目前, 所有的常規抗生素都出現了相應的抗藥性致病菌株, 病原菌的抗藥性問題已經日益嚴重地威脅著人們的健康。開發全新類型的抗生素是解決抗藥性問題的一條有效途徑。抗菌肽具有廣譜抗菌性、抗菌活性高、種類多等優點, 成為傳統抗生素的理想替代藥物。抗菌肽的來源非常廣泛, 如植物、動物、微生物等; 不同抗菌肽的作用機制及其研究方法也有顯著的差異。本文就抗菌肽的制備、抗菌機制和研究抗菌機制的方法做一概述。
引用本文： 李燕, 王嘉榕, 孫紅賓. 抗菌肽的制備和抗菌機制研究進展. 生物醫學工程學雜志, 2015, 32(2): 465-469. doi: 10.7507/1001-5515.20150084 復制
引言
目前，抗生素濫用導致病原菌產生耐藥性是困擾許多國家的一個難題，尋找新型抗生素替代品迫在眉睫。抗菌肽因其優良的抗菌特性減少了傳染病的發病率，成為抗生素的理想替代品[1]。抗菌肽是一類具有抗菌作用的小分子多肽，一般由12~50個氨基酸組成。目前已從自然界發現了兩千多種抗菌肽。抗菌肽具有廣譜抗菌性，可殺死革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌等。根據抗菌肽的氨基酸組成和結構特征可分為四類：α-螺旋結構的抗菌肽(amphipathicα-helical peptide)、β-折疊型的抗菌肽(β-sheet peptide stabilized)、具有環鏈結構的抗菌肽(peptide with loop structures)和伸展性螺旋結構的抗菌肽。
抗菌肽是宿主免疫的重要組成部分，是抵御細菌感染的第一道防線，它一般是殺菌而不是抑菌，而抗生素一般是抑菌而不是殺菌[2]。目前有些抗菌肽用來治療革蘭氏陽性菌引起的感染已經進入臨床二期實驗[3]，相比于傳統抗生素，細菌對抗菌肽不易產生抗性。抗菌肽作為抗菌藥物具有無毒副作用、無殘留、無污染等優點[4]，目前關于抗菌肽的制備和抗菌機理研究已廣泛展開。
1 抗菌肽的制備
獲得抗菌肽的方法有四種[5]：從生物體內提取內源性抗菌肽；采用化學合成法合成已知序列的抗菌肽；通過基因工程的辦法獲得抗菌肽；酶解法獲得抗菌肽。
1.1 天然抗菌肽
抗菌肽存在于天然生物中，但在天然生物組織中的含量很低，難以提取足夠的天然肽進行結構鑒定、生物學分析和臨床研究是獲得天然抗菌肽的一大障礙[5]。依據從天然生物中提取抗菌肽的工序：浸提、吸附、洗脫、鹽析、凝膠過濾、離子交換層析和反相層析，每一步純化，樣品都會至少損失10%，因此從天然生物組織中提取抗菌肽存在得率低，成本高的缺點，利用這種方法進行大規模生產受到限制。同時，在提取抗菌肽的過程中，需要利用大量的強酸、強堿和有機試劑，會對環境造成污染。雖然目前研究人員相繼從細菌、真菌、植物、昆蟲、兩棲動物和人體中發現并分離了2 000多種抗菌肽，但想滿足行業和消費者需要，還需進一步發現抗菌肽含量豐富的天然生物組織來源和改進分離純化方法。
1.2 化學合成法
化學合成抗菌肽，需要已知抗菌肽序列，通過人工的方式把氨基酸殘基連接起來，從而進行抗菌效果的研究，研究人員往往通過對抗菌肽的某些氨基酸進行刪減替換或者片段的拼接修改來獲得高殺菌效果的抗菌肽[6]。但是由于化學合成抗菌肽對合成肽的長度有限制，而且也涉及到大量有機溶劑的使用，所以利用化學合成法合成抗菌肽進行產業化非常困難。
1.3 基因工程法
基因工程法獲得抗菌肽是從生物的基因組中分離出抗菌肽的目的基因，通過對這段基因的克隆，把它連接到特定的載體上，然后轉化到受體細胞中，通過細胞表達從而獲得目的抗菌肽。Xie等[7]通過基因工程法獲得了抗菌肽OG2。Yang等[8]將抗菌肽cecropin AD(cecropin AD, CAD)與陽離子類彈性蛋白(cationic elastin-like polypeptides, CELP)融合表達，獲得了抗菌肽CAD。基因工程法可以獲得大量的抗菌肽且成本低，但是基因工程法獲得的抗菌肽的二三級結構可能和天然抗菌肽不太一致，其抑菌活力和天然抗菌肽存在差異。而且有些抗菌肽會導致受體細胞的自殺行為，所以在實際操作中也存在一定的難題。
1.4 酶解法
酶解法是通過食品級酶對某些利用率或生物效價不高的農副產品的蛋白質進行水解獲得抗菌肽。利用蛋白水解法獲得抗菌肽，不僅水解條件易于控制，而且環保，大量研究表明，采用酶解技術水解農副產品和水產品等廢棄物獲得抗菌肽是大批量生產抗菌肽最有前途的方法。而且這種方法在制備抗菌肽中得到了廣泛應用。但是蛋白水解法也存在一定的局限性，如蛋白酶本身的水解效率，蛋白酶解過程中的副產物等都會使得純化得到目的抗菌肽的分離效率降低。袁永俊等[9]利用胃蛋白酶水解酪蛋白制備酪蛋白源抗菌肽。
綜上所述，不管是從天然生物組織中提取抗菌肽，還是通過生物或化學的方法制備抗菌肽，都存在不足(見表 1)，限制了抗菌肽行業的發展，因此，綠色、高效、高通量的抗菌肽制備方法的發現和建立，是抗菌肽生產規模擴大，成本降低的關鍵。
表1
抗菌肽制備方法的優缺點
Table1.
Overview of advantages and disadvantages of antimicrobial peptides preparation approaches
2 抗菌肽的抗菌機制
迄今為止，在抗菌機制模型中，有些模型提出抗菌肽插入膜提高了雙層膜的通透性[10]，隨后有些機制側重在生物膜磷脂分子的固有特征和動態性質，特別是抗菌肽的插入導致膜缺損，使得抗菌肽可以和內部的分子作用[11-13]。不同抗菌肽的分子作用機制不同，還沒有涵蓋所有抗菌肽作用機理的理論。目前存在的作用機理有以下幾種[14]：破環細胞膜，抑制細胞呼吸，抑制細胞壁形成等(見表 2)，理解抗菌肽的分子作用機制對開發新的藥物非常重要[15]。
表2
天然來源抗菌肽的作用機制
Table2.
Mechanisms of antimicrobial peptides derived from native organisms
2.1 破壞細胞膜
目前發現，破壞細胞膜的抗菌肽作用機制有桶-板、地毯、環形孔三種模型[16]。三種模型都是使膜形成孔洞，從而殺死細胞，都存在抗菌肽與膜通過靜電和疏水作用結合的過程。
Cho等[17]闡明抗菌肽Alamethicin聚集插入細胞膜中，形成桶-板孔洞，殺死細菌；Magainin具有雙親結構，通過環形孔模型機制作用于細胞膜[18]；Dermaseptin S像地毯一樣聚集在細胞膜表面，從而引起細胞膜損傷，殺死細胞[19]。
2.2 抑制細胞呼吸
有些抗菌肽不是通過改變細胞膜通透性來抑殺細菌，而是通過作用于線粒體達到殺菌目的。Bobek等[20]將人唾液抗菌肽MUC7與臨床常見的細菌及真菌作用，檢測到線粒體腫脹、破裂，有內容物溢出。
Hwang等[21]發現抗菌肽Psacotheasin能夠誘導線粒體膜孔洞形成從而使得線粒體內部的凋亡分子釋放到細胞質內。
2.3 抑制細胞壁的形成
從麻蠅體內獲得的麻蠅毒素Ⅱ，分子量30 kd，比一般的抗菌肽都大，對少數革蘭氏陽性菌有殺菌作用，對它作用機制的研究表明，它能抑制革蘭氏陽性菌細胞壁的形成，從而使細菌不能正常生長而死亡。人的抗菌肽β-defensin-3，能夠通過抑制細菌形成細胞壁，引起細菌細胞形態異常，生長受限，從而促使細胞死亡[22]。
2.4 作用非膜性的外部靶點
研究表明，表皮葡萄球菌S.epidermidis 5產生的Pep和乳酸鏈球菌Streptococcus lactis產生的nisin可以激活細胞壁中的自溶素。attacin通過干擾大腸桿菌細胞外膜蛋白的轉錄從而導致細胞膜的通透性增加，抑制細菌的生長[23]。
2.5 作用胞內生物大分子
有些抗菌肽通過作用于胞內的核酸或蛋白從而影響胞內蛋白的結構和功能，最終殺死細菌[17]。而有些抗菌肽可以作用于細菌內的內共生體，通過抑制細胞分裂調節他們的生長[24]。
3 研究方法
目前已有很多實驗方法用來研究抗菌肽對細菌的作用。大部分研究抗菌肽作用機理的體外實驗重點放在這些抗菌肽和膜體系的作用。
示差掃描量熱法(differential scanning calorimetry, DSC)是直接測定抗菌肽和膜作用的一種方法。把抗菌肽和膜兩種組分溶解到一種有機溶劑中，待有機溶劑蒸發，留下抗菌肽和磷脂的一層膜，膜用溶液溶掉形成液體的抗菌肽和膜的懸濁液。肽脂懸濁液的類型決定于膜的種類，這種技術一般都是形成多層囊泡，于是DSC可以用來確定抗菌肽更傾向于與哪種磷脂結合，而且還可以確定抗菌肽在片層到非片層轉換的相變溫度。這直接關聯到抗菌肽對膜穩定性和非穩定性的影響[25]。DSC在磷脂相變焓變化大的體系中起作用。當抗菌肽并沒有誘導非層狀相變的情況下，焓的變化非常小，DSC雖然靈敏度非常高，但還是檢測不到焓的變化。在這種情況下，核磁共振光譜和X射線衍射常用來檢測抗菌肽引起的拓撲結構變化。
由于抗菌肽非常小，可以用核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)光譜來確定它們在表面活性劑膠團中的液體結構[26]。最近研究發展了NMR實驗用來測定抗菌肽在磷脂雙分子層中的特征[27]。例如以31P NMR實驗來研究抗菌肽和膜的相互作用，31P實驗直接用來檢測磷脂分子中磷原子在結合抗菌肽的變化。純磷脂的31P NMR光譜是一個各向異性的信號，當抗菌肽加入后會引起磷脂狀態的變化，從而出現另外的一個31P NMR光譜信號。新信號的產生可能是形成了小的單分子囊泡或膠團，或者產生一種新的立體脂質體。通過測定31P NMR光譜信號表明抗菌肽P5促進了微孔膜頭部的無序化[28]。
X-衍射是研究磷脂雙分子層形態變化的另一種技術。當抗菌肽作用于立體脂質體時會引起空間結構的變化，X-射線衍射方法可用來研究立體脂質相的三維結構變化，以其研究抗菌肽作用生物膜立體結構的細節，是一強大的工具[29]。
流式細胞儀(fluorescence-activated cell sorting, FACS)分析法是基于正常細菌的胞膜完整，對熒光分子(propidium iodide, PI)不通透，因此只有細菌死亡或凋亡，生物膜的完整性被破壞后，PI才可以和細胞內的核酸結合的原理，通過流式細胞儀計算死亡細菌的比例[30]。抗菌肽可以使細胞膜損壞，影響膜的結構和功能的完整性[31]，因此基于細胞形態學和膜的功能改變可以通過流式細胞技術測定[30], Philips等利用流式細胞技術把酵母染色，發現經抗菌肽處理后，與未經抗菌肽處理的細胞相比熒光強度增加。意味著一些抗菌肽除了對膜有作用外，還可以誘導酵母的程序性凋亡。
熒光泄漏實驗是選取不同的磷脂分別代表細菌細胞和動物細胞來構建脂質體，脂質體中包裹著熒光分子，如果抗菌肽可以在膜上打孔，熒光分子就會泄漏出來，通過熒光分析儀測熒光強度，就可以推斷抗菌肽與膜的相互作用。Evan等[32]發現抗菌肽LFchimera可以引起熒光分子的泄漏，推斷它可以在膜上打孔，擾亂細胞膜。
透射電鏡實驗是用透射電鏡觀察抗菌肽處理和未處理的細菌的細胞膜形態，如果抗菌肽與膜有作用，會導致細胞膜不完整，細胞質內容物有泄漏，如果無作用，就觀察不到這樣的結果。郝剛等[33]利用透射電鏡觀測到抗菌肽BF2-B能使胞質內容物輕微泄漏，對膜的擾動較大。
4 展望
由于多耐藥病原菌的出現，發展治療傳染病新藥就成為必要。抗菌肽非常有希望替代傳統抗生素。闡明它們的來源和分子作用機制對其在臨床的應用尤為重要。在過去很多年，雖然對抗菌肽的獲得和分子機制進行了廣泛研究，表 2也總結了前人關于抗菌肽作用機理的研究結果，但是獲得有活性的抗菌肽且了解具體的分子機理還是困難重重。要實現抗菌肽的商品化應用，還需要進行大量的基礎性工作。
引言
目前，抗生素濫用導致病原菌產生耐藥性是困擾許多國家的一個難題，尋找新型抗生素替代品迫在眉睫。抗菌肽因其優良的抗菌特性減少了傳染病的發病率，成為抗生素的理想替代品[1]。抗菌肽是一類具有抗菌作用的小分子多肽，一般由12~50個氨基酸組成。目前已從自然界發現了兩千多種抗菌肽。抗菌肽具有廣譜抗菌性，可殺死革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌等。根據抗菌肽的氨基酸組成和結構特征可分為四類：α-螺旋結構的抗菌肽(amphipathicα-helical peptide)、β-折疊型的抗菌肽(β-sheet peptide stabilized)、具有環鏈結構的抗菌肽(peptide with loop structures)和伸展性螺旋結構的抗菌肽。
抗菌肽是宿主免疫的重要組成部分，是抵御細菌感染的第一道防線，它一般是殺菌而不是抑菌，而抗生素一般是抑菌而不是殺菌[2]。目前有些抗菌肽用來治療革蘭氏陽性菌引起的感染已經進入臨床二期實驗[3]，相比于傳統抗生素，細菌對抗菌肽不易產生抗性。抗菌肽作為抗菌藥物具有無毒副作用、無殘留、無污染等優點[4]，目前關于抗菌肽的制備和抗菌機理研究已廣泛展開。
1 抗菌肽的制備
獲得抗菌肽的方法有四種[5]：從生物體內提取內源性抗菌肽；采用化學合成法合成已知序列的抗菌肽；通過基因工程的辦法獲得抗菌肽；酶解法獲得抗菌肽。
1.1 天然抗菌肽
抗菌肽存在于天然生物中，但在天然生物組織中的含量很低，難以提取足夠的天然肽進行結構鑒定、生物學分析和臨床研究是獲得天然抗菌肽的一大障礙[5]。依據從天然生物中提取抗菌肽的工序：浸提、吸附、洗脫、鹽析、凝膠過濾、離子交換層析和反相層析，每一步純化，樣品都會至少損失10%，因此從天然生物組織中提取抗菌肽存在得率低，成本高的缺點，利用這種方法進行大規模生產受到限制。同時，在提取抗菌肽的過程中，需要利用大量的強酸、強堿和有機試劑，會對環境造成污染。雖然目前研究人員相繼從細菌、真菌、植物、昆蟲、兩棲動物和人體中發現并分離了2 000多種抗菌肽，但想滿足行業和消費者需要，還需進一步發現抗菌肽含量豐富的天然生物組織來源和改進分離純化方法。
1.2 化學合成法
化學合成抗菌肽，需要已知抗菌肽序列，通過人工的方式把氨基酸殘基連接起來，從而進行抗菌效果的研究，研究人員往往通過對抗菌肽的某些氨基酸進行刪減替換或者片段的拼接修改來獲得高殺菌效果的抗菌肽[6]。但是由于化學合成抗菌肽對合成肽的長度有限制，而且也涉及到大量有機溶劑的使用，所以利用化學合成法合成抗菌肽進行產業化非常困難。
1.3 基因工程法
基因工程法獲得抗菌肽是從生物的基因組中分離出抗菌肽的目的基因，通過對這段基因的克隆，把它連接到特定的載體上，然后轉化到受體細胞中，通過細胞表達從而獲得目的抗菌肽。Xie等[7]通過基因工程法獲得了抗菌肽OG2。Yang等[8]將抗菌肽cecropin AD(cecropin AD, CAD)與陽離子類彈性蛋白(cationic elastin-like polypeptides, CELP)融合表達，獲得了抗菌肽CAD。基因工程法可以獲得大量的抗菌肽且成本低，但是基因工程法獲得的抗菌肽的二三級結構可能和天然抗菌肽不太一致，其抑菌活力和天然抗菌肽存在差異。而且有些抗菌肽會導致受體細胞的自殺行為，所以在實際操作中也存在一定的難題。
1.4 酶解法
酶解法是通過食品級酶對某些利用率或生物效價不高的農副產品的蛋白質進行水解獲得抗菌肽。利用蛋白水解法獲得抗菌肽，不僅水解條件易于控制，而且環保，大量研究表明，采用酶解技術水解農副產品和水產品等廢棄物獲得抗菌肽是大批量生產抗菌肽最有前途的方法。而且這種方法在制備抗菌肽中得到了廣泛應用。但是蛋白水解法也存在一定的局限性，如蛋白酶本身的水解效率，蛋白酶解過程中的副產物等都會使得純化得到目的抗菌肽的分離效率降低。袁永俊等[9]利用胃蛋白酶水解酪蛋白制備酪蛋白源抗菌肽。
綜上所述，不管是從天然生物組織中提取抗菌肽，還是通過生物或化學的方法制備抗菌肽，都存在不足(見表 1)，限制了抗菌肽行業的發展，因此，綠色、高效、高通量的抗菌肽制備方法的發現和建立，是抗菌肽生產規模擴大，成本降低的關鍵。
表1
抗菌肽制備方法的優缺點
Table1.
Overview of advantages and disadvantages of antimicrobial peptides preparation approaches
2 抗菌肽的抗菌機制
迄今為止，在抗菌機制模型中，有些模型提出抗菌肽插入膜提高了雙層膜的通透性[10]，隨后有些機制側重在生物膜磷脂分子的固有特征和動態性質，特別是抗菌肽的插入導致膜缺損，使得抗菌肽可以和內部的分子作用[11-13]。不同抗菌肽的分子作用機制不同，還沒有涵蓋所有抗菌肽作用機理的理論。目前存在的作用機理有以下幾種[14]：破環細胞膜，抑制細胞呼吸，抑制細胞壁形成等(見表 2)，理解抗菌肽的分子作用機制對開發新的藥物非常重要[15]。
表2
天然來源抗菌肽的作用機制
Table2.
Mechanisms of antimicrobial peptides derived from native organisms
2.1 破壞細胞膜
目前發現，破壞細胞膜的抗菌肽作用機制有桶-板、地毯、環形孔三種模型[16]。三種模型都是使膜形成孔洞，從而殺死細胞，都存在抗菌肽與膜通過靜電和疏水作用結合的過程。
Cho等[17]闡明抗菌肽Alamethicin聚集插入細胞膜中，形成桶-板孔洞，殺死細菌；Magainin具有雙親結構，通過環形孔模型機制作用于細胞膜[18]；Dermaseptin S像地毯一樣聚集在細胞膜表面，從而引起細胞膜損傷，殺死細胞[19]。
2.2 抑制細胞呼吸
有些抗菌肽不是通過改變細胞膜通透性來抑殺細菌，而是通過作用于線粒體達到殺菌目的。Bobek等[20]將人唾液抗菌肽MUC7與臨床常見的細菌及真菌作用，檢測到線粒體腫脹、破裂，有內容物溢出。
Hwang等[21]發現抗菌肽Psacotheasin能夠誘導線粒體膜孔洞形成從而使得線粒體內部的凋亡分子釋放到細胞質內。
2.3 抑制細胞壁的形成
從麻蠅體內獲得的麻蠅毒素Ⅱ，分子量30 kd，比一般的抗菌肽都大，對少數革蘭氏陽性菌有殺菌作用，對它作用機制的研究表明，它能抑制革蘭氏陽性菌細胞壁的形成，從而使細菌不能正常生長而死亡。人的抗菌肽β-defensin-3，能夠通過抑制細菌形成細胞壁，引起細菌細胞形態異常，生長受限，從而促使細胞死亡[22]。
2.4 作用非膜性的外部靶點
研究表明，表皮葡萄球菌S.epidermidis 5產生的Pep和乳酸鏈球菌Streptococcus lactis產生的nisin可以激活細胞壁中的自溶素。attacin通過干擾大腸桿菌細胞外膜蛋白的轉錄從而導致細胞膜的通透性增加，抑制細菌的生長[23]。
2.5 作用胞內生物大分子
有些抗菌肽通過作用于胞內的核酸或蛋白從而影響胞內蛋白的結構和功能，最終殺死細菌[17]。而有些抗菌肽可以作用于細菌內的內共生體，通過抑制細胞分裂調節他們的生長[24]。
3 研究方法
目前已有很多實驗方法用來研究抗菌肽對細菌的作用。大部分研究抗菌肽作用機理的體外實驗重點放在這些抗菌肽和膜體系的作用。
示差掃描量熱法(differential scanning calorimetry, DSC)是直接測定抗菌肽和膜作用的一種方法。把抗菌肽和膜兩種組分溶解到一種有機溶劑中，待有機溶劑蒸發，留下抗菌肽和磷脂的一層膜，膜用溶液溶掉形成液體的抗菌肽和膜的懸濁液。肽脂懸濁液的類型決定于膜的種類，這種技術一般都是形成多層囊泡，于是DSC可以用來確定抗菌肽更傾向于與哪種磷脂結合，而且還可以確定抗菌肽在片層到非片層轉換的相變溫度。這直接關聯到抗菌肽對膜穩定性和非穩定性的影響[25]。DSC在磷脂相變焓變化大的體系中起作用。當抗菌肽并沒有誘導非層狀相變的情況下，焓的變化非常小，DSC雖然靈敏度非常高，但還是檢測不到焓的變化。在這種情況下，核磁共振光譜和X射線衍射常用來檢測抗菌肽引起的拓撲結構變化。
由于抗菌肽非常小，可以用核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)光譜來確定它們在表面活性劑膠團中的液體結構[26]。最近研究發展了NMR實驗用來測定抗菌肽在磷脂雙分子層中的特征[27]。例如以31P NMR實驗來研究抗菌肽和膜的相互作用，31P實驗直接用來檢測磷脂分子中磷原子在結合抗菌肽的變化。純磷脂的31P NMR光譜是一個各向異性的信號，當抗菌肽加入后會引起磷脂狀態的變化，從而出現另外的一個31P NMR光譜信號。新信號的產生可能是形成了小的單分子囊泡或膠團，或者產生一種新的立體脂質體。通過測定31P NMR光譜信號表明抗菌肽P5促進了微孔膜頭部的無序化[28]。
X-衍射是研究磷脂雙分子層形態變化的另一種技術。當抗菌肽作用于立體脂質體時會引起空間結構的變化，X-射線衍射方法可用來研究立體脂質相的三維結構變化，以其研究抗菌肽作用生物膜立體結構的細節，是一強大的工具[29]。
流式細胞儀(fluorescence-activated cell sorting, FACS)分析法是基于正常細菌的胞膜完整，對熒光分子(propidium iodide, PI)不通透，因此只有細菌死亡或凋亡，生物膜的完整性被破壞后，PI才可以和細胞內的核酸結合的原理，通過流式細胞儀計算死亡細菌的比例[30]。抗菌肽可以使細胞膜損壞，影響膜的結構和功能的完整性[31]，因此基于細胞形態學和膜的功能改變可以通過流式細胞技術測定[30], Philips等利用流式細胞技術把酵母染色，發現經抗菌肽處理后，與未經抗菌肽處理的細胞相比熒光強度增加。意味著一些抗菌肽除了對膜有作用外，還可以誘導酵母的程序性凋亡。
熒光泄漏實驗是選取不同的磷脂分別代表細菌細胞和動物細胞來構建脂質體，脂質體中包裹著熒光分子，如果抗菌肽可以在膜上打孔，熒光分子就會泄漏出來，通過熒光分析儀測熒光強度，就可以推斷抗菌肽與膜的相互作用。Evan等[32]發現抗菌肽LFchimera可以引起熒光分子的泄漏，推斷它可以在膜上打孔，擾亂細胞膜。
透射電鏡實驗是用透射電鏡觀察抗菌肽處理和未處理的細菌的細胞膜形態，如果抗菌肽與膜有作用，會導致細胞膜不完整，細胞質內容物有泄漏，如果無作用，就觀察不到這樣的結果。郝剛等[33]利用透射電鏡觀測到抗菌肽BF2-B能使胞質內容物輕微泄漏，對膜的擾動較大。
4 展望
由于多耐藥病原菌的出現，發展治療傳染病新藥就成為必要。抗菌肽非常有希望替代傳統抗生素。闡明它們的來源和分子作用機制對其在臨床的應用尤為重要。在過去很多年，雖然對抗菌肽的獲得和分子機制進行了廣泛研究，表 2也總結了前人關于抗菌肽作用機理的研究結果，但是獲得有活性的抗菌肽且了解具體的分子機理還是困難重重。要實現抗菌肽的商品化應用，還需要進行大量的基礎性工作。
