目的構建人膠質細胞源性神經營養因子(human glial cell derived neurotrophic factor,hGDNF)基因修飾的猴雪旺細胞穩定細胞系。 方法以pUC19-hGDNF為模板,擴增含hGDNF基因序列,將其插入質粒pBABE-puro,構建pBABE-puro-hGDNF重組真核表達載體,經酶切鑒定及DNA測序鑒定重組質粒。從恒河猴提取、培養、純化雪旺細胞。包裝病毒,利用含hGDNF基因的重組逆轉錄病毒轉染雪旺細胞,實時熒光定量PCR、Western blot檢測hGDNF mRNA及蛋白表達情況。 結果PCR產物hGDNF基因編碼序列大小約596 bp。重組表達載體經雙酶切鑒定,含有1 條596 bp的特異性條帶,其基因測序結果與基因庫中hGDNF基因序列片段相同,提示hGDNF基因成功轉入逆轉錄病毒。逆轉錄病毒轉染的雪旺細胞hGDNF mRNA及蛋白表達量顯著高于未轉染雪旺細胞,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論成功構建hGDNF基因修飾的猴雪旺細胞穩定細胞系,能長期穩定高效釋放hGDNF,為進一步將其應用于神經損傷修復奠定了基礎。