目的研究BMP-14與軟骨細胞共同誘導脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）向軟骨細胞分化是否具有協同作用，優化軟骨組織工程種子細胞來源。 方法取2只雄性新西蘭大白兔（體重1.5、2.0 kg）關節軟骨和皮下脂肪組織，分離、培養軟骨細胞和ADSCs，取第3代細胞進行實驗。對ADSCs行成骨（茜素紅染色）、成軟骨（阿利新藍染色）和成脂（油紅O染色）誘導鑒定。測定Ad-巨細胞病毒-BMP-14-內部核糖體進入位點-人源化海腎綠色熒光蛋白1轉染的最佳感染復數（multiplicity of infection，MOI）并以其轉染ADSCs。實驗分為5組：A組，采用Transwell小室將BMP-14轉染的ADSCs與軟骨細胞共培養（1∶1）；B組，采用Transwell小室將未轉染的ADSCs與軟骨細胞共培養（1∶1）；C組，單純BMP-14轉染的ADSCs培養；D組，單純軟骨細胞培養；E組，單純ADSCs培養。培養3周后，取細胞采用阿利新藍法檢測糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）含量，Western blot檢測BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達，RT-PCR檢測Sox-9基因表達。 結果培養細胞經鑒定提示為ADSCs。倒置熒光顯微鏡觀察示，MOI值為150時轉染效果最好。A、C組GAG含量、BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達以及Sox-9基因表達均明顯高于其余3組，A組高于C組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；B、D組均明顯高于E組（P lt; 0.05），B、D組間差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論BMP-14與軟骨細胞能共同誘導并促進兔ADSCs向軟骨細胞分化，兩者之間具有協同作用。
目的 比較腺病毒載體Ad-BMP-2-內部核糖體進入位點（internal ribosome entry site，IRES）-低氧誘導因子1α突變型（hypoxia inducible factor 1αmu，HIF-1αmu）與Ad-巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-BMP-2-IRES-人源化海腎綠色熒光蛋白1（human renilla reniformis green fluorescent protein 1，hrGFP-1）分別轉染BMSCs后的成骨效應，優化成骨細胞種子來源。 方法取1月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養BMSCs。取第3代BMSCs進行病毒液轉染，根據轉染病毒液不同將實驗分為4組，A、B、C組分別采用感染復數（multiplicity of infection，MOI）為50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1（空腺病毒載體）轉染細胞，D組為未被轉染的BMSCs。選擇最佳MOI值進行觀察。轉染后采用免疫組織化學染色檢測BMP-2表達，Western blot檢測BMP-2和HIF-1α蛋白表達，ALP活性測定和鈣結節茜素紅染色檢測細胞成骨分化能力。 結果A、B、C組最佳MOI值分別為200、150和100。免疫組織化學染色示，A、B組BMP-2染色呈陽性，C、D組呈陰性；A組陽性細胞數明顯多于B組（P lt; 0.05）。Western blot檢測示，A、B組BMP-2蛋白表達明顯高于C、D組（P lt; 0.05），A組高于B組（P lt; 0.05）；A組HIF-1α蛋白表達明顯高于其余3組（P lt; 0.05），其余3組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。A、B組ALP活性明顯高于C、D組（P lt; 0.05），A組高于B組（P lt; 0.05）。茜素紅染色示，A、B組可見明顯鈣結節，C、D組未見鈣結節形成；且A組鈣結節數量多于B組（P lt; 0.05）。 結論單載體雙基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu與單載體單基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分別轉染兔BMSCs后，前者BMP-2和成骨效應表達均高于后者。