目的 構建新型自組裝多肽納米凝膠支架RGDmx,探討支架的細胞相容性及其對前軟骨干細胞(precartilaginous stem cells,PSCs)增殖和向軟骨細胞方向分化的影響。 方法 取新生SD 大鼠四肢長骨干骺端組織分離培養PSCs,采用免疫磁珠分選系統分選純化原代細胞,并進行鑒定。取KLD-12、KLD-12-PRG 多肽凍干粉,以體積比1 ∶ 1 復合構建RGDmx。將純化后的第3 代PSCs 接種至KLD-12(對照組)和RGDmx(實驗組)培養,1、3、7、14 d用細胞計數(cell counting kit,CCK)-8 法檢測支架細胞增殖- 毒性;制備不同混合比(0、20%、40%、60%、80%、100%)RGDmx,觀察其對PSCs 增殖的影響;采用無血清軟骨形成培養液(complete chondrogenic medium,CCM)誘導兩組支架內PSCs 向軟骨細胞方向分化,培養14 d 時行甲苯胺藍染色法鑒定,并用RT-PCR 法檢測兩組軟骨分化特異性基因Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的表達情況。 結果 成功分離純化獲得成纖維細胞生長因子受體3 表達陽性細胞,免疫組織化學染色及免疫熒光染色鑒定為PSCs。CCK-8 檢測結果顯示,復合培養后實驗組細胞吸光度(A)值隨培養時間延長逐步提高,7 d達峰值;其中7、14 d 時細胞A 值高于對照組(P lt; 0.05);復合培養7 d 時,混合比為40% 組細胞A 值較其他混合比組高,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。CCM 誘導培養14 d 時,兩組支架內細胞甲苯胺藍染色均呈陽性;RT-PCR 檢測示實驗組細胞Ⅱ型膠原和蛋白聚糖mRNA 表達水平均高于對照組,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 自組裝多肽納米凝膠支架RGDmx 具有良好的細胞相容性,可有效促進PSCs 增殖及向軟骨細胞方向分化,是組織工程較理想的細胞載體系統。