利用小干擾RNA技術在人臍靜脈內皮細胞HUVEC中沉默copper chaperone for SOD1基因的研究_《華西醫學》

作者：

四川大學華西醫院（成都，610041） 1移植外科，2再生醫學研究中心;

關鍵詞：

copper chaperone for SOD1 基因沉默小干擾RNA

DOI：

10.7507/1002-0179.20130227

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目的　采用RNA干擾技術沉默CCS（copper chaperone for SOD1）基因，構建相關小干擾RNA（siRNA），探索出針對CCS的高效siRNA序列。方法　合成用于人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）細胞中沉默CCS基因的siRNA。應用脂質體轉染的方法在HUVEC細胞中對CCS基因進行RNA沉默。蛋白免疫印跡Western blotting檢測沉默前后CCS蛋白表達變化的情況，甲基四唑藍法MTT檢測轉染前后細胞活力。最后用單因素方差分析對數據進行統計學分析，以確定有效的siRNA序列。結果　轉染前后細胞形態無肉眼可見變化，轉染后細胞活力分別為98.5%和98.8%。CCS蛋白沉默率分別為63.7%和61.4%。結論　采用siCCS-2和siCCS-3序列轉染條件對HUVEC細胞活力損傷小，CCS沉默效率高，實驗條件穩定，重復性好。為我們繼續研究沉默CCS后抑制血管內皮細胞的生長增殖、血管形成提供了穩定的實驗基礎。

引用本文： 劉俊,陳克霏. 利用小干擾RNA技術在人臍靜脈內皮細胞HUVEC中沉默copper chaperone for SOD1基因的研究. 華西醫學, 2013, 28(5): 732-736. doi: 10.7507/1002-0179.20130227 復制

1.	Yoshiaki F, Andrew ST, Thomas V. Oxygen-induced maturation of SOD1: a key role for disulfide formation by the copper chaperone CCS[J]. EMBO J, 2004, 6 (23): 2872-2881.
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