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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"杜超" 1條結果
        • 重組腺病毒Ad-人基質金屬蛋白酶1體外轉染大鼠BMSCs研究

          目的利用重組腺病毒Ad-人基質金屬蛋白酶1(human matrix metalloproteinase 1,hMMP-1)體外轉染大鼠BMSCs,為BMSCs聯合hMMP-1基因移植治療肝纖維化奠定實驗基礎。 方法取2~3周齡SD大鼠骨髓采用全骨髓貼壁法分離培養BMSCs,傳至第3代并進行鑒定;用攜帶增強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)標記的重組腺病毒Ad-hMMP-1-EGFP體外轉染第3代BMSCs,熒光顯微鏡下觀察轉染情況,流式細胞儀檢測轉染效率并確定最佳感染復數(multiplicity of infection,MOI)。實驗分為未轉染BMSCs組(A組)、Ad-EGFP轉染BMSCs組(B組)及Ad-hMMP-1-EGFP轉染BMSCs組(C組),采用MTT法檢測轉染后細胞增殖情況,RT-PCR及Western blot分別檢測轉染后各組細胞內hMMP-1基因和蛋白表達情況,ELISA法檢測上清中蛋白hMMP-1分泌水平,hMMP-1酶活性熒光定量試劑盒測定其活性。 結果重組腺病毒轉染BMSCs后24 h可見綠色熒光表達,72 h時熒光強度最高,最佳MOI為200。MTT檢測示3組細胞均于培養3 d進入對數生長期,6 d后進入平臺期;各時間點3組間細胞吸光度(A)值比較,差異均無統計學意義(P gt; 0.05)。RT-PCR、Western blot及ELISA檢測示,A、B組均無hMMP-1基因和蛋白表達,C組hMMP-1基因和蛋白均高效表達。熒光定量試劑盒測定A、B組均未檢測到hMMP-1酶活性,C組hMMP-1酶活性為1.24 nmol/(mg·min)。 結論利用重組腺病毒Ad-hMMP-1成功將外源基因導入大鼠BMSCs并高效表達,為BMSCs聯合hMMP-1基因移植治療肝纖維化奠定了實驗基礎。

          發表時間:2016-08-31 04:07 導出 下載 收藏 掃碼
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