引用本文： 陳姣, 黃茜, 丁彬, 毛志剛, 粟軍. Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀在體液細胞計數及分類中的應用. 華西醫學, 2017, 32(4): 563-566. doi: 10.7507/1002-0179.201601134 復制
胸腹腔積液及腦脊液常規檢查對于臨床上的疾病診斷、治療及預后有著重要的意義，現今所使用的方法多為人工計數法。人工計數法多為手工顯微鏡法，操作時帶有很大的主觀性和經驗性，操作費時、繁瑣，難以滿足臨床的工作需求。很多臨床檢驗項目已經由傳統的手工操作轉向儀器自動化操作。Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀本身帶有體液模式，可以對胸腹腔積液及腦脊液進行計數、分類，但并未在臨床進行論證及推廣，其準確性受諸多因素影響。儀器法進行流式細胞計數具有便捷、高效、適合大批量標本操作的特點。目前有很多關于儀器法進行體液細胞計數的研究[1-3]。我們對 2015年5月—9月采集的95 份標本使用 Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式及手工法分別進行計數和比較，評價其在胸腹腔積液及腦脊液細胞計數中的應用性。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
采集 2015 年 5 月—9 月四川大學華西醫院住院患者體液標本共 95 份，包括胸腔積液 42 份，腹腔積液 21 份，腦脊液 26 份，透析液 4 份，穿刺液 2 份；置于無菌容器中送檢并于 4 h 內完成檢測。
1.2 儀器及試劑
Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式及其配套校準品、質量控制（質控）品和檢測試劑；改良牛鮑計數板，奧林巴斯普通光學顯微鏡 CX21；冰醋酸。所有試劑均參照四川大學華西醫院實驗醫學科臨床檢驗血液室標準化操作規程進行配制。
1.3 檢測方法
納入的所有標本均同時采用儀器法和手工法兩種方法檢測計數，并比較兩種方法檢測結果的差異。
儀器法：參照全血細胞分析儀體液模式的操作說明完成，使用 Sysmex 配套校準品 SCS-1000 進行校準，用配套高、中-水平質控品進行室內質控，各檢測參數結果均在控方可進行標本檢測，分別記錄有核細胞數、紅細胞數、有核細胞分類計數（單個核細胞和多個核細胞百分比）。
手工法：參照四川大學華西醫院實驗醫學科臨床檢驗血液室標準化操作規程進行操作，將標本混勻后吸取適量進行充池，靜置 5 min，用普通光學顯微鏡分別計數牛鮑計數板上、下 2 個計數區域內的四角及中央共 10 個大格內的有核細胞和紅細胞。有核細胞分類計數采用冰醋酸處理破壞紅細胞后，分別計數單個核細胞、多個核細胞及間皮細胞百分比。所有操作均由同一人按照標準化操作執行[4]。儀器法中單個核細胞比例=手工法中單個核細胞比例+間皮細胞比例。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 20.0 軟件進行統計分析。對兩種方法的有核細胞計數及紅細胞計數結果進行 kappa 一致性檢驗，有核細胞分類計數進行配對t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 手工法與儀器法體液標本有核細胞與紅細胞計數結果比較
手工法與儀器法體液標本有核細胞計數一致性較好（kappa=0.965，P<0.001）；手工法與儀器法體液標本紅細胞計數一致性較好（kappa=0.988，P<0.001）。見表 1 及圖 1、2。
表1
兩種方法體液標本有核細胞及紅細胞計數結果比較（
n=95，
）
圖1
手工法與儀器法體液標本有核細胞計數結果比較散點圖
圖2
手工法與儀器法體液標本紅細胞計數結果比較散點圖
2.2 手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數
手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數中，單個核細胞計數結果差異無統計學意義（P>0.05），而多個核細胞計數結果差異有統計學意義（P<0.05）。見表 2。
表2
手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數結果比較
3 討論
胸腹腔積液及腦脊液細胞計數作為臨床常規檢測項目，有助于臨床醫生了解患者身體感染、出血等情況，同時有助于判斷滲出性質、及時對患者進行處理。目前手工計數仍是體液細胞計數最常用的方法，也是金標準[5]。但手工法技術誤差大，重復性差，而且耗時費力，不易于大批量操作。隨著檢驗自動化程度的不斷提高，越來越多的檢測項目可以借助儀器自動完成。儀器法具有人為誤差小、效率高、精密度高、易于大批量操作等優點。應用血細胞分析儀進行胸腹腔積液及腦脊液細胞計數，不僅提高了效率，也利于檢驗自動化。目前已經有很多關于體液細胞計數自動化方面的研究[6]。但儀器法進行體液細胞計數并未在臨床進行論證及推廣，這歸因于體液類型復雜、體液基本狀況差異大等多種因素[7]，血液和體液基質成分的差別也使得結果準確性受到影響[8]，雖然 Sysmex XT-4000i 的體液模式有單獨的通道，但還是易引起機器的堵塞[9]。
本研究的主要目的是評價 Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式在胸腹腔積液及腦脊液標本細胞計數及分類計數中的應用價值，結果顯示：① 手工法與儀器法體液標本有核細胞計數及紅細胞計數一致性較好（kappa=0.965，P<0.001；kappa=0.988，P<0.001。），說明 Sysmex XT-4000i 的體液模式在有核細胞計數和紅細胞的計數上是可行的。有核細胞分類計數中單個核細胞計數結果兩種方法差異無統計學意義（P>0.05），而多個核細胞計數結果差異有統計學意義（P<0.05）。說明盡管儀器對于紅細胞、白細胞總數的計數與經典牛鮑計數板手工相比較無太大差異，但是對于白細胞分類和單核細胞、多核細胞的分類存在較大的差異，同時儀器對于大細胞、異常細胞的辨識度不夠。儀器法在有核細胞分類計數方面相關性較差，這可能和兩種方法分類標準不一致有關，儀器法只能對包括淋巴細胞和單核細胞在內的單個核細胞和多個核細胞進行簡單的分類，對于間質細胞、內皮細胞、異常細胞的辨識度存在很大的差異。② 前一個分析結果高出閾值時，儀器對于背景的清洗時間過長，不利于臨床上的應用。③ Sysmex XT-4000i 主要應用于血液上的分析，如果要進行體液模式檢查胸腹腔積液和腦脊液，模式之間的切換是個問題，反而會花費過長的時間，導致臨床檢測時間過長。④ 儀器在體液模式下，懷疑儀器對于一些小結晶、小顆粒存在錯誤辨識，導致結果失真。⑤ 在人工審核時，質控很關鍵，結果的真實度存在很大的問題。
目前有很多關于儀器法進行體液細胞計數方面的研究。有研究對 Sysmex XE-5000 全自動血液分析儀體液模式進行有核細胞計數和 BD FACSCalibur 流式細胞儀進行白細胞計數進行比較，結果顯示兩種方法的白細胞計數具有很好的相關性[10]。在對不同廠家不同型號儀器的體液模式與手工顯微鏡計數結果分析比較發現，儀器法在紅細胞計數、白細胞計數方面與手工法一致性良好，但也有文獻報道 Mindray BC-6800 的體液模式在異常細胞分類計數中識別能力較差需要顯微鏡檢查補充[11-13]。也有研究顯示，儀器法細胞計數并不適合用于所有體液標本，血性的體液標本兩種方法有很高的相關性，但非血性的體液標本則差異較大[14]。而且體液中若有凝塊，其準確性將大大減低[15]。若體液中細胞數量超過一定的閾值，其準確度也不可信[16-17]。
綜上所述，使用全血細胞分析儀進行胸腹腔積液和腦脊液細胞計數，雖然更方便快速、精密度高，但結果的真實度存在很大的問題，對特殊異常細胞不易察覺，且對標本的性質有一定的限制，檢測結果受多方面影響，而且會花費更長的時間。所以目前認為全血細胞分析儀體液模式可能用于部分物理性狀較好的常規體液標本的細胞計數，但細胞分類計數結果還需要顯微鏡檢查輔助。
胸腹腔積液及腦脊液常規檢查對于臨床上的疾病診斷、治療及預后有著重要的意義，現今所使用的方法多為人工計數法。人工計數法多為手工顯微鏡法，操作時帶有很大的主觀性和經驗性，操作費時、繁瑣，難以滿足臨床的工作需求。很多臨床檢驗項目已經由傳統的手工操作轉向儀器自動化操作。Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀本身帶有體液模式，可以對胸腹腔積液及腦脊液進行計數、分類，但并未在臨床進行論證及推廣，其準確性受諸多因素影響。儀器法進行流式細胞計數具有便捷、高效、適合大批量標本操作的特點。目前有很多關于儀器法進行體液細胞計數的研究[1-3]。我們對 2015年5月—9月采集的95 份標本使用 Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式及手工法分別進行計數和比較，評價其在胸腹腔積液及腦脊液細胞計數中的應用性。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
采集 2015 年 5 月—9 月四川大學華西醫院住院患者體液標本共 95 份，包括胸腔積液 42 份，腹腔積液 21 份，腦脊液 26 份，透析液 4 份，穿刺液 2 份；置于無菌容器中送檢并于 4 h 內完成檢測。
1.2 儀器及試劑
Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式及其配套校準品、質量控制（質控）品和檢測試劑；改良牛鮑計數板，奧林巴斯普通光學顯微鏡 CX21；冰醋酸。所有試劑均參照四川大學華西醫院實驗醫學科臨床檢驗血液室標準化操作規程進行配制。
1.3 檢測方法
納入的所有標本均同時采用儀器法和手工法兩種方法檢測計數，并比較兩種方法檢測結果的差異。
儀器法：參照全血細胞分析儀體液模式的操作說明完成，使用 Sysmex 配套校準品 SCS-1000 進行校準，用配套高、中-水平質控品進行室內質控，各檢測參數結果均在控方可進行標本檢測，分別記錄有核細胞數、紅細胞數、有核細胞分類計數（單個核細胞和多個核細胞百分比）。
手工法：參照四川大學華西醫院實驗醫學科臨床檢驗血液室標準化操作規程進行操作，將標本混勻后吸取適量進行充池，靜置 5 min，用普通光學顯微鏡分別計數牛鮑計數板上、下 2 個計數區域內的四角及中央共 10 個大格內的有核細胞和紅細胞。有核細胞分類計數采用冰醋酸處理破壞紅細胞后，分別計數單個核細胞、多個核細胞及間皮細胞百分比。所有操作均由同一人按照標準化操作執行[4]。儀器法中單個核細胞比例=手工法中單個核細胞比例+間皮細胞比例。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 20.0 軟件進行統計分析。對兩種方法的有核細胞計數及紅細胞計數結果進行 kappa 一致性檢驗，有核細胞分類計數進行配對t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 手工法與儀器法體液標本有核細胞與紅細胞計數結果比較
手工法與儀器法體液標本有核細胞計數一致性較好（kappa=0.965，P<0.001）；手工法與儀器法體液標本紅細胞計數一致性較好（kappa=0.988，P<0.001）。見表 1 及圖 1、2。
表1
兩種方法體液標本有核細胞及紅細胞計數結果比較（
n=95，
）
圖1
手工法與儀器法體液標本有核細胞計數結果比較散點圖
圖2
手工法與儀器法體液標本紅細胞計數結果比較散點圖
2.2 手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數
手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數中，單個核細胞計數結果差異無統計學意義（P>0.05），而多個核細胞計數結果差異有統計學意義（P<0.05）。見表 2。
表2
手工法與儀器法體液標本有核細胞分類計數結果比較
3 討論
胸腹腔積液及腦脊液細胞計數作為臨床常規檢測項目，有助于臨床醫生了解患者身體感染、出血等情況，同時有助于判斷滲出性質、及時對患者進行處理。目前手工計數仍是體液細胞計數最常用的方法，也是金標準[5]。但手工法技術誤差大，重復性差，而且耗時費力，不易于大批量操作。隨著檢驗自動化程度的不斷提高，越來越多的檢測項目可以借助儀器自動完成。儀器法具有人為誤差小、效率高、精密度高、易于大批量操作等優點。應用血細胞分析儀進行胸腹腔積液及腦脊液細胞計數，不僅提高了效率，也利于檢驗自動化。目前已經有很多關于體液細胞計數自動化方面的研究[6]。但儀器法進行體液細胞計數并未在臨床進行論證及推廣，這歸因于體液類型復雜、體液基本狀況差異大等多種因素[7]，血液和體液基質成分的差別也使得結果準確性受到影響[8]，雖然 Sysmex XT-4000i 的體液模式有單獨的通道，但還是易引起機器的堵塞[9]。
本研究的主要目的是評價 Sysmex XT-4000i 全血細胞分析儀體液模式在胸腹腔積液及腦脊液標本細胞計數及分類計數中的應用價值，結果顯示：① 手工法與儀器法體液標本有核細胞計數及紅細胞計數一致性較好（kappa=0.965，P<0.001；kappa=0.988，P<0.001。），說明 Sysmex XT-4000i 的體液模式在有核細胞計數和紅細胞的計數上是可行的。有核細胞分類計數中單個核細胞計數結果兩種方法差異無統計學意義（P>0.05），而多個核細胞計數結果差異有統計學意義（P<0.05）。說明盡管儀器對于紅細胞、白細胞總數的計數與經典牛鮑計數板手工相比較無太大差異，但是對于白細胞分類和單核細胞、多核細胞的分類存在較大的差異，同時儀器對于大細胞、異常細胞的辨識度不夠。儀器法在有核細胞分類計數方面相關性較差，這可能和兩種方法分類標準不一致有關，儀器法只能對包括淋巴細胞和單核細胞在內的單個核細胞和多個核細胞進行簡單的分類，對于間質細胞、內皮細胞、異常細胞的辨識度存在很大的差異。② 前一個分析結果高出閾值時，儀器對于背景的清洗時間過長，不利于臨床上的應用。③ Sysmex XT-4000i 主要應用于血液上的分析，如果要進行體液模式檢查胸腹腔積液和腦脊液，模式之間的切換是個問題，反而會花費過長的時間，導致臨床檢測時間過長。④ 儀器在體液模式下，懷疑儀器對于一些小結晶、小顆粒存在錯誤辨識，導致結果失真。⑤ 在人工審核時，質控很關鍵，結果的真實度存在很大的問題。
目前有很多關于儀器法進行體液細胞計數方面的研究。有研究對 Sysmex XE-5000 全自動血液分析儀體液模式進行有核細胞計數和 BD FACSCalibur 流式細胞儀進行白細胞計數進行比較，結果顯示兩種方法的白細胞計數具有很好的相關性[10]。在對不同廠家不同型號儀器的體液模式與手工顯微鏡計數結果分析比較發現，儀器法在紅細胞計數、白細胞計數方面與手工法一致性良好，但也有文獻報道 Mindray BC-6800 的體液模式在異常細胞分類計數中識別能力較差需要顯微鏡檢查補充[11-13]。也有研究顯示，儀器法細胞計數并不適合用于所有體液標本，血性的體液標本兩種方法有很高的相關性，但非血性的體液標本則差異較大[14]。而且體液中若有凝塊，其準確性將大大減低[15]。若體液中細胞數量超過一定的閾值，其準確度也不可信[16-17]。
綜上所述，使用全血細胞分析儀進行胸腹腔積液和腦脊液細胞計數，雖然更方便快速、精密度高，但結果的真實度存在很大的問題，對特殊異常細胞不易察覺，且對標本的性質有一定的限制，檢測結果受多方面影響，而且會花費更長的時間。所以目前認為全血細胞分析儀體液模式可能用于部分物理性狀較好的常規體液標本的細胞計數，但細胞分類計數結果還需要顯微鏡檢查輔助。
