目的 建立人臍靜脈血管內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）體外高效穩定培養的方法，為組織工程及相關醫學基礎研究提供穩定的細胞來源。 方法 取自愿捐贈足月妊娠分娩的新生兒臍帶，用自制空針軟管靜脈注入0.1% Ⅱ型膠原酶，置于37℃培養箱中，消化收集，采用含5% FBS 及1% 內皮細胞生長因子（endothelial cell growth factor,ECGS）的內皮細胞專用培養基進行培養。將消化前后的臍帶標本行HE 染色，觀察HUVECs 脫壁情況；流式細胞儀檢測原代細胞純度；細胞培養期間于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態；取第3 代HUVECs行免疫細胞化學染色觀察、MTT 檢測細胞增殖情況，并將細胞接種于細胞外基質膠Matrigel 上培養24 h，觀察細胞管腔形成情況。 結果 經Ⅱ型膠原酶消化后的臍帶內HUVECs 大量脫落，細胞消化完全。經Ⅱ型膠原酶37℃培養箱中消化15 min 后，可獲得純度為 99.56% 的HUVECs；原代HUVECs 培養后2 ～ 3 d 生長最快，呈典型的鋪路石或鵝卵石樣排列，4 ～ 6 d 融合成片。 MTT 法檢測顯示第3 代HUVECs 培養后3 ～ 4 d 細胞生長最快，5 d 左右融合；免疫細胞化學染色顯示內皮細胞Ⅷ因子相關抗原表達陽性，培養24 h 后在細胞外基質膠Matrigel 上可見類似于毛細血管的完整閉合管腔形成。 結論 經自制空針軟管靜脈注入0.1%Ⅱ型膠原酶，使靜脈充分充盈，內皮消化完全，采用含5%FBS 和1%ECGS的內皮細胞專用培養基，可迅速獲取大量高純度、高存活率的HUVECs。