目的 建立利用毛囊干細胞和成纖維細胞進行全層皮膚重建的實驗方法。 方法 取美容手術切取的頭皮組織，K19免疫熒光染色定位毛囊干細胞，消化、分離、體外培養，以膠原成纖維細胞聚合物為基質，采用氣-液界面對第2代毛囊干細胞立體培養14 d ，建立全層皮膚培養模型，并行組織學及K1免疫熒光染色觀察。 結果 K19免疫熒光染色定位毛囊干細胞存在于毛囊外根鞘處，與成纖維細胞聯合體外氣液界面立體培養14 d，獲得的皮膚類似物，可見真皮基底膜形成，表皮多層上皮有序、多角形排列，上層細胞出現角化，真皮部成纖維細胞均勻分布于膠原基質中，角質細胞形成分化特異標志物K1染色陽性。 結論 毛囊外根鞘處的毛囊干細胞具有高增殖能力并向表皮細胞分化，可成功利用毛囊干細胞和成纖維細胞進行皮膚重建，為臨床應用奠定基礎。