目的探索沉默 P75 神經營養蛋白受體（p75 neurotrophin receptor，P75NTR）聯合 NGF 過表達對大鼠 BMSCs 增殖活性和復合脫鈣骨基質（demineralized bone matrix，DBM）構建組織工程骨異位成骨能力的影響。方法通過貼壁分離法培養 SD 大鼠 BMSCs 并傳代。取第 3 代 BMSCs，分別用慢病毒介導沉默 P75NTR 基因（B 組）、NGF 過表達基因（C 組）、沉默 P75NTR 和 NGF 過表達雙基因（D 組）轉染，以未轉染細胞作為對照（A 組）。轉染 7 d 后熒光顯微鏡觀察目的基因熒光蛋白表達；細胞計數試劑盒 8 法檢測轉染后連續 8 d 細胞的活性；Western blot 檢測各組 P75NTR 和 NGF 蛋白表達。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡分別觀察沉默 P75NTR 和 NGF 過表達雙基因轉染后 BMSCs 與 DBM 的黏附情況。將上述 4 組轉染后 BMSCs 分別與 DBM 共培養制備組織工程骨后，埋植于 8 周齡 SD 大鼠背側皮下構建皮下異位成骨模型（n=6），術后 4、8 周行 HE 染色，術后 8 周 ALP 染色觀察鈣結節形成，實時熒光定量 PCR 檢測成骨相關基因 Runt 相關轉錄因子 2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）、ALP 和骨鈣素（osteocalcin，OCN）表達。結果轉染 7 d A 組未見熒光表達，B 組呈紅色熒光表達，C 組呈綠色熒光表達，D 組呈紅綠色復合熒光表達；目的基因熒光表達率可達 70% 左右。Western blot 檢測示，A、C 組 P75NTR 蛋白相對表達量顯著高于 B、D 組，C、D 組 NGF 蛋白相對表達量顯著高于 A、B 組，差異均有統計學意義（P<0.05）。隨時間推移，各組細胞增殖活性均上升，其中 D 組上升最明顯，3～8 d 細胞活性明顯高于 A 組（P<0.05）。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察示，BMSCs 能與 DBM 形成良好黏附。皮下異位成骨實驗中，HE 染色示術后 4、8 周，D 組比其余 3 組有更多的骨組織形成。ALP 染色示 D 組 ALP 活性最高，有更好的成骨表達。實時熒光定量 PCR 檢測示，與 A 組比較，D 組 Runx2、ALP、OCN mRNA 相對表達量顯著升高，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論沉默 P75NTR 聯合 NGF 過表達雙基因共轉染 BMSCs 復合 DBM 構建組織工程骨具有良好的異位成骨能力，通過提高 NGF 的水平、關閉 P75NTR 凋亡通道，不僅可以提高細胞活性，還能更好地促進骨組織再生。