引用本文： 李小紅, 李尚為, 羅珊, 樊偉, 曾珣, 白瑜, 秦朗. 慢性輕度不可預見性應激雌性昆明小鼠模型在生殖醫學領域應用的可行性探討. 華西醫學, 2015, 30(11): 2071-2075. doi: 10.7507/1002-0179.20150587 復制
近年來，不孕癥的發病率呈上升趨勢。心理因素可能參與不孕癥的發生，也可能影響不孕癥的治療效果。有研究發現，不孕夫婦存在高程度的述情障礙，伴有較高的狀態和特質焦慮，生活質量明顯下降；進行體外受精（IVF）-胚胎移植（ET）治療的患者，其焦慮程度顯著高于一般治療的不孕患者[1-3]。我們的前期研究也提示如果不孕患者同時存在焦慮和抑郁情緒應激，會負性影響IVF臨床妊娠率[4]。
動物模型是疾病機制研究和藥物開發的重要工具和有效手段[5]。慢性輕度不可預見性應激（CUMS）動物模型是運用情緒應激的方法，使動物出現抑郁狀態、興趣喪失、快感缺乏等表現，與人體抑郁癥的臨床表現類似。目前，該應激模型多用于大鼠的研究[6-8]，而小鼠對CUMS易感性具有性別及品系差異[9]，作為我國常用實驗動物之一的昆明小鼠能否建立穩定有效的CUMS模型尚未見相關報道。本研究在課題組前期研究的基礎上，繼續選用昆明小鼠建立CUMS動物模型，了解CUMS對雌性昆明小鼠生殖功能的影響，為后續探討應激對生殖功能的影響機制提供適宜的動物模型。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
昆明純種小鼠，購于四川大學實驗動物中心[動物合格證號：SCXK（川）2013-026]。其中雌性小鼠240只，4～5周齡，體質量18～22 g，每籠飼養5只；雄性小鼠20只，5～6周齡，體質量22～25 g，每籠1只單獨飼養。雄性小鼠是為合籠備用，按正常條件飼養。雌性小鼠正常飼養5 d以適應環境，每日觸摸動物以適應實驗人員的操作；5 d后采用隨機數字表法將雌性小鼠分為對照組（90只）和實驗組（150只）。
1.2 方法
對照組小鼠采用正常飼養：自由攝食、飲水，12 h光照，環境溫度18～22℃，相對濕度40%～60%。實驗組小鼠進行CUMS造模：實驗組小鼠適應5 d后開始CUMS刺激，持續28 d。參照本課題組前期研究方法[10]并作適當改進，以9種應激因子在4周內隨機應用，1種/d，每種累計2～4次，使動物不能預料刺激的發生。9種應激因子如下：① 潮濕墊料和傾斜飼養24 h（將200 mL水加入有墊料的籠底，并將小鼠籠子傾斜45°）；② 禁食24 h；③ 禁水24 h；④ 高溫10 min（40℃環境）；⑤ 夾尾1 min（距尾根1 cm夾鐵質小書夾）；⑥ 4℃冰水游泳5 min；⑦ 束縛應激4 h；⑧ 陌生異常物品（如塑料杯、木勺、碎布片等）；⑨ 孤養24 h。
1.2.1 觀察指標
① 曠場實驗。在造模第28天，用曠場試驗觀察兩組小鼠行為的變化。觀察時將單只小鼠置于長寬各60 cm、高40 cm光潔敞箱中央，敞箱底面劃分為25個等邊方格，內面用黑漆涂滿。記錄小鼠5 min內的動作行為表現，包括在中央格停留時間、跨格次數、豎立次數、理毛次數及糞便粒數。② 體質量變化。在造模期間，每周分別稱取兩組小鼠的體質量。造模第28天體質量減去造模前1天體質量為兩組小鼠的體質量增長數。③ 糖水消耗實驗。在造模前1天及造模第28天進行糖水消耗實驗，在進行糖水消耗實驗時，實驗組小鼠均單籠飼養，每只小鼠加2%蔗糖溶液30 mL，同時禁食，計算小鼠4 h內飲用2%蔗糖溶液的量。
1.2.2 超排卵方案
實驗組及對照組性成熟雌性小鼠于下午4點腹腔內注射孕馬血清促性腺激素（PMSG，天津實驗動物中心）10 U，48 h后腹腔注射人絨毛膜促性腺激素（HCG，上海生物化學制藥廠）10 U。
1.2.3 卵巢組織標本的獲取及蘇木精-伊紅（HE）染色
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各10只，于下午4點腹腔內注射PMSG 10 U，48 h后脫臼處死，用75%乙醇消毒腹部皮膚，打開腹腔暴露子宮、輸卵管和卵巢，剪下雙側卵巢用M2培養基清洗2遍，洗去血液和脂滴。然后將卵巢用4%中性甲醛固定，待HE染色。
將已固定24 h的卵巢組織取出充分水洗，70%～100%上行梯度乙醇脫水，二甲苯透明、浸臘、包埋，以5 μm連續切片、展片，將其貼于APES處理過的載玻片上，置烤箱58～60℃，30～60 min使之貼緊，然后按照操作常規HE染色。
1.2.4 卵母細胞的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只進行PMSG/HCG促排卵，HCG 注射后12～14 h后采用脫臼法處死小鼠，于卵巢與子宮之間找到并取出雙側輸卵管，置于預熱至37℃的M2培養基中，在解剖顯微鏡下以1號注射器針尖縱行撥開輸卵管，以M2培養基沖洗，尋找卵母細胞（卵冠丘復合物）并計數。
1.2.5 2-細胞期胚胎的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只進行PMSG/HCG促排卵，HCG 注射后即與性成熟雄鼠2∶1合籠，次日8點觀察陰栓并與雄鼠分開，見陰栓當日為孕1 d。孕2 d下午2點（相當于見陰栓后30 h或HCG注射后46 h）采用脫臼法處死雌性小鼠，于卵巢與子宮之間找到并取出雙側輸卵管，置于預熱至37℃的M2培養基中，在解剖顯微鏡下以1號注射器針尖縱行撥開輸卵管，以M2培養基沖洗，尋找2-細胞期胚胎。
1.2.6 孕4d胚胎（囊胚、桑葚胚）的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只于孕4 d下午2點采用脫臼法處死，分離并切斷雙側子宮，放入預熱至37℃的厄爾（Earle）平衡鹽溶液中。在解剖顯微鏡下，用1 mL注射器Earle平衡鹽溶液沖洗宮腔，37℃孵箱內靜置30 min后在體視顯微鏡下尋找胚胎。
1.2.7 孕5d體內著床位點實驗
將孕5d的實驗組和對照組小鼠各20只麻醉后，用芝加哥藍進行尾靜脈注射，然后處死小鼠，取出子宮及卵巢，計算子宮藍染的著床位點數。
1.3 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件包進行統計學分析。本研究中計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用成組設計的t檢驗；計數資料采用只數和百分比表示，組間比較應用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 小鼠一般情況
實驗期間，對照組雌鼠發育良好，精神佳，活潑好動，反應靈敏，毛發整齊有光澤。應激刺激4周后，實驗組小鼠開始出現精神萎靡，活動減少，反應遲鈍，毛發散亂無光澤等表現。見圖 1。
圖1
CUMS刺激4周后小鼠外觀變化 1a.對照組小鼠 1b.實驗組小鼠? ?圖 2CUMS刺激4周后小鼠促排卵卵巢情況 2a. 卵巢大體標本，其中標記C為對照組，標記T為實驗組 2b. 對照組卵巢組織HE染色（HE×50） 2c. 實驗組卵巢組織HE染色（HE×50）
2.2 CUMS刺激4周后小鼠體質量變化
實驗期間對照組雌鼠攝食正常，體質量增長正常。應激刺激2周后實驗組小鼠開始出現攝食減少，體質量增加減慢，4周后實驗組小鼠體質量增加（8.2±1.6）g，明顯低于對照組的體質量增加量（13.0±1.9） g，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。
表1
CUMS刺激4周后小鼠體質量增長情況及2%糖水4 h消耗實驗（2.3 CUMS刺激4周后小鼠糖水消耗實驗
經過4周的CUMS刺激，實驗組小鼠2%糖水4 h消耗量較基礎攝入量減少（1.3±0.5）g，而對照組雌鼠較基礎攝入量增加（0.6±0.2）g，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。
2.4 CUMS刺激4周后小鼠曠場實驗
CUMS刺激4周后，實驗組小鼠在曠場實驗中中央格停留時間和糞便粒數較對照組明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組小鼠跨格次數和豎立次數較對照組明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組小鼠的理毛次數差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 2。
表2
CUMS刺激4周后小鼠曠場實驗（2.5 CUMS刺激4周后小鼠超排卵反應情況
2.5.1 超排卵后卵巢及卵泡情況
實驗組小鼠超排卵后卵巢體積較對照組小，顏色較對照組白。將卵巢組織進行HE染色后顯示，實驗組竇卵泡數[（14.1±2.0）個]及排卵前卵泡數[（1.5±0.4）個]較對照組[分別為（20.5±2.3）個及（3.3±0.5）個]明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 2。
2.5.2 超排卵后卵母細胞及胚胎發育潛能
結果顯示，實驗組小鼠獲得卵母細胞數、受精率、2-細胞胚胎數、優胚數（率）和囊胚數等均較對照組明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。而兩組間孕4 d囊胚率差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 3。
表3
CUMS刺激4周后小鼠卵母細胞及胚胎發育潛能（n=20）
2.6 孕5 d小鼠體內著床位點實驗
在對40只小鼠進行尾靜脈注射時，有4只穿刺失敗，遂將小鼠復蘇繼續喂養2 d觀察孕7 d的著床胚胎數。結果顯示，實驗組著床位點數[（9.0±2.2）個]較對照組[（16.7±2.5）個]降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。
3 討論
心理應激為個體對外界環境有害物、威脅和挑戰經過自身認知和評價后所產生的生理、心理和行為反應；在不孕癥及IVF助孕治療過程中，同樣存在心理應激和應激反應。這些應激會損害不孕婦女的卵巢儲備功能[11-14]，還會影響IVF的成功率[15-17]。因此，有必要對應激對生殖功能的影響機制進行研究，首先是建立適宜研究的動物模型。
我們在課題組前期研究的基礎上，繼續選用雌性昆明小鼠建立CUMS動物模型。昆明小鼠是我國特有的封閉群小鼠，具有獨特的遺傳學性狀，是常用的實驗動物之一。在構建昆明小鼠CUMS抑郁模型時我們參照課題組前期方法，并做了適當改進，包括束縛應激、高溫和孤養等9種慢性、輕度和不可預見的應激因子。4周后實驗組小鼠一般情況、體質量增加、2%糖水消耗實驗及曠場實驗均較對照組小鼠存在明顯差異，提示CUMS昆明小鼠抑郁模型的有效性。有研究單獨采用束縛應激或隔離應激也能建立情緒應激動物模型[18-19]，但本研究中采用的CUMS與人們在日常生活中經歷慢性及低強度不良事件的情景更加類似。2%糖水消耗實驗及曠場實驗是對應激效果的行為學評價，結果顯示，實驗組小鼠中央格停留時間和糞便粒數增加，跨格次數、豎立次數和糖水消耗量減少，這些表現說明小鼠表現出抑郁狀態、興趣喪失和快感缺乏，與人類抑郁癥的臨床表現有一定相似性[10]。
本研究通過對CUMS小鼠采用PMSG/HCG促排卵治療，結果發現超排卵后實驗組小鼠的卵巢體積較對照組小，顏色較對照組白；HE染色后，實驗組小鼠卵巢的竇卵泡及排卵前卵泡較對照組明顯減少；實驗組小鼠的卵母細胞數、受精率、2-細胞期胚胎數、孕4 d胚胎數、囊胚數、優胚率及孕5 d著床位點數均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。可見CUMS降低了雌性昆明小鼠卵巢對超排卵的反應性和卵母細胞發育潛能。有研究發現，慢性情緒應激降低了大鼠血中卵泡刺激素、黃體生成素的含量[20]，抑制了瑞士小鼠卵泡發育，增加卵泡閉鎖，抑制生長分化因子9的表達，可能與慢性心理應激后小鼠卵泡顆粒細胞凋亡增加、卵母細胞與顆粒細胞間的縫隙連接破壞、卵巢自分泌/旁分泌因子等降低有關[21]。
綜上所述，通過研究我們建立了生殖功能減退的CUMS雌性昆明小鼠模型，具有有效性、可操作性和可重復性，可進一步用于生殖醫學領域機制方面的研究。
近年來，不孕癥的發病率呈上升趨勢。心理因素可能參與不孕癥的發生，也可能影響不孕癥的治療效果。有研究發現，不孕夫婦存在高程度的述情障礙，伴有較高的狀態和特質焦慮，生活質量明顯下降；進行體外受精（IVF）-胚胎移植（ET）治療的患者，其焦慮程度顯著高于一般治療的不孕患者[1-3]。我們的前期研究也提示如果不孕患者同時存在焦慮和抑郁情緒應激，會負性影響IVF臨床妊娠率[4]。
動物模型是疾病機制研究和藥物開發的重要工具和有效手段[5]。慢性輕度不可預見性應激（CUMS）動物模型是運用情緒應激的方法，使動物出現抑郁狀態、興趣喪失、快感缺乏等表現，與人體抑郁癥的臨床表現類似。目前，該應激模型多用于大鼠的研究[6-8]，而小鼠對CUMS易感性具有性別及品系差異[9]，作為我國常用實驗動物之一的昆明小鼠能否建立穩定有效的CUMS模型尚未見相關報道。本研究在課題組前期研究的基礎上，繼續選用昆明小鼠建立CUMS動物模型，了解CUMS對雌性昆明小鼠生殖功能的影響，為后續探討應激對生殖功能的影響機制提供適宜的動物模型。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
昆明純種小鼠，購于四川大學實驗動物中心[動物合格證號：SCXK（川）2013-026]。其中雌性小鼠240只，4～5周齡，體質量18～22 g，每籠飼養5只；雄性小鼠20只，5～6周齡，體質量22～25 g，每籠1只單獨飼養。雄性小鼠是為合籠備用，按正常條件飼養。雌性小鼠正常飼養5 d以適應環境，每日觸摸動物以適應實驗人員的操作；5 d后采用隨機數字表法將雌性小鼠分為對照組（90只）和實驗組（150只）。
1.2 方法
對照組小鼠采用正常飼養：自由攝食、飲水，12 h光照，環境溫度18～22℃，相對濕度40%～60%。實驗組小鼠進行CUMS造模：實驗組小鼠適應5 d后開始CUMS刺激，持續28 d。參照本課題組前期研究方法[10]并作適當改進，以9種應激因子在4周內隨機應用，1種/d，每種累計2～4次，使動物不能預料刺激的發生。9種應激因子如下：① 潮濕墊料和傾斜飼養24 h（將200 mL水加入有墊料的籠底，并將小鼠籠子傾斜45°）；② 禁食24 h；③ 禁水24 h；④ 高溫10 min（40℃環境）；⑤ 夾尾1 min（距尾根1 cm夾鐵質小書夾）；⑥ 4℃冰水游泳5 min；⑦ 束縛應激4 h；⑧ 陌生異常物品（如塑料杯、木勺、碎布片等）；⑨ 孤養24 h。
1.2.1 觀察指標
① 曠場實驗。在造模第28天，用曠場試驗觀察兩組小鼠行為的變化。觀察時將單只小鼠置于長寬各60 cm、高40 cm光潔敞箱中央，敞箱底面劃分為25個等邊方格，內面用黑漆涂滿。記錄小鼠5 min內的動作行為表現，包括在中央格停留時間、跨格次數、豎立次數、理毛次數及糞便粒數。② 體質量變化。在造模期間，每周分別稱取兩組小鼠的體質量。造模第28天體質量減去造模前1天體質量為兩組小鼠的體質量增長數。③ 糖水消耗實驗。在造模前1天及造模第28天進行糖水消耗實驗，在進行糖水消耗實驗時，實驗組小鼠均單籠飼養，每只小鼠加2%蔗糖溶液30 mL，同時禁食，計算小鼠4 h內飲用2%蔗糖溶液的量。
1.2.2 超排卵方案
實驗組及對照組性成熟雌性小鼠于下午4點腹腔內注射孕馬血清促性腺激素（PMSG，天津實驗動物中心）10 U，48 h后腹腔注射人絨毛膜促性腺激素（HCG，上海生物化學制藥廠）10 U。
1.2.3 卵巢組織標本的獲取及蘇木精-伊紅（HE）染色
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各10只，于下午4點腹腔內注射PMSG 10 U，48 h后脫臼處死，用75%乙醇消毒腹部皮膚，打開腹腔暴露子宮、輸卵管和卵巢，剪下雙側卵巢用M2培養基清洗2遍，洗去血液和脂滴。然后將卵巢用4%中性甲醛固定，待HE染色。
將已固定24 h的卵巢組織取出充分水洗，70%～100%上行梯度乙醇脫水，二甲苯透明、浸臘、包埋，以5 μm連續切片、展片，將其貼于APES處理過的載玻片上，置烤箱58～60℃，30～60 min使之貼緊，然后按照操作常規HE染色。
1.2.4 卵母細胞的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只進行PMSG/HCG促排卵，HCG 注射后12～14 h后采用脫臼法處死小鼠，于卵巢與子宮之間找到并取出雙側輸卵管，置于預熱至37℃的M2培養基中，在解剖顯微鏡下以1號注射器針尖縱行撥開輸卵管，以M2培養基沖洗，尋找卵母細胞（卵冠丘復合物）并計數。
1.2.5 2-細胞期胚胎的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只進行PMSG/HCG促排卵，HCG 注射后即與性成熟雄鼠2∶1合籠，次日8點觀察陰栓并與雄鼠分開，見陰栓當日為孕1 d。孕2 d下午2點（相當于見陰栓后30 h或HCG注射后46 h）采用脫臼法處死雌性小鼠，于卵巢與子宮之間找到并取出雙側輸卵管，置于預熱至37℃的M2培養基中，在解剖顯微鏡下以1號注射器針尖縱行撥開輸卵管，以M2培養基沖洗，尋找2-細胞期胚胎。
1.2.6 孕4d胚胎（囊胚、桑葚胚）的獲取
將對照組及造模成功的實驗組性成熟小鼠各20只于孕4 d下午2點采用脫臼法處死，分離并切斷雙側子宮，放入預熱至37℃的厄爾（Earle）平衡鹽溶液中。在解剖顯微鏡下，用1 mL注射器Earle平衡鹽溶液沖洗宮腔，37℃孵箱內靜置30 min后在體視顯微鏡下尋找胚胎。
1.2.7 孕5d體內著床位點實驗
將孕5d的實驗組和對照組小鼠各20只麻醉后，用芝加哥藍進行尾靜脈注射，然后處死小鼠，取出子宮及卵巢，計算子宮藍染的著床位點數。
1.3 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件包進行統計學分析。本研究中計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用成組設計的t檢驗；計數資料采用只數和百分比表示，組間比較應用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 小鼠一般情況
實驗期間，對照組雌鼠發育良好，精神佳，活潑好動，反應靈敏，毛發整齊有光澤。應激刺激4周后，實驗組小鼠開始出現精神萎靡，活動減少，反應遲鈍，毛發散亂無光澤等表現。見圖 1。
圖1
CUMS刺激4周后小鼠外觀變化 1a.對照組小鼠 1b.實驗組小鼠? ?圖 2CUMS刺激4周后小鼠促排卵卵巢情況 2a. 卵巢大體標本，其中標記C為對照組，標記T為實驗組 2b. 對照組卵巢組織HE染色（HE×50） 2c. 實驗組卵巢組織HE染色（HE×50）
2.2 CUMS刺激4周后小鼠體質量變化
實驗期間對照組雌鼠攝食正常，體質量增長正常。應激刺激2周后實驗組小鼠開始出現攝食減少，體質量增加減慢，4周后實驗組小鼠體質量增加（8.2±1.6）g，明顯低于對照組的體質量增加量（13.0±1.9） g，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。
表1
CUMS刺激4周后小鼠體質量增長情況及2%糖水4 h消耗實驗（2.3 CUMS刺激4周后小鼠糖水消耗實驗
經過4周的CUMS刺激，實驗組小鼠2%糖水4 h消耗量較基礎攝入量減少（1.3±0.5）g，而對照組雌鼠較基礎攝入量增加（0.6±0.2）g，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。
2.4 CUMS刺激4周后小鼠曠場實驗
CUMS刺激4周后，實驗組小鼠在曠場實驗中中央格停留時間和糞便粒數較對照組明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組小鼠跨格次數和豎立次數較對照組明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組小鼠的理毛次數差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 2。
表2
CUMS刺激4周后小鼠曠場實驗（2.5 CUMS刺激4周后小鼠超排卵反應情況
2.5.1 超排卵后卵巢及卵泡情況
實驗組小鼠超排卵后卵巢體積較對照組小，顏色較對照組白。將卵巢組織進行HE染色后顯示，實驗組竇卵泡數[（14.1±2.0）個]及排卵前卵泡數[（1.5±0.4）個]較對照組[分別為（20.5±2.3）個及（3.3±0.5）個]明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 2。
2.5.2 超排卵后卵母細胞及胚胎發育潛能
結果顯示，實驗組小鼠獲得卵母細胞數、受精率、2-細胞胚胎數、優胚數（率）和囊胚數等均較對照組明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。而兩組間孕4 d囊胚率差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 3。
表3
CUMS刺激4周后小鼠卵母細胞及胚胎發育潛能（n=20）
2.6 孕5 d小鼠體內著床位點實驗
在對40只小鼠進行尾靜脈注射時，有4只穿刺失敗，遂將小鼠復蘇繼續喂養2 d觀察孕7 d的著床胚胎數。結果顯示，實驗組著床位點數[（9.0±2.2）個]較對照組[（16.7±2.5）個]降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。
3 討論
心理應激為個體對外界環境有害物、威脅和挑戰經過自身認知和評價后所產生的生理、心理和行為反應；在不孕癥及IVF助孕治療過程中，同樣存在心理應激和應激反應。這些應激會損害不孕婦女的卵巢儲備功能[11-14]，還會影響IVF的成功率[15-17]。因此，有必要對應激對生殖功能的影響機制進行研究，首先是建立適宜研究的動物模型。
我們在課題組前期研究的基礎上，繼續選用雌性昆明小鼠建立CUMS動物模型。昆明小鼠是我國特有的封閉群小鼠，具有獨特的遺傳學性狀，是常用的實驗動物之一。在構建昆明小鼠CUMS抑郁模型時我們參照課題組前期方法，并做了適當改進，包括束縛應激、高溫和孤養等9種慢性、輕度和不可預見的應激因子。4周后實驗組小鼠一般情況、體質量增加、2%糖水消耗實驗及曠場實驗均較對照組小鼠存在明顯差異，提示CUMS昆明小鼠抑郁模型的有效性。有研究單獨采用束縛應激或隔離應激也能建立情緒應激動物模型[18-19]，但本研究中采用的CUMS與人們在日常生活中經歷慢性及低強度不良事件的情景更加類似。2%糖水消耗實驗及曠場實驗是對應激效果的行為學評價，結果顯示，實驗組小鼠中央格停留時間和糞便粒數增加，跨格次數、豎立次數和糖水消耗量減少，這些表現說明小鼠表現出抑郁狀態、興趣喪失和快感缺乏，與人類抑郁癥的臨床表現有一定相似性[10]。
本研究通過對CUMS小鼠采用PMSG/HCG促排卵治療，結果發現超排卵后實驗組小鼠的卵巢體積較對照組小，顏色較對照組白；HE染色后，實驗組小鼠卵巢的竇卵泡及排卵前卵泡較對照組明顯減少；實驗組小鼠的卵母細胞數、受精率、2-細胞期胚胎數、孕4 d胚胎數、囊胚數、優胚率及孕5 d著床位點數均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。可見CUMS降低了雌性昆明小鼠卵巢對超排卵的反應性和卵母細胞發育潛能。有研究發現，慢性情緒應激降低了大鼠血中卵泡刺激素、黃體生成素的含量[20]，抑制了瑞士小鼠卵泡發育，增加卵泡閉鎖，抑制生長分化因子9的表達，可能與慢性心理應激后小鼠卵泡顆粒細胞凋亡增加、卵母細胞與顆粒細胞間的縫隙連接破壞、卵巢自分泌/旁分泌因子等降低有關[21]。
綜上所述，通過研究我們建立了生殖功能減退的CUMS雌性昆明小鼠模型，具有有效性、可操作性和可重復性，可進一步用于生殖醫學領域機制方面的研究。
