【摘 要】 目的 通過營養剝奪模擬體內髓核細胞退變微環境,檢測Bcl-2/ 腺病毒干擾蛋白3(Bcl-2/adenovirusE1B 19-kDa-interacting protein 3,BNIP3)表達及線粒體轉位情況,為進一步探索髓核細胞退變死亡機制提供實驗依據。 方法 成年清潔級SD 大鼠2 只,雌雄不限,體重150 ~ 200 g。體外分離獲取鼠尾椎間盤髓核細胞,將傳代后細胞分別置入正常環境(對照組:L-DMEM 培養基、10%FBS、21%O2)和營養剝奪環境(實驗組:DMEM 無糖無血清培養基、 1% O2)培養24、48、72 h 后,實時熒光定量PCR、細胞免疫熒光染色及Western blot 檢測BNIP3 基因及蛋白表達,流式細胞儀檢測凋亡率及線粒體膜電位。 結果 實時熒光定量PCR、細胞免疫熒光染色及Western blot 檢測顯示對照組細胞低表達BNIP3;實驗組隨培養時間延長,BNIP3 表達呈上升趨勢,且BNIP3 與線粒體相結合;除培養后24 h 實驗組BNIP3 基因表達與對照組比較差異無統計學意義(P gt; 0.05)外,其余各時間點實驗組BNIP3 基因及蛋白表達與對照組比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。流式細胞儀檢測顯示,對照組細胞凋亡率較低,且細胞保持較高的線粒體膜電位;而實驗組隨培養時間延長細胞凋亡率增加、線粒體膜電位降低,與對照組比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 營養剝奪可能通過誘導BNIP3 表達增加并結合線粒體導致線粒體功能障礙,最終導致髓核細胞死亡。