引用本文： 王莉, 任麗玲, 高宇, 李文, 李碩, 武永康. 抗核抗體熒光模型與抗核抗體譜對應關系研究. 華西醫學, 2015, 30(1): 84-88. doi: 10.7507/1002-0179.20150023 復制
抗核抗體（ANA）是指針對包括核酸、核蛋白及細胞質成分抗體的總稱。目前ANA通常采用人喉表皮樣癌細胞（HEp-2）為底物的間接免疫熒光法（IIF法）進行檢測。ANA作為檢測針對真核細胞抗原成分的自身抗體的篩選性試驗，ANA陽性只能表明具有針對細胞抗原成分的抗體存在，但并不能依據熒光模型準確判斷特異性抗體的種類，因此，當ANA陽性時常需進一步檢測各亞類特異性的自身抗體，即ANA譜，以前常稱其為抗可提取的核抗原（ENA）抗體譜，而ANA譜的概念范圍遠大于ENA抗體譜的范圍，傳統的ENA抗體譜主要包括抗RNP、Sm、SSa、SSb、Scl-70、Jo-1和rib-P抗體7種，而由于抗原純化技術的進步，幾乎所有的細胞抗原均可純化，而無需采用鹽水提取純化抗原，因此ANA譜除上述7種抗體之外還包括抗dsDNA、抗組蛋白、抗核小體等自身抗體[1]。即ANA譜是檢測針對真核細胞各種特異性抗原所產生抗體的集合，其對于多種自身免疫性疾病診斷與鑒別診斷具有重要價值[2]，但鑒于ANA熒光模型對于特異性自身抗體ANA譜的結果關系不太明確，會造成臨床醫生申請不必要的檢測，實驗室工作人員核對ANA與ANA譜的結果關系，能及時發現錯誤檢測結果，有效防止醫療事故的發生。本研究通過回顧性分析2010年1月－2013年12月間7 385例中國人民解放軍第452醫院及四川大學華西醫院ANA熒光模型與ANA譜中8種特異性自身抗體之間的結果對應關系，為臨床醫生檢測項目申請及實驗室結果核對提供依據。
1 資料與方法
1.1 一般資料
7 385例ANA檢測結果為陽性或可疑的無重復病例標本均來自中國人民解放軍第452醫院和四川大學華西醫院，男:女=1:4.75，年齡1～93歲，平均42.5歲；男性患者發病年齡2～92歲，平均48.4歲；女性患者發病年齡1～93歲，平均41.2歲。
1.2 方法
1.2.1 ANA檢測方法
采用HEp-2細胞為抗原底物的IIF法檢測，將血清1:100稀釋，按試劑說明書操作，熒光顯微鏡下觀察特異性的熒光模型，具有一定熒光但無法辨別熒光模型時即判斷為可疑，陽性血清再按1:320、1:1 000、1:3 200、1:10 000繼續稀釋測得抗體最終滴度。熒光模型主要為：顆粒型、均質型、核仁型、著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、增殖細胞核抗原（PCNA）型等及不同熒光模型的復合型。試劑盒購自德國歐蒙公司。檢測顯微鏡為日本Nikon E6000型（日本尼康公司）。
1.2.2 抗dsDNA檢測方法
采用綠繩短膜蟲為底物的IIF法檢測，將血清1:10稀釋，按試劑說明書操作，綠繩短膜蟲動基體不發熒光為陰性，隱約可見為可疑，發出亮綠色特異性熒光為陽性，陽性血清再按1:32、1:100、1:320、1:1 000繼續稀釋測得抗體最終滴度。試劑盒購自德國歐蒙公司。檢測顯微鏡為日本Nikon E6000型（日本尼康公司）。
1.2.3 抗RNP、Sm、SSa、SSb、Scl-70、Jo-1和rib-P抗體7種抗體檢測
采用純化抗原的免疫條帶法。將血清1:100稀釋，按試劑說明書操作，顯色條帶通過EUROscan掃描軟件進行灰度分析，依灰度深淺自動判為－、±、+、++、+++ 5個級別，檢測試劑盒購自德國歐蒙公司，檢測描掃儀為EPSON 1600型（日本愛普生公司）。
1.3 統計學方法
采用SPSS 19.0統計軟件，兩樣本率的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 ANA與8種特異性自身抗體的結果關系
7 385例ANA為陽性或可疑病例進行8種特異性自身抗體（包括抗dsDNA、抗RNP、抗Sm、抗SSa、抗SSb、抗Scl-70、抗Jo-1和抗rib-P）的檢測。ANA結果除可疑外，陽性結果中以包括2種或多種熒光模型的復合型、顆粒型、均質型、胞漿型及核仁型等熒光模型為主，其他熒光模型出現頻率較小。顆粒型熒光模型常可出現抗RNP、抗Sm、抗SSa及抗SSb；而均質型主要以抗dsDNA及抗SSa為主；胞漿型主要以抗SSa及抗rib-P較高；核仁型以抗SSa抗體出現頻率較高。ANA熒光模型結果與臨床常規檢測的8種特異性自身抗體的結果關系見表 1。
表1
ANA與8種特異性自身抗體的結果關系[例（%）]
2.2 8種特異性自身抗體與ANA熒光模型的結果關系
7 385例ANA為陽性或可疑病例均進行8項特異性自身抗體的檢測，其中大部分患者會出現1種以上的特異性自身抗體，也可出現單純1種自身抗體陽性的情況，即其中1項抗體陽性，而另外其余7項抗體檢測結果均為陰性，為了排除其他抗體對分析結果的影響，本研究僅分析單純1種自身抗體與ANA熒光模型結果的關系（表 2）。理論上1種特異性自身抗體只對應1種熒光模型，但在實踐過程中，我們并未檢測除8種特異性自身抗體以外ANA譜，即可能出現1種抗體對應2種或以上熒光模型的情況，為了分析特異自身抗體與熒光模型的關系，我們將出現2種或以上熒光模型分別進行統計，由此出現熒光模型結果大于特異抗體總數的情況。
表2
單純特異性自身抗體檢測結果與ANA熒光模型結果關系[例（%）]
3 討論
ANA是診斷很多自身免疫性疾病最重要的檢查指標之一，以HEp-2細胞為底物的IIF法是ANA檢測的推薦方法[3]，但由于ANA包括自身抗體的種類較多，其診斷疾病特異性較差，須進一步檢測其具體抗體種類，以提高診斷自身免疫性疾病的特異性。本研究采用大樣本分析，探索ANA與其特異性自身抗體之間的關系，從本研究結果可以看出，ANA熒光模型除可疑結果外，主要以顆粒型、均質型、胞漿型及2種或以上熒光復合模型為主，與相關文獻報道一致[4]，但這些熒光模型對應目前臨床最常檢測的8種特異性自身抗體均可出現陽性，所有熒光模型均以抗SSa陽性為多，由此表明，抗SSa是出現頻率最高的一種特異性自身抗體[5]。但有些抗體檢出率明顯降低，如，顆粒型熒光模型主要會出現抗RNP、抗Sm、抗SSa及抗SSb，而抗dsDNA、抗Scl-70、抗Jo-1及抗rib-P出現頻率較低，但由于抗RNP抗體與混合性結締組織病有關[6]，抗Sm是診斷系統性紅斑狼瘡的指標之一[7]，抗SSa及抗SSb與診斷干燥綜合征相關[8]。因此，當ANA檢測為顆粒型時必須進一步檢測特異性抗體的種類，以對相關自身免疫性疾病作出診斷。均質型同樣也是ANA檢測中經常出現的熒光模型。表 1的結果顯示，當ANA檢測結果為均質型時抗dsDNA及抗SSa出現頻率較高，其他特異性抗體出現頻率較小，抗dsDNA與系統性紅斑狼瘡有關[9]，而抗SSa與干燥綜合征有關。而胞漿型熒光模型出現抗rib-P和抗SSa頻率較高，而抗rib-P與狼瘡腦病有關[10]，因此，臨床實踐中，雖不能通過熒光模型推測特異性自身抗體的準確類型，但也有一定的規律可循。即不同熒光模型主要表現為出現頻率較高的類型，對于出現頻率較低的特異性自身抗體，應加以注意，避免錯識結果的發生。另值得注意的是其他一些熒光模型如著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、肌動蛋白型、原肌球蛋白型、PCNA型、波形蛋白型熒光模型，對應的8種特異性自身抗體陽性率均較低，此外這些熒光模型針對的細胞亞結構抗原已很清楚，部分模型臨床意義明確，如著絲點型主要對硬皮病具有診斷價值[11-12]，因此ANA出現上述熒光模型時，為節約醫療成本，沒必要再申請8種特異性自身抗體檢測。
為了研究單純1種抗體與ANA熒光模型之間的關系，為排除其他自身抗體對熒光模型的影響，本研究在8種ANA譜檢測中，采用只有1種抗體陽性時，確定單純抗體與熒光模型之間的關系。在實踐過程中，患者血清可能存在8種特異性自身抗體以外ANA譜，即出現我們檢測1種抗體對應2種或以上熒光模型的情況，我們將出現2種或以上熒光模型分別進行統計，由此出現熒光模型結果大于特異抗體總數的情況。表 2結果顯示，當單純抗dsDNA抗體陽性時，主要以均質型為主，其高達77.91%，顯著高于其他熒光模型（P＜0.001），即抗dsDNA抗體與均質熒光模型相關；抗RNP、抗SSa及抗Sm主要以顆粒型為主（P＜0.001），上述3種抗體與顆粒型相關，這與Tonuttia等[13]的觀點一致。抗Scl-70抗體陽性主要以均質型合并核仁型的熒光模型達30.53%（P＜0.001）；抗rib-P和Jo-1抗體以胞漿型為主，顯著高于其他熒光模型（P＜0.047）；單純抗SSb的熒光模型主要以可疑為主，另外也會出現均質、斑點或胞漿型，并未發現優勢熒光模型。在我們的研究中，其熒光模型出現某種或幾種復合熒光模型，從理論上講，單純一種抗體是針對同一種抗原的自身抗體，如：抗dsDNA靶抗原為雙螺旋DNA，抗SSa為相對分子質量為60×103及52×103的小核糖蛋白[14]，抗RNP和抗Sm均為U族小分子RNA與核糖核蛋白[15]，但兩者抗原位點不同，抗Scl-70為位于核仁及核漿中的拓撲異構酶Ⅰ，抗rib-P為位于細胞質內的核糖體大亞基上的磷酸蛋白，抗Jo-1為位于細胞質中的組氨酰-tRNA合成酶[16]，抗SSb為位于核內的RNA多聚轉錄酶中的小RNA磷酸蛋白，因此單純抗體模式應該具有固定的熒光模型，出現與理論不一致情況的原因可能是患者體內存在檢測目標抗體外其他自身抗體，其可能是本研究尚未檢測的抗組蛋白抗體或其他的特異性ANA譜類型等，也可能是本研究已檢測到，但由于檢測靈敏度太低無法顯示，而由于ANA檢測靈敏度較高而呈現相應的2個或以上熒光模型。
總之，在臨床實踐中，ANA熒光模型與ANA譜之間具有一定的規律，ANA檢測結果顆粒型、均質型、胞漿型及其復合型時，須進行特異性抗體檢測，而熒光模型為著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、肌動蛋白型、原肌球蛋白型、PCNA型、波形蛋白型熒光模型時8種特異性自身抗體常為陰性，沒必要申請進一步檢測，從而大大節約患者醫療成本及候診時間；而當特異性自身抗體譜出現陽性時，ANA熒光模型也有一定的規律，dsDNA主要對應均質型，抗RNP、抗SSa及抗Sm主要對應顆粒型，抗Scl-70主要對應顆粒型、均質型及核仁型的復合型，抗rib-P和抗Jo-1主要對應胞漿型，此為實驗室結果核對提供依據。
抗核抗體（ANA）是指針對包括核酸、核蛋白及細胞質成分抗體的總稱。目前ANA通常采用人喉表皮樣癌細胞（HEp-2）為底物的間接免疫熒光法（IIF法）進行檢測。ANA作為檢測針對真核細胞抗原成分的自身抗體的篩選性試驗，ANA陽性只能表明具有針對細胞抗原成分的抗體存在，但并不能依據熒光模型準確判斷特異性抗體的種類，因此，當ANA陽性時常需進一步檢測各亞類特異性的自身抗體，即ANA譜，以前常稱其為抗可提取的核抗原（ENA）抗體譜，而ANA譜的概念范圍遠大于ENA抗體譜的范圍，傳統的ENA抗體譜主要包括抗RNP、Sm、SSa、SSb、Scl-70、Jo-1和rib-P抗體7種，而由于抗原純化技術的進步，幾乎所有的細胞抗原均可純化，而無需采用鹽水提取純化抗原，因此ANA譜除上述7種抗體之外還包括抗dsDNA、抗組蛋白、抗核小體等自身抗體[1]。即ANA譜是檢測針對真核細胞各種特異性抗原所產生抗體的集合，其對于多種自身免疫性疾病診斷與鑒別診斷具有重要價值[2]，但鑒于ANA熒光模型對于特異性自身抗體ANA譜的結果關系不太明確，會造成臨床醫生申請不必要的檢測，實驗室工作人員核對ANA與ANA譜的結果關系，能及時發現錯誤檢測結果，有效防止醫療事故的發生。本研究通過回顧性分析2010年1月－2013年12月間7 385例中國人民解放軍第452醫院及四川大學華西醫院ANA熒光模型與ANA譜中8種特異性自身抗體之間的結果對應關系，為臨床醫生檢測項目申請及實驗室結果核對提供依據。
1 資料與方法
1.1 一般資料
7 385例ANA檢測結果為陽性或可疑的無重復病例標本均來自中國人民解放軍第452醫院和四川大學華西醫院，男:女=1:4.75，年齡1～93歲，平均42.5歲；男性患者發病年齡2～92歲，平均48.4歲；女性患者發病年齡1～93歲，平均41.2歲。
1.2 方法
1.2.1 ANA檢測方法
采用HEp-2細胞為抗原底物的IIF法檢測，將血清1:100稀釋，按試劑說明書操作，熒光顯微鏡下觀察特異性的熒光模型，具有一定熒光但無法辨別熒光模型時即判斷為可疑，陽性血清再按1:320、1:1 000、1:3 200、1:10 000繼續稀釋測得抗體最終滴度。熒光模型主要為：顆粒型、均質型、核仁型、著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、增殖細胞核抗原（PCNA）型等及不同熒光模型的復合型。試劑盒購自德國歐蒙公司。檢測顯微鏡為日本Nikon E6000型（日本尼康公司）。
1.2.2 抗dsDNA檢測方法
采用綠繩短膜蟲為底物的IIF法檢測，將血清1:10稀釋，按試劑說明書操作，綠繩短膜蟲動基體不發熒光為陰性，隱約可見為可疑，發出亮綠色特異性熒光為陽性，陽性血清再按1:32、1:100、1:320、1:1 000繼續稀釋測得抗體最終滴度。試劑盒購自德國歐蒙公司。檢測顯微鏡為日本Nikon E6000型（日本尼康公司）。
1.2.3 抗RNP、Sm、SSa、SSb、Scl-70、Jo-1和rib-P抗體7種抗體檢測
采用純化抗原的免疫條帶法。將血清1:100稀釋，按試劑說明書操作，顯色條帶通過EUROscan掃描軟件進行灰度分析，依灰度深淺自動判為－、±、+、++、+++ 5個級別，檢測試劑盒購自德國歐蒙公司，檢測描掃儀為EPSON 1600型（日本愛普生公司）。
1.3 統計學方法
采用SPSS 19.0統計軟件，兩樣本率的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 ANA與8種特異性自身抗體的結果關系
7 385例ANA為陽性或可疑病例進行8種特異性自身抗體（包括抗dsDNA、抗RNP、抗Sm、抗SSa、抗SSb、抗Scl-70、抗Jo-1和抗rib-P）的檢測。ANA結果除可疑外，陽性結果中以包括2種或多種熒光模型的復合型、顆粒型、均質型、胞漿型及核仁型等熒光模型為主，其他熒光模型出現頻率較小。顆粒型熒光模型常可出現抗RNP、抗Sm、抗SSa及抗SSb；而均質型主要以抗dsDNA及抗SSa為主；胞漿型主要以抗SSa及抗rib-P較高；核仁型以抗SSa抗體出現頻率較高。ANA熒光模型結果與臨床常規檢測的8種特異性自身抗體的結果關系見表 1。
表1
ANA與8種特異性自身抗體的結果關系[例（%）]
2.2 8種特異性自身抗體與ANA熒光模型的結果關系
7 385例ANA為陽性或可疑病例均進行8項特異性自身抗體的檢測，其中大部分患者會出現1種以上的特異性自身抗體，也可出現單純1種自身抗體陽性的情況，即其中1項抗體陽性，而另外其余7項抗體檢測結果均為陰性，為了排除其他抗體對分析結果的影響，本研究僅分析單純1種自身抗體與ANA熒光模型結果的關系（表 2）。理論上1種特異性自身抗體只對應1種熒光模型，但在實踐過程中，我們并未檢測除8種特異性自身抗體以外ANA譜，即可能出現1種抗體對應2種或以上熒光模型的情況，為了分析特異自身抗體與熒光模型的關系，我們將出現2種或以上熒光模型分別進行統計，由此出現熒光模型結果大于特異抗體總數的情況。
表2
單純特異性自身抗體檢測結果與ANA熒光模型結果關系[例（%）]
3 討論
ANA是診斷很多自身免疫性疾病最重要的檢查指標之一，以HEp-2細胞為底物的IIF法是ANA檢測的推薦方法[3]，但由于ANA包括自身抗體的種類較多，其診斷疾病特異性較差，須進一步檢測其具體抗體種類，以提高診斷自身免疫性疾病的特異性。本研究采用大樣本分析，探索ANA與其特異性自身抗體之間的關系，從本研究結果可以看出，ANA熒光模型除可疑結果外，主要以顆粒型、均質型、胞漿型及2種或以上熒光復合模型為主，與相關文獻報道一致[4]，但這些熒光模型對應目前臨床最常檢測的8種特異性自身抗體均可出現陽性，所有熒光模型均以抗SSa陽性為多，由此表明，抗SSa是出現頻率最高的一種特異性自身抗體[5]。但有些抗體檢出率明顯降低，如，顆粒型熒光模型主要會出現抗RNP、抗Sm、抗SSa及抗SSb，而抗dsDNA、抗Scl-70、抗Jo-1及抗rib-P出現頻率較低，但由于抗RNP抗體與混合性結締組織病有關[6]，抗Sm是診斷系統性紅斑狼瘡的指標之一[7]，抗SSa及抗SSb與診斷干燥綜合征相關[8]。因此，當ANA檢測為顆粒型時必須進一步檢測特異性抗體的種類，以對相關自身免疫性疾病作出診斷。均質型同樣也是ANA檢測中經常出現的熒光模型。表 1的結果顯示，當ANA檢測結果為均質型時抗dsDNA及抗SSa出現頻率較高，其他特異性抗體出現頻率較小，抗dsDNA與系統性紅斑狼瘡有關[9]，而抗SSa與干燥綜合征有關。而胞漿型熒光模型出現抗rib-P和抗SSa頻率較高，而抗rib-P與狼瘡腦病有關[10]，因此，臨床實踐中，雖不能通過熒光模型推測特異性自身抗體的準確類型，但也有一定的規律可循。即不同熒光模型主要表現為出現頻率較高的類型，對于出現頻率較低的特異性自身抗體，應加以注意，避免錯識結果的發生。另值得注意的是其他一些熒光模型如著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、肌動蛋白型、原肌球蛋白型、PCNA型、波形蛋白型熒光模型，對應的8種特異性自身抗體陽性率均較低，此外這些熒光模型針對的細胞亞結構抗原已很清楚，部分模型臨床意義明確，如著絲點型主要對硬皮病具有診斷價值[11-12]，因此ANA出現上述熒光模型時，為節約醫療成本，沒必要再申請8種特異性自身抗體檢測。
為了研究單純1種抗體與ANA熒光模型之間的關系，為排除其他自身抗體對熒光模型的影響，本研究在8種ANA譜檢測中，采用只有1種抗體陽性時，確定單純抗體與熒光模型之間的關系。在實踐過程中，患者血清可能存在8種特異性自身抗體以外ANA譜，即出現我們檢測1種抗體對應2種或以上熒光模型的情況，我們將出現2種或以上熒光模型分別進行統計，由此出現熒光模型結果大于特異抗體總數的情況。表 2結果顯示，當單純抗dsDNA抗體陽性時，主要以均質型為主，其高達77.91%，顯著高于其他熒光模型（P＜0.001），即抗dsDNA抗體與均質熒光模型相關；抗RNP、抗SSa及抗Sm主要以顆粒型為主（P＜0.001），上述3種抗體與顆粒型相關，這與Tonuttia等[13]的觀點一致。抗Scl-70抗體陽性主要以均質型合并核仁型的熒光模型達30.53%（P＜0.001）；抗rib-P和Jo-1抗體以胞漿型為主，顯著高于其他熒光模型（P＜0.047）；單純抗SSb的熒光模型主要以可疑為主，另外也會出現均質、斑點或胞漿型，并未發現優勢熒光模型。在我們的研究中，其熒光模型出現某種或幾種復合熒光模型，從理論上講，單純一種抗體是針對同一種抗原的自身抗體，如：抗dsDNA靶抗原為雙螺旋DNA，抗SSa為相對分子質量為60×103及52×103的小核糖蛋白[14]，抗RNP和抗Sm均為U族小分子RNA與核糖核蛋白[15]，但兩者抗原位點不同，抗Scl-70為位于核仁及核漿中的拓撲異構酶Ⅰ，抗rib-P為位于細胞質內的核糖體大亞基上的磷酸蛋白，抗Jo-1為位于細胞質中的組氨酰-tRNA合成酶[16]，抗SSb為位于核內的RNA多聚轉錄酶中的小RNA磷酸蛋白，因此單純抗體模式應該具有固定的熒光模型，出現與理論不一致情況的原因可能是患者體內存在檢測目標抗體外其他自身抗體，其可能是本研究尚未檢測的抗組蛋白抗體或其他的特異性ANA譜類型等，也可能是本研究已檢測到，但由于檢測靈敏度太低無法顯示，而由于ANA檢測靈敏度較高而呈現相應的2個或以上熒光模型。
總之，在臨床實踐中，ANA熒光模型與ANA譜之間具有一定的規律，ANA檢測結果顆粒型、均質型、胞漿型及其復合型時，須進行特異性抗體檢測，而熒光模型為著絲點型、高爾基體型、核點型、周邊型、肌動蛋白型、原肌球蛋白型、PCNA型、波形蛋白型熒光模型時8種特異性自身抗體常為陰性，沒必要申請進一步檢測，從而大大節約患者醫療成本及候診時間；而當特異性自身抗體譜出現陽性時，ANA熒光模型也有一定的規律，dsDNA主要對應均質型，抗RNP、抗SSa及抗Sm主要對應顆粒型，抗Scl-70主要對應顆粒型、均質型及核仁型的復合型，抗rib-P和抗Jo-1主要對應胞漿型，此為實驗室結果核對提供依據。
