目的 探討Fe 3+ 改性羧甲基纖維素（Fe 3+ -CMC）對開腹手術后腹膜粘連的預防作用及其對術后腹膜損傷局部腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及成纖維細胞生長因子（FGF）表達的抑制作用。方法 健康Wistar大鼠40只，隨機均分為對照組及實驗組2組，制作腹腔粘連模型后腹腔內創面分別均勻噴灑0.9% 生理鹽水及3% Fe 3+ -CMC各3 ml，術后第14 d處死實驗動物，觀察各組腹腔粘連情況。另取Wistar大鼠120只隨機均分為對照組及實驗組2組，制作模型及給藥同前，于術后1、3、5、7、14及60 d時各組隨機取實驗動物10只，麻醉后處死，剖腹探查，取損傷局部及與之鄰接的粘連組織，應用免疫組織化學染色觀察TNF-α及FGF的表達情況。結果 實驗組的粘連程度分級及粘連發生率均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（ P ＜ 0.01）。實驗組腹膜損傷局部TNF-α及FGF的表達低于對照組，且TNF-α以術后3～7 d最為明顯，FGF以術后5～7 d最為明顯（ P ＜ 0.05）。結論 Fe 3+ -CMC能夠明顯減輕開腹手術后腹膜粘連的程度，明顯抑制術后腹膜損傷部位TNF-α及FGF的表達。
目的 探討成纖維細胞激活蛋白( FAP) 在實驗性小鼠肺纖維化組織中的表達, 及其與α平滑肌肌動蛋白( α-SMA) 、轉化生長因子β1 ( TGF-β1 ) 之間的相互關系。方法 氣管內滴入博萊霉素( 7 mg/kg) 制備肺纖維化模型, 采用免疫組化技術檢測小鼠肺纖維化組織中FAP、α-SMA 和TGF-β1的表達。結果 正常肺組織無FAP表達; 纖維化組FAP 表達于細支氣管和大血管周圍的成纖維細胞, 成纖維細胞灶中FAP、α-SMA 和TGF-β1 表達部位相似, 但FAP 比α-SMA 的表達更廣泛, 比TGF-β1 的表達更強。FAP、α-SMA 和TGF-β1 與小鼠肺纖維化程度均呈正相關( r 值分別為0. 795、0. 766 和0. 628, P lt;0. 01) , 且FAP與TGF-β1 的表達呈正相關( r =0. 706, P lt; 0. 01) 。結論 FAP 特異性表達在小鼠肺纖維化組織的成纖維細胞灶中, 與肺纖維化程度有關。FAP 與TGF-β1 可能在肺纖維化形成中起協同作用。
目的 研究CSD 肽( CSD-p) 對轉化生長因子β1 ( TGF-β1 ) 刺激下人胚肺成纖維細胞的細胞外基質及Smad 信號表達的影響。方法 體外培養人胚肺成纖維細胞, 分為4 組: 對照組( 無TGF-β1 處理) 、TGF-β1 處理組、CSD-p 處理組、TGF-β1 及CSD-p 聯合處理組。RT-PCR 測定各組窖蛋白1mRNA 的表達; Western blot 檢測各組窖蛋白1、α平滑肌肌動蛋白( α-SMA) 、膠原Ⅰ、p-Smad2、p-Smad3及Smad7 蛋白的表達。結果 TGF-β1 刺激人胚肺成纖維細胞后, 窖蛋白1 的mRNA 和蛋白表達較對照組明顯降低( mRNA: 0. 404 ±0. 027 比1. 540 ±0. 262; 蛋白: 0. 278 ±0. 054 比1. 279 ±0. 085;P lt;0. 01) 。經TGF-β1 刺激, 人胚肺成纖維細胞的膠原Ⅰ ( 1. 127 ±0. 078 比0. 234 ±0. 048) 、α-SMA( 1. 028 ±0. 058 比0. 295 ±0. 024) , p-Smad2( 1. 162 ±0. 049 比0. 277 ±0. 014) 、p-Smad3( 1. 135 ±0. 057比0. 261 ±0. 046) 蛋白表達增加( P lt;0. 01) ; Smad7 表達較對照組明顯降低( 0. 379 ±0. 004 比1. 249 ±0. 046, P lt;0. 001) 。與TGF-β1 處理組比較, CSD 肽明顯抑制TGF-β1 誘導的膠原Ⅰ( 0. 384 ±0. 040) 、α-SMA( 0. 471 ±0. 071) 、p-Smad2( 0. 618 ±0. 096) 、p-Smad3 ( 0. 461 ±0. 057) 蛋白表達; 上調Smad7 的蛋白表達( 0. 924 ±0. 065 比0. 379 ±0. 004) 。結論 CSD 肽下調TGF-β1 刺激下人胚肺成纖維細胞的膠原Ⅰ及α-SMA 蛋白的表達, 可能通過抑制TGF-β1 /Smads 信號通路激活, 提示使用CSD 肽增加窖蛋白1 功能可能對肺纖維化具有一定的干預作用。
目的 研究骨髓間充質干細胞( BMMSC) 對非特異性間質性肺炎( NSIP) 患者異常肺成纖維細胞的影響, 探討BMMSC 在間質性肺纖維化的治療機制。方法 體外原代培養人BMMSC、NSIP 患者的肺成纖維細胞, 以及正常的肺成纖維細胞。BMMSC 和正常肺成纖維細胞分別與NSIP肺成纖維細胞以Transwell 孔共培養, 24 h后留取上清, 采用ELISA 法檢測上清中轉化生長因子β1 ( TGF-β1 ) 和干擾素誘導蛋白10( IP-10) 等細胞因子水平, 液相芯片技術檢測上清中IL-6、IL-8、單核細胞趨化蛋白1( MCP-1) 等炎性因子水平。Transwell 孔共培養48 h后提取肺成纖維細胞蛋白, Western blot 檢測肺成纖維細胞分泌的α平滑肌肌動蛋白( α-SMA) 的表達水平。結果 NSIP 肺成纖維細胞與正常肺成纖維細胞相比, 能夠高分泌炎性因子IL-6、IL-8 和趨化因子MCP-1, 高表達α-SMA。 BMMSC 與NSIP 肺成纖維細胞以Transwell 孔共培養24 h后, TGF-β1及IP-10高表達, 顯著下調NSIP 肺成纖維細胞高水平分泌的IL-6、IL-8 和MCP-1炎性因子水平, 并明顯下調NSIP 肺成纖維細胞α-SMA的高表達。結論 間充質干細胞能夠下調NSIP肺成纖維細胞高水平分泌的多種炎性細胞因子, 抑制NSIP肺成纖維細胞α-SMA 的高表達。
目的 構建含有人腦源性神經營養因子（human brain-derived neurotrophic factor，hBDNF）的逆轉錄病毒載體pLXSN（hBDNF-pLXSN），鑒定hBDNF 生物活性。 方法 提取自愿捐獻5 月齡胎兒腦組織基因組mRNA，應用RT-PCR 技術獲得hBDNF 基因序列，體外構建hBDNF-pLXSN 感染的成纖維細胞NIH/3T3。對其進行病毒滴度檢測，采用免疫組織化學染色鑒定NIH/3T3 細胞中hBDNF 的表達。通過對PC12 細胞和大鼠背根神經節的培養，分析hBDNF 生物學活性。 結果 測序結果表明成功構建了hBDNF-pLXSN。被感染的NIH/3T3 細胞免疫組織化學染色顯示胞漿中有hBDNF 表達。hBDNF-pLXSN 具有促進PC12 細胞增殖的作用，并可以使培養的背根神經節長出神經突。 結論 hBDNF-pLXSN 病毒可以感染NIH/3T3 細胞并使其表達和分泌具有生物學活性的hBDNF，可以作為面癱基因治療研究的工具。
【摘 要】 目的 探索由人表皮干細胞、成纖維細胞與纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚修復全層皮膚缺損的可行性。 方法 將人全層皮膚采用胰蛋白酶消化法使表皮干細胞和真皮成纖維細胞分離后，分別在無血清培養基中行原代及傳代培養。將體外擴增培養至第3、4 代的表皮干細胞（5×104/mL）和真皮成纖維細胞（1×104/mL）共0.5 mL 與纖維蛋白支架（0.5 mL）混合凝固構建組織工程皮膚。取4 ～ 5 周齡雄性裸鼠45 只，體重19.5 ～ 20.3 g，平均20.0 g，制備背部全層皮膚缺損模型。隨機分為5 組，每組9 只，分別為空白對照組（C 組），創面僅覆蓋凡士林油紗，自然愈合；單純支架組（F 組），創面移植無細胞的纖維蛋白支架；表皮支架組（S 組），創面移植含有表皮干細胞的纖維蛋白支架復合物；成纖維細胞支架組（Fb 組），創面移植含有成纖維細胞的纖維蛋白支架復合物；組織工程皮膚組（T 組），創面移植組織工程皮膚。術前及術后1、3、6、8 周行全身及移植部位大體觀察；移植后3、6、8 周，取材行組織學、免疫組織化學及掃描電鏡觀察。 結 果 細胞培養4 周后，表皮干細胞培養皿內可見圓形細胞，在加有BrdU 的培養液中培養6 d 后可見BrdU 染色陽性細胞；成纖維細胞培養皿內可見梭形細胞。構建的組織工程皮膚可見CK19 免疫熒光染色陽性細胞、Nestin 染色陽性細胞。移植后T 組新生皮膚較其余各組生長快、瘢痕輕。術后6 周，C、F、S、Fb 及T 組皮膚厚度分別為：（0.460 ± 0.049）、（0.480 ± 0.055）、（0.540 ± 0.043）、（0.510 ± 0.032）及（0.660 ± 0.047）mm，T 組明顯厚于其余各組，且差異有統計學意義（P lt; 0.05）。術后3、6、8 周，HE 染色及掃描電鏡示，T 組新生表皮層數及真皮成纖維細胞、血管數量均多于其余各組，且T 組真皮血管及膠原纖維排列均較其余各組整齊；術后3 周，Ⅳ型膠原免疫組織化學染色顯示，T 組已形成連續的染色帶，而其余各組均不連續；術后6 周，CK14 免疫組織化學染色顯示，T 組可見陽性細胞，其余各組均未見。 結論 用表皮干細胞、成纖維細胞及纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚移植后能使創面迅速愈合，可望成為一種較理想的組織工程皮膚。
目的 觀察釉基質蛋白（enamel matrix proteins，EMPs）對體外培養的人正常皮膚成纖維細胞黏附、增殖及Ⅰ型膠原前mRNA合成的影響。 方法 取自愿捐贈包皮環切術后包皮組織，采用組織塊法培養人皮膚成纖維細胞，取第3 ～ 6 代細胞進行實驗。以終濃度為50、100、150、200 μg/mL 的EMPs 工作液預鋪培養板。①細胞黏附實驗：取細胞以1 × 106 個/mL 置于預鋪EMPs 的96 孔培養板，每孔0.2 mL，作為實驗組（A、B、C、D 組）。培養1.5、3.0 和4.5 h 后MTT 比色法測定黏附細胞量。②細胞增殖實驗：取細胞以5 × 104 個/mL 置于預鋪EMPs 的培養板，每孔0.2 mL，作為實驗組（A1、B1、C1、D1 組）。于第2、4、6、8 天以MTT 比色法測定增殖細胞量。③細胞Ⅰ型膠原前mRNA 合成實驗：取細胞以1 × 106 個/mL 置于預鋪EMPs 培養板，每孔2 mL，作為實驗組（A2、B2、C2、D2 組）。于培養第5 天RT-PCR 法測定Ⅰ型膠原前mRNA 合成的量。以上實驗均以相同濃度細胞懸液加入未預鋪EMPs 的板孔作為對照組，每組均3 個復孔。 結 果 ①細胞黏附實驗中，各時間點B、C、D 組與A 組及對照組比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；A 組與對照組間及B、C、D 組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。②細胞增殖實驗中，第2 天各組間差異均無統計學意義（P gt;0.05） ；第4、6 天，B1、C1、D1 組吸光度（A）值分別為0.598 ± 0.020、0.582 ± 0.017、0.574 ± 0.021 及0.639 ± 0.016、0.641 ±0.020、0.635 ± 0.021，均高于對照組的0.548 ± 0.021 及0.605 ± 0.019（P lt; 0.05） ；A1 組A 值分別為0.545 ± 0.023 及0.603 ±0.016，與對照組差異無統計學意義（P gt; 0.05）。第8 天，B1、C1 組A 值分別為0.629 ± 0.012、0.631 ± 0.014，高于對照組的0.606 ± 0.031（P lt; 0.05），A1、D1 組與對照組比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。③細胞Ⅰ型膠原前mRNA 合成實驗中，B2、C2、D2 組Ⅰ型膠原前mRNA 合成量高于對照組。 結論 EMPs 促進人正常皮膚成纖維細胞黏附、增殖及Ⅰ型膠原前mRNA 合成，且EMPs 在100 μg/mL 濃度時可發揮最大促進作用。
目的 探討釩酸鹽對大鼠內側副韌帶（medial collateral ligament，MCL）成纖維細胞增殖和Ⅰ型膠原合成的影響。 方法 選取成年雄性SD 大鼠12 只，體重350 ～ 375 g，無菌切取MCL，以眼科剪剪成1 mm × 1 mm ×1 mm 大小后置于培養瓶中，0.25% 胰蛋白酶消化傳代制備MCL 成纖維細胞。取第3 代MCL 成纖維細胞，分別加入不同濃度（0、1.0、2.5、5.0 ng/mL）的釩酸鹽，采用MTT 法測定細胞增殖，ELISA 法及RT-PCR 測定各濃度組細胞Ⅰ型膠原的合成和Ⅰ型膠原基因的表達，每濃度組樣本量均為12。 結果 MTT 法測得0 ～ 5 ng/mL 4 個濃度組細胞增殖的吸光度（A）值分別為0.213 ± 0.016、0.327 ± 0.023、0.449 ± 0.137 和0.561 ± 0.028，1.0、2.5、5.0 ng/mL 濃度組釩酸鹽對MCL 成纖維細胞有明顯促增殖作用，與0 ng/mL 濃度組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。ELISA 法測得0 ～ 5 ng/mL 各濃度組Ⅰ型膠原的A 值分別為0.47 ± 0.02、0.51 ± 0.03、0.60 ± 0.01 和0.72 ± 0.02，1.0、2.5、5.0 ng/mL 濃度組釩酸鹽能明顯促進Ⅰ型膠原的合成，與0 ng/mL 濃度組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。RT-PCR 測得0 ～ 5 ng/mL 各濃度組Ⅰ型膠原條帶密度比值分別為1.37 ± 0.76、1.97 ± 0.53、2.41 ± 0.94 和2.73 ± 0.82，1.0、2.5、5.0 ng/mL 濃度組的Ⅰ型膠原基因表達顯著高于0 ng/mL 濃度組，比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。以上每項指標1.0、2.5、5.0 ng/mL 三濃度組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 釩酸鹽具有促進MCL 成纖維細胞的增殖和Ⅰ型膠原合成的能力，可能為治療MCL損傷提供一種新的途徑
目的 觀察并探討p53 基因表達及其72 位編碼子基因多態性對瘢痕疙瘩臨床表型的影響。 方 法 取35 例自愿捐獻瘢痕疙瘩組織，男19 例，女16 例；病程4 個月～ 8 年。同時收集自身外周血作基因型分析。根據觀察范圍不同，實驗共分為兩組（n=35）。中央組：各瘢痕疙瘩中央部（中央2/3 半徑范圍內）；周邊組：各瘢痕疙瘩周邊部（周邊1/3 半徑范圍內）。兩組再根據瘢痕疙瘩最大橫徑大小分3 個亞組：lt; 1 cm 為小體積組（n=5），1 ～ 3 cm 為中體積組（n=21），gt; 3 cm 為大體積組（n=9）。采用PCR 法擴增p53 基因外顯子4，并進行基因測序；免疫組織化學方法檢測P53蛋白表達變化；TUNEL 法檢測瘢痕疙瘩組織中成纖維細胞凋亡，并進行統計學分析。 結果 瘢痕疙瘩p53 遺傳基因型為Arg/Arg 者7 例，Pro/Arg 者21 例，Pro/Pro 者7 例，與臨床表型分布有相關性（P lt; 0.05）；中、小體積周邊組及中央組P53 蛋白染色陽性，大體積周邊組偶見細胞染色陽性。基因型為Arg/Arg、Arg/Pro 及Pro/Pro 的標本吸光度值分別為3 439.359 8 ± 538.527 5、3 273.186 2 ± 375.213 9 及1 691.372 9 ± 98.989 3，各基因型間比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05） ；TUNEL 法檢測成纖維細胞凋亡，鏡下可見凋亡細胞呈均勻分布，大、中、小體積周邊組凋亡細胞指數分別為31.000 0 ±3.266 0、42.300 0 ± 4.354 8、44.600 0 ± 5.253 6，各組間比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結 論 瘢痕疙瘩臨床表型與P53 蛋白表達密切相關，組織中p53 基因72 位編碼子基因多態性的變異有利于瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡。
目的 探討壓應力對體外培養人增生性瘢痕成纖維細胞增殖和凋亡的影響。方法 應用組織塊培養法獲取人增生性瘢痕成纖維細胞。以簡易氣控加壓細胞培養儀給細胞 施5、10、15、25、50、100、150mmHg(1mmHg=0.133 kPa)壓力(n=6)，持續4 d，作為實驗組；不施壓設為對照組(n=6)。分別以MTT法測定細胞吸光度（A）值并計算生長抑制率(inhibition ratio,IR)，流式細胞儀測定細胞生長周期及Annexin-V-PI標記法測定細胞凋亡情況。結果 5、10、15、25、50、100、150mmHg壓力組及對照組，細胞A值分別為0.228±0.004、0.226±0.003、0.213±0.005、0.180±0.005、0.172±0.007、0.165±0.004、0.164±0.004、0.230±0.005，IR分別為0.8%、2.0%、7.3%、21.7%、25.2%、28.2%、28.2%和0。DNA G1期細胞百分比分別為71.80％±0.44％、72.32％±0.40％、74.56％±1.01％、82.82％±2.76％、86.77％±2.06％、88.23％±1.27％、89.11％±1.74％、71.46％±0.49％，早期細胞凋亡率分別為4.22％±0.49％、5.12％±0.74％、8.58％±0.79%、19.28％±140%、25.60％±1.21%、35.80％±2.39%、36.18％±2.38%、4.00％±0.36％。其中5、10mmHg壓力組上述各指標與對照組比較，差異無統計學意義(P＞ 0.05)；15、25、50、100、150mmHg壓力組各指標與對照組比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)；10、15、25、50mmHg壓力組細胞A值和G1期細胞百分比組間比較，差異均有統計學意義(P＜0.01), 50、100、150 mmHg壓力組各組間比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；10、15、25、50、100mmHg壓力組早期細胞調亡率組間比較差異均有統計學意義(P＜0.01), 100、150mmHg壓力組組間比較差異無統計學意義(P＞0.05)。 結論 適當的持續壓應力對增生性瘢痕成纖維細胞具有誘導凋亡、抑制增殖的復合效應，是臨床上壓迫療法治療增生性瘢痕的重要機制之一。