目的研究體外單層培養與藻酸鹽微球立體培養對人正常髓核細胞分化的影響,并探討白藜蘆醇(resveratrol,RES)恢復藻酸鹽微球立體培養下去分化髓核細胞表型的調節機制。 方法取6例腰椎爆裂骨折患者自愿捐贈的正常髓核組織分離培養髓核細胞,并行細胞鑒定;取單層培養的第1、3、5、7代髓核細胞分別行形態學觀察、β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色觀察細胞衰老情況及甲苯胺藍染色觀察蛋白多糖表達。分別取單層培養和藻酸鹽微球立體培養的第1代髓核細胞檢測細胞增殖情況。取立體培養1周的第7代髓核細胞隨機分為立體培養空白組(A組)、RES組(B組)、沉默交配型信息調節因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)-小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)+ RES組(C組)、陰性對照-siRNA+RES組(D組),另設置髓核細胞單層培養空白組(E組),行相應培養后采用Western blot檢測SIRT1、聚蛋白多糖(Aggrecan)和Ⅱ型膠原蛋白表達,實時熒光定量PCR檢測SIRT1 mRNA表達水平。 結果細胞鑒定提示培養細胞為髓核細胞。形態學觀察及SA-β-gal、甲苯胺藍染色示,在體外連續單層培養條件下,正常髓核細胞易發生去分化,且隨著傳代次數增加趨勢愈明顯。藻酸鹽微球立體培養48 h內髓核細胞增殖顯著低于單層培養(P lt; 0.05),但能顯著提高去分化髓核細胞SIRT1、Ⅱ型膠原與Aggrecan蛋白的表達,E組與A組比較差異有統計學意義(P lt; 0.05);與A組相比,B組3種蛋白表達顯著提高(P lt; 0.05)。C組SIRT1 mRNA和蛋白表達均受明顯抑制,顯著低于B、D組(P lt; 0.05),Ⅱ型膠原與Aggrecan蛋白表達也顯著低于B、D組(P lt; 0.05)。 結論連續體外單層培養條件下,髓核細胞增殖速度較快,但在培養過程中易發生去分化現象;而在藻酸鹽微球立體培養條件下,RES可以恢復去分化髓核細胞表型,合成更多細胞外基質,這一機制與SIRT1的調節有關。