【摘 要】 目的 探討脫細胞軟骨基質三維多孔支架的制備方法以及將其應用于關節軟骨組織工程的可行性。 方法 取天然人軟骨粉碎后，采用梯度離心法取100 nm ～ 5 μm 軟骨微絲，脫細胞處理后制備為質量體積比為3%的懸液，采用冷凍凍干法制備脫細胞軟骨基質三維多孔支架。254 nm 紫外線和碳化二亞胺/ N- 羥基琥珀酰亞胺對支架進行交聯。冷凍凍干后，對支架材料進行組織學及掃描電鏡觀察，測定支架孔徑和孔隙率、吸水率，并采用MTT 法分析支架浸提液毒性。分離培養犬BMSCs，用TGF-β1 成軟骨誘導后種植至支架，倒置顯微鏡、電鏡觀察細胞在支架上的生長、分化情況。 結果 組織學觀察顯示，三維多孔支架中無軟骨細胞碎片殘留，甲苯胺藍染色、番紅O 染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均呈陽性。掃描電鏡顯示支架內孔洞相互連通，孔徑為（155 ± 34）μm，孔隙率為91.3% ± 2.0%，吸水率為451% ± 155%。MTT 法顯示不同濃度支架浸提液與對照DMEM 培養液吸光度值比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05），支架無細胞毒性。倒置顯微鏡觀察，細胞在支架上黏附良好；掃描電鏡下細胞在支架上均勻分布，細胞呈圓形或橢圓形，并有基質分泌。 結論 制備的脫細胞軟骨基質三維多孔支架去細胞徹底，保留了軟骨ECM 主要成分，無毒，具備合適的孔徑和孔隙率，生物相容性良好，是軟骨組織工程良好的支架載體。