究中，患者對拉米夫定和替比夫定的耐藥率是最高的，這也與多地的報道相吻合[19-20]。除此之外，阿德福韋酯因與其他核苷類似物無交叉耐藥，在抗 HBV 治療中越來越受重視，但本研究表明與阿德福韋酯耐藥相關的 A181V/T、N236T、A181V/T+N236T 出現頻率也較高，3 種突變的總突變率為 10.6%，C 基因型的 A181V/T 突變率高于 B 基因型，這與本地區 2015 年的研究結果一致[16]。還有 102 例在 L180M+M204V/I 的基礎上進一步出現了 M250V、V173L、T184A/G/S/I、S202G/I，總突變率為 13.0%，導致除了拉米夫定和替比夫定之外的恩替卡韋的耐藥。有研究報道在我國北部 C 基因型多重耐藥的發生率較 B 基因型高，且更傾向發生 rt184/rt202 突變模式，而 B 基因型更傾向于發生 rt250[21]，但在本研究中情況不同，B、C 基因型發生多重耐藥的頻率相近，個別位點的出現頻率有差異，M250V 常見于 B 基因型，V173L 則在 C 基因型中出現率更高，差異有統計學意義（χ2=10.752，P<0.01）。
研究表明我國 80% 的患者在使用拉米夫定、阿德福韋酯這些低耐藥基因屏障藥物作為初治藥物[22]，是我國 HBV 耐藥率居高不下的重要因素，本研究也提示本地區患者仍大量使用低耐藥屏障的 NA 作為初治藥物。雖然恩替卡韋耐藥基因屏障高，但本地區恩替卡韋耐藥率與以往報道相比明顯上升[16]，且高于其他地區[23-24]，這提示長期使用初代 NA 也會增加高耐藥屏障 NA 的耐藥風險，應減少拉米夫定和替比夫定的使用；對于已出現 M204V/I 的患者，應更加謹慎合理選擇用藥，并且及時檢測是否出現新的耐藥位點，避免由于多重耐藥而導致病情的進一步加重。
綜上所述，乙型肝炎的抗病毒治療雖已日趨成熟，但相關耐藥問題仍是臨床的一大挑戰。本研究通過對 HBV 基因分型和耐藥突變位點的檢測，分析了四川大學華西醫院 HBV 基因型分布特點和耐藥突變模式，對改善用藥方案、提高治療療效具有指導意義，為制定個體化精準治療提供科學依據。
