引用本文： 劉堂喻亨, 王念, 宋佳佳, 胡雪姣, 趙珍珍, 彭武, 白浩, 吳茜, 應斌武. WNT 信號通路中抑制基因 WIF1 與 DKK1 基因多態性與中國漢族人群結核易感性的相關性研究 . 華西醫學, 2018, 33(8): 958-965. doi: 10.7507/1002-0179.201807066 復制
結核病是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一種傳染性疾病，在單一病原體引起死亡的傳染性疾病中排名第一。根據世界衛生組織 2017 年的報告，2016 年約有 1 040 萬新發結核病例，而我國每年有新增病例 100 萬例和死亡病例 3.9 萬例，排名世界第三[1]。不同個體對 MTB 的易感性有很大差異，宿主遺傳背景可影響結核感染的發生、發展和預后[2]。
許多基因位點與結核病的發展有關，其中包括 WNT 信號通路、細胞因子和趨化因子等[3]。WNT 信號通路是一條進化上高度保守的信號轉導通路，參與調控結核感染過程中的免疫炎性反應應答，在結核發生、發展中發揮重要作用[4]。WNT 抑制蛋白 1（WNT inhibitory factor 1，WIF1）和 WNT 通路抑制因子 Dickkopf（Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor，DKK）是 WNT 信號通路中重要的拮抗因子，通過與 WNT 或 WNT 受體結合而抑制 WNT 信號通路，負調控靶基因表達[5]。本課題組前期研究發現 WNT 信號通路的抑制基因 CTNNB1 rs4135385 位點和 SFRP1 rs78322767 位點在中國西部漢族人群中與結核易感性相關[6]，在中國西部地區藏族人群中未發現 DKK1 rs1100155 位點和 WIF1 rs56900803 位點與結核病存在關聯[7]。同時，研究顯示活動性肺結核患者的臨床特征及實驗室指標的差異與單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）遺傳變異存在關聯性[6]。本研究首次在中國西部地區漢族人群中對 WNT 信號通路中兩個關鍵基因 WIF1 rs58635985 位點和 DKK1 rs11001548 位點與結核易感性、臨床特征和實驗室指標的相關性進行探究。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 研究對象
納入 2014 年 12 月—2016 年 11 月期間，于四川大學華西醫院就診的 475 例結核病患者為結核病組。結核病組納入標準：① 根據我國結核病診斷標準，具有典型的結核病癥狀和體征，且至少符合以下幾項之一：A. 2 次以上的抗酸染色涂片陽性或 MTB 培養陽性或 MTB 核酸檢測（TB-DNA）陽性；B. 細菌學證據陰性，但 CT 等影像學檢查顯示典型的活動性結核病變表現；C. 病理學診斷支持結核病變；D. 2 次以上的 γ-干擾素釋放試驗陽性且抗結核感染治療有效。② 漢族。370 例健康對照來自于同期健康體檢人群，納入標準：① 既往無結核病史；② 痰涂片及 TB-DNA 檢測等結核相關檢查陰性；③ 影像學檢查無異常；④ 經健康體檢證實為健康個體；⑤ 漢族。兩組排除標準：① 其他呼吸系統疾病如肺部感染和慢性阻塞性肺部疾病等；② 系統性慢性疾病如高血壓、糖尿病等；③ 腫瘤患者；④ 自身免疫性疾病；⑤ 肝炎病毒感染，人類免疫缺陷病毒感染；⑥ 使用免疫抑制劑或增強劑的患者。本研究經四川大學華西醫院臨床試驗與生物醫學倫理專委會審核通過［2014 年審（198）號］，并獲得所有納入對象知情同意。
1.2 研究方法
1.2.1 基因分型
使用乙二胺四乙酸抗凝采血管采集所有受試者的外周靜脈血 3～5 mL。按照 QIAamp DNA Blood Midi Kit （德國 Qiagen 公司）試劑盒說明書，提取人外周血 DNA。基因型采用“2x48-Plex SNPscanTM Kit”高通量基因分型技術（上海天昊生物技術公司），以雙蒸水為陰性對照，進行基因分型實驗，提高分型質量。隨機選擇 10%～15% 的樣品進行重復基因分型，質量控制樣本的符合率為 100%。
1.2.2 臨床數據收集及實驗室指標檢測
① 收集研究對象相關病歷信息，包括年齡、性別、體質量指數（body mass index，BMI）、治療情況、基礎疾病等。② 實驗室檢測指標：全血細胞計數采用全自動血液學分析儀 XE-5000TM（日本 Sysmx 公司），C 反應蛋白濃度檢測采用 IMMAGE 800（美國 Beckman Coulter 公司），紅細胞沉降率（血沉）采用全自動血沉分析儀（意大利 Alifax 公司）測定。MTB 病原學檢測包括涂片鏡檢、MTB 培養和 TB-DNA 分子檢測，其中涂片鏡檢采 Ziehl-Neelsen 抗酸染色，MTB 培養用 MGIT 960 系統（美國 Becton Dickinson 公司），檢測 TB-DNA 用實時熒光定量聚合酶鏈反應試劑盒（德國 Qiagen 公司）。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件進行數據分析。正態分布的連續變量采用均數±標準差表示，非正態分布的連續變量采用中位數（最小值，最大值）表示，分類變量用絕對數或百分數表示。正態分布的計量資料，兩組間比較采用 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；非正態分布或不符合參數檢驗適用條件的計量資料，兩組間比較采用 Mann-Whitney 秩和檢驗，多組間比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗；計數資料組間比較采用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。應用 Hardy-Weinberg 平衡法（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）進行遺傳平衡檢驗。利用 PLINK V1.09 軟件比較兩組間 SNP 的等位基因、基因型及遺傳模型分布差異。兩組之間各基因型、等位基因頻率對結核發病風險影響用比值比（odds ratio，OR）及 95% 置信區間（confidence interval，CI）表示。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 研究人群基本特征
結核病組 475 例，其中男 285 例，女 190 例，平均年齡（41.66±19.23）歲；健康對照組 370 例，其中男 223 例，女 147 例，平均年齡（42.30±11.57）歲；兩組性別和年齡差異均無統計學意義（P>0.05），且均以中年男性為主。實驗室檢查結果中，紅細胞比容、血小板計數、白細胞計數、中性粒細胞絕對值計數、單核細胞絕對值計數在結核病組均明顯高于健康對照組，差異有統計學意義（P<0.001）；而健康對照組的紅細胞計數、血紅蛋白含量、淋巴細胞絕對值計數明顯高于結核病組，差異有統計學意義（P<0.001）。見表 1。
結核病組 TB-DNA 陽性率為 54.92% （162/295），TB-DNA 檢測對診斷結核的敏感性高于涂片顯微鏡［OR=1.876，95%CI（1.462，2.466），P<0.001］和培養法［OR=3.179，95%CI（1.884，5.365），P<0.001］，后兩者陽性率分別為 29.28%（130/444）和 17.27%（19/110）。結核病亞型中肺結核占 78.11%（371/475），肺外結核占 18.95%（90/475），肺結核合并肺外結核占 2.95%（14/554）。
表1
研究對象的臨床特征
2.2 WIF1、DKK1基因多態性與結核病易感性的關系
475 例結核病患者和 370 例健康對照者均成功進行基因分型。WIF1 基因 rs58635985 位點和 DKK1 基因 rs11001548 位點，各基因型頻率符合 HWE（P>0.05）。在結核病組和健康對照組中，rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率和基因型在病例組和對照組之間分布差異無統計學意義（P>0.05）。3 種遺傳模型（加性、顯性和隱性）在兩組間分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 2、3。
表2
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在結核病組和健康對照組分布情況［例（%）］
表3
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在結核病組和健康對照組分布情況［例（%）］
2.3 WIF1 基因和 DKK1 基因多態性與肺結核易感性的關系
肺結核是最主要的臨床亞組，占 78.11%（371/475）。rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率和基因型分布在肺結核組和健康對照組之間差異無統計學意義（P>0.05）。在 3 種遺傳模型（加性、顯性和隱性）中，rs58635985 位點和 rs11001548 位點在兩組之間差異均無統計學意義（P>0.05）。見表 4、5。
對 rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率及基因型在肺結核組與肺外結核組間進行亞組分析，肺結核合并肺外結核樣本數量較少，不作進一步分析。肺結核組 371 例（78.11%）和肺外結核組 90 例（18.95%），rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率及基因型在肺結核組和肺外結核組分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 6、7。
表4
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和健康對照組分布情況［例（%）］
表5
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和健康對照組分布情況［例（%）］
表6
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和肺外結核組分布情況［例（%）］
表7
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和肺外結核組分布情況［例（%）］
2.4 結核病患者基因型與臨床特征及實驗室檢測指標的相關性研究
結核病患者 rs58635985 位點和 rs11001548 位點的基因型分布在臨床特征（發熱、體重減輕、盜汗、食欲減低及乏力）中的差異無統計學意義（P>0.05）。其基因型在實驗室檢查指標（C 反應蛋白、紅細胞計數、白細胞計數、TB-DNA 等）分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 8、9。
表8
rs58635985多態性與結核病患者臨床特征及實驗室檢測指標的關系
表9
rs11001548 多態性與結核病患者臨床特征及實驗室檢測指標的關系
3 討論
宿主遺傳背景在疾病發生發展和轉歸中具有非常重要的作用[2]，世界上約有 1/3 的人口感染了 MTB，僅 5%～10% 的人會發展成為活動性結核病[8]，宿主易感基因在結核病發生、發展中的作用成為近年研究熱點。Sveinbjornsson 等[9]的一項大型全基因組關聯分析研究表明，人類白細胞抗原Ⅱ類抗原（rs557011、rs9271378 和 rs9272785）可能通過減少向 T 細胞呈遞保護性 MTB 抗原而導致結核病易感性遺傳風險。大量研究提示，WNT 信號通路參與調節 MTB 感染的發病機制，在結核病的進程中發揮重要作用[4-5]。Fan 等[10]發現 WNT 信號通路與 MTB 感染后 T 細胞增殖及結核病嚴重程度密切相關，WNT 信號通路上的拮抗基因在抗 MTB 感染過程中參與免疫調控過程，保護機體免受過度免疫反應損傷[11]，其中重要拮抗基因 WIF1和DKK1，在腫瘤疾病如膠質母細胞瘤[12]、非小細胞肺癌[13]、肝癌[14]等中有較多報道，也有 WIF1 和 DKK1 與感染性疾病相關性的研究[7]。西部地區是中國結核病負擔較高的地區之一，本研究采用高通量基因分型技術首次對 WIF1 基因 rs58635985 位點和 DKK1 基因 rs11001548 位點進行分析，未發現 SNP （rs58635985、rs11001548）在中國西部漢族人群中與結核易感性、臨床特征及實驗室指標有關聯性。
WIF1 基因編碼的 WNT 抑制因子 1（WIF1）是 WNT 信號通路的抑制劑，它通過直接與 WNT 配體結合和阻止配體與細胞表面受體結合，從而對 WNT 信號傳導產生抑制作用[15]。目前對 WIF1 研究主要集中在腫瘤方面，Hu 等[14]發現 WIF1 能顯著抑制人微血管內皮細胞和小鼠內皮祖細胞的形成和遷移，抑制肝癌血管生成和腫瘤生長。也有學者研究 WIF1 與慢性氣道炎癥反應的相關性，在 560 例中國漢族哮喘兒童中 WIF1 基因的 rs6581612 位點與第 1 秒用力呼氣末容積的差異無關[16]，WIF1 基因 SNP 與結核病相關性鮮有報道，本課題組前期研究中未發現 WIF1 基因的 rs56900803 位點在中國西部藏族人群中與結核病存在關聯。
DKK 基因編碼分泌性糖蛋白 DKK1，基因全長 1 815 kb，位于第 10 號染色體 10q11 上。DKK1 是 WNT 信號通路抑制劑，是重要的負反饋調節因子，DKK1 通過結合細胞表面受體，在 WNT 信號通路中起負調控作用[17]。有較多關于 DKK1 基因多態性與疾病的研究，Liu 等[18]發現 DKK1 基因的 rs156919 位點和 rs11001560 位點可能與中國漢族女性人群中髖關節發育異常相關，DKK1 基因 rs1569198 位點與多囊卵巢綜合征中雄激素增多及內分泌代謝紊亂相關[19]，未發現中國漢族人群 rs2241529 位點與胃癌發病危險因素相關[20]，而 DKK1 基因多態性與結核易感性的相關研究少見報道。課題組前期研究未發現 DKK1 rs11001553 位點在中國西部藏族人群中與結核易感性相關。
本研究存在一定的局限性：首先，此次研究納入的樣本數量可能不足以發現兩個 SNP 與結核易感性的關系。其次，選擇的這兩個位點可能確實與結核病易感性之間不存在聯系，但選擇的位點不一定能代表基因；并且由于本研究的研究對象為活動性肺結核患者，未納入結核潛伏感染患者，無法確定兩個位點是否與結核潛伏感染相關。
綜上所述，本研究未發現 WIF1 rs58635985 位點和 DKK1 rs11001548 與結核易感性、臨床特征和實驗室指標之間存在相關性，后續將擴大樣本量和在其他人群中進一步驗證 WIF1 和 DKK1 與結核易感性的關系。WNT 信號通路的基因多態性如何影響結核病發病機制，未來仍需深入研究。
結核病是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一種傳染性疾病，在單一病原體引起死亡的傳染性疾病中排名第一。根據世界衛生組織 2017 年的報告，2016 年約有 1 040 萬新發結核病例，而我國每年有新增病例 100 萬例和死亡病例 3.9 萬例，排名世界第三[1]。不同個體對 MTB 的易感性有很大差異，宿主遺傳背景可影響結核感染的發生、發展和預后[2]。
許多基因位點與結核病的發展有關，其中包括 WNT 信號通路、細胞因子和趨化因子等[3]。WNT 信號通路是一條進化上高度保守的信號轉導通路，參與調控結核感染過程中的免疫炎性反應應答，在結核發生、發展中發揮重要作用[4]。WNT 抑制蛋白 1（WNT inhibitory factor 1，WIF1）和 WNT 通路抑制因子 Dickkopf（Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor，DKK）是 WNT 信號通路中重要的拮抗因子，通過與 WNT 或 WNT 受體結合而抑制 WNT 信號通路，負調控靶基因表達[5]。本課題組前期研究發現 WNT 信號通路的抑制基因 CTNNB1 rs4135385 位點和 SFRP1 rs78322767 位點在中國西部漢族人群中與結核易感性相關[6]，在中國西部地區藏族人群中未發現 DKK1 rs1100155 位點和 WIF1 rs56900803 位點與結核病存在關聯[7]。同時，研究顯示活動性肺結核患者的臨床特征及實驗室指標的差異與單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）遺傳變異存在關聯性[6]。本研究首次在中國西部地區漢族人群中對 WNT 信號通路中兩個關鍵基因 WIF1 rs58635985 位點和 DKK1 rs11001548 位點與結核易感性、臨床特征和實驗室指標的相關性進行探究。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 研究對象
納入 2014 年 12 月—2016 年 11 月期間，于四川大學華西醫院就診的 475 例結核病患者為結核病組。結核病組納入標準：① 根據我國結核病診斷標準，具有典型的結核病癥狀和體征，且至少符合以下幾項之一：A. 2 次以上的抗酸染色涂片陽性或 MTB 培養陽性或 MTB 核酸檢測（TB-DNA）陽性；B. 細菌學證據陰性，但 CT 等影像學檢查顯示典型的活動性結核病變表現；C. 病理學診斷支持結核病變；D. 2 次以上的 γ-干擾素釋放試驗陽性且抗結核感染治療有效。② 漢族。370 例健康對照來自于同期健康體檢人群，納入標準：① 既往無結核病史；② 痰涂片及 TB-DNA 檢測等結核相關檢查陰性；③ 影像學檢查無異常；④ 經健康體檢證實為健康個體；⑤ 漢族。兩組排除標準：① 其他呼吸系統疾病如肺部感染和慢性阻塞性肺部疾病等；② 系統性慢性疾病如高血壓、糖尿病等；③ 腫瘤患者；④ 自身免疫性疾病；⑤ 肝炎病毒感染，人類免疫缺陷病毒感染；⑥ 使用免疫抑制劑或增強劑的患者。本研究經四川大學華西醫院臨床試驗與生物醫學倫理專委會審核通過［2014 年審（198）號］，并獲得所有納入對象知情同意。
1.2 研究方法
1.2.1 基因分型
使用乙二胺四乙酸抗凝采血管采集所有受試者的外周靜脈血 3～5 mL。按照 QIAamp DNA Blood Midi Kit （德國 Qiagen 公司）試劑盒說明書，提取人外周血 DNA。基因型采用“2x48-Plex SNPscanTM Kit”高通量基因分型技術（上海天昊生物技術公司），以雙蒸水為陰性對照，進行基因分型實驗，提高分型質量。隨機選擇 10%～15% 的樣品進行重復基因分型，質量控制樣本的符合率為 100%。
1.2.2 臨床數據收集及實驗室指標檢測
① 收集研究對象相關病歷信息，包括年齡、性別、體質量指數（body mass index，BMI）、治療情況、基礎疾病等。② 實驗室檢測指標：全血細胞計數采用全自動血液學分析儀 XE-5000TM（日本 Sysmx 公司），C 反應蛋白濃度檢測采用 IMMAGE 800（美國 Beckman Coulter 公司），紅細胞沉降率（血沉）采用全自動血沉分析儀（意大利 Alifax 公司）測定。MTB 病原學檢測包括涂片鏡檢、MTB 培養和 TB-DNA 分子檢測，其中涂片鏡檢采 Ziehl-Neelsen 抗酸染色，MTB 培養用 MGIT 960 系統（美國 Becton Dickinson 公司），檢測 TB-DNA 用實時熒光定量聚合酶鏈反應試劑盒（德國 Qiagen 公司）。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件進行數據分析。正態分布的連續變量采用均數±標準差表示，非正態分布的連續變量采用中位數（最小值，最大值）表示，分類變量用絕對數或百分數表示。正態分布的計量資料，兩組間比較采用 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；非正態分布或不符合參數檢驗適用條件的計量資料，兩組間比較采用 Mann-Whitney 秩和檢驗，多組間比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗；計數資料組間比較采用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。應用 Hardy-Weinberg 平衡法（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）進行遺傳平衡檢驗。利用 PLINK V1.09 軟件比較兩組間 SNP 的等位基因、基因型及遺傳模型分布差異。兩組之間各基因型、等位基因頻率對結核發病風險影響用比值比（odds ratio，OR）及 95% 置信區間（confidence interval，CI）表示。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 研究人群基本特征
結核病組 475 例，其中男 285 例，女 190 例，平均年齡（41.66±19.23）歲；健康對照組 370 例，其中男 223 例，女 147 例，平均年齡（42.30±11.57）歲；兩組性別和年齡差異均無統計學意義（P>0.05），且均以中年男性為主。實驗室檢查結果中，紅細胞比容、血小板計數、白細胞計數、中性粒細胞絕對值計數、單核細胞絕對值計數在結核病組均明顯高于健康對照組，差異有統計學意義（P<0.001）；而健康對照組的紅細胞計數、血紅蛋白含量、淋巴細胞絕對值計數明顯高于結核病組，差異有統計學意義（P<0.001）。見表 1。
結核病組 TB-DNA 陽性率為 54.92% （162/295），TB-DNA 檢測對診斷結核的敏感性高于涂片顯微鏡［OR=1.876，95%CI（1.462，2.466），P<0.001］和培養法［OR=3.179，95%CI（1.884，5.365），P<0.001］，后兩者陽性率分別為 29.28%（130/444）和 17.27%（19/110）。結核病亞型中肺結核占 78.11%（371/475），肺外結核占 18.95%（90/475），肺結核合并肺外結核占 2.95%（14/554）。
表1
研究對象的臨床特征
2.2 WIF1、DKK1基因多態性與結核病易感性的關系
475 例結核病患者和 370 例健康對照者均成功進行基因分型。WIF1 基因 rs58635985 位點和 DKK1 基因 rs11001548 位點，各基因型頻率符合 HWE（P>0.05）。在結核病組和健康對照組中，rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率和基因型在病例組和對照組之間分布差異無統計學意義（P>0.05）。3 種遺傳模型（加性、顯性和隱性）在兩組間分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 2、3。
表2
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在結核病組和健康對照組分布情況［例（%）］
表3
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在結核病組和健康對照組分布情況［例（%）］
2.3 WIF1 基因和 DKK1 基因多態性與肺結核易感性的關系
肺結核是最主要的臨床亞組，占 78.11%（371/475）。rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率和基因型分布在肺結核組和健康對照組之間差異無統計學意義（P>0.05）。在 3 種遺傳模型（加性、顯性和隱性）中，rs58635985 位點和 rs11001548 位點在兩組之間差異均無統計學意義（P>0.05）。見表 4、5。
對 rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率及基因型在肺結核組與肺外結核組間進行亞組分析，肺結核合并肺外結核樣本數量較少，不作進一步分析。肺結核組 371 例（78.11%）和肺外結核組 90 例（18.95%），rs58635985 位點和 rs11001548 位點的等位基因頻率及基因型在肺結核組和肺外結核組分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 6、7。
表4
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和健康對照組分布情況［例（%）］
表5
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和健康對照組分布情況［例（%）］
表6
WIF1 rs58635985 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和肺外結核組分布情況［例（%）］
表7
DKK1 rs11001548 C>T 等位基因、基因型及遺傳模型在肺結核組和肺外結核組分布情況［例（%）］
2.4 結核病患者基因型與臨床特征及實驗室檢測指標的相關性研究
結核病患者 rs58635985 位點和 rs11001548 位點的基因型分布在臨床特征（發熱、體重減輕、盜汗、食欲減低及乏力）中的差異無統計學意義（P>0.05）。其基因型在實驗室檢查指標（C 反應蛋白、紅細胞計數、白細胞計數、TB-DNA 等）分布差異無統計學意義（P>0.05）。見表 8、9。
表8
rs58635985多態性與結核病患者臨床特征及實驗室檢測指標的關系
表9
rs11001548 多態性與結核病患者臨床特征及實驗室檢測指標的關系
3 討論
宿主遺傳背景在疾病發生發展和轉歸中具有非常重要的作用[2]，世界上約有 1/3 的人口感染了 MTB，僅 5%～10% 的人會發展成為活動性結核病[8]，宿主易感基因在結核病發生、發展中的作用成為近年研究熱點。Sveinbjornsson 等[9]的一項大型全基因組關聯分析研究表明，人類白細胞抗原Ⅱ類抗原（rs557011、rs9271378 和 rs9272785）可能通過減少向 T 細胞呈遞保護性 MTB 抗原而導致結核病易感性遺傳風險。大量研究提示，WNT 信號通路參與調節 MTB 感染的發病機制，在結核病的進程中發揮重要作用[4-5]。Fan 等[10]發現 WNT 信號通路與 MTB 感染后 T 細胞增殖及結核病嚴重程度密切相關，WNT 信號通路上的拮抗基因在抗 MTB 感染過程中參與免疫調控過程，保護機體免受過度免疫反應損傷[11]，其中重要拮抗基因 WIF1和DKK1，在腫瘤疾病如膠質母細胞瘤[12]、非小細胞肺癌[13]、肝癌[14]等中有較多報道，也有 WIF1 和 DKK1 與感染性疾病相關性的研究[7]。西部地區是中國結核病負擔較高的地區之一，本研究采用高通量基因分型技術首次對 WIF1 基因 rs58635985 位點和 DKK1 基因 rs11001548 位點進行分析，未發現 SNP （rs58635985、rs11001548）在中國西部漢族人群中與結核易感性、臨床特征及實驗室指標有關聯性。
WIF1 基因編碼的 WNT 抑制因子 1（WIF1）是 WNT 信號通路的抑制劑，它通過直接與 WNT 配體結合和阻止配體與細胞表面受體結合，從而對 WNT 信號傳導產生抑制作用[15]。目前對 WIF1 研究主要集中在腫瘤方面，Hu 等[14]發現 WIF1 能顯著抑制人微血管內皮細胞和小鼠內皮祖細胞的形成和遷移，抑制肝癌血管生成和腫瘤生長。也有學者研究 WIF1 與慢性氣道炎癥反應的相關性，在 560 例中國漢族哮喘兒童中 WIF1 基因的 rs6581612 位點與第 1 秒用力呼氣末容積的差異無關[16]，WIF1 基因 SNP 與結核病相關性鮮有報道，本課題組前期研究中未發現 WIF1 基因的 rs56900803 位點在中國西部藏族人群中與結核病存在關聯。
DKK 基因編碼分泌性糖蛋白 DKK1，基因全長 1 815 kb，位于第 10 號染色體 10q11 上。DKK1 是 WNT 信號通路抑制劑，是重要的負反饋調節因子，DKK1 通過結合細胞表面受體，在 WNT 信號通路中起負調控作用[17]。有較多關于 DKK1 基因多態性與疾病的研究，Liu 等[18]發現 DKK1 基因的 rs156919 位點和 rs11001560 位點可能與中國漢族女性人群中髖關節發育異常相關，DKK1 基因 rs1569198 位點與多囊卵巢綜合征中雄激素增多及內分泌代謝紊亂相關[19]，未發現中國漢族人群 rs2241529 位點與胃癌發病危險因素相關[20]，而 DKK1 基因多態性與結核易感性的相關研究少見報道。課題組前期研究未發現 DKK1 rs11001553 位點在中國西部藏族人群中與結核易感性相關。
本研究存在一定的局限性：首先，此次研究納入的樣本數量可能不足以發現兩個 SNP 與結核易感性的關系。其次，選擇的這兩個位點可能確實與結核病易感性之間不存在聯系，但選擇的位點不一定能代表基因；并且由于本研究的研究對象為活動性肺結核患者，未納入結核潛伏感染患者，無法確定兩個位點是否與結核潛伏感染相關。
綜上所述，本研究未發現 WIF1 rs58635985 位點和 DKK1 rs11001548 與結核易感性、臨床特征和實驗室指標之間存在相關性，后續將擴大樣本量和在其他人群中進一步驗證 WIF1 和 DKK1 與結核易感性的關系。WNT 信號通路的基因多態性如何影響結核病發病機制，未來仍需深入研究。
