目的 觀察胰島素對鏈脲佐菌素（STZ）誘導的糖尿病大鼠視網膜血管內皮生長因子（VEGF）表達的影響。方法 60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為檸檬酸鈉緩沖液對照組(CIT-CON)和STZ誘導糖尿病組(STZ-DM)，每組各30只。16周時，在 CIT-CON組中隨機抽取24只大鼠分為檸檬酸鈉緩沖液對照組（A組）和檸檬酸鈉緩沖液加胰島素作用組（B組），每組各12只，剩余6只作為陰性對照。同時，在STZ-DM組中也隨機抽取24只大鼠分為STZ誘導糖尿病組（C組）和STZ誘導糖尿病組加胰島素作用組（D組），每組也為12只，同樣剩余6只作為陰性對照。胰島素作用組皮下注射4 IU胰島素，24 h后處死各組大鼠，3只取眼球、4%多聚甲醛固定，供制備病理切片；9只取視網膜神經上皮層，保存于液氮中。實時聚合酶鏈反應（Rea l-time PCR）檢測視網膜VEGF mRNA表達，免疫組織化學、蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測VEGF蛋白表達。結果 胰島素作用于正常對照大鼠和STZ誘導的糖尿病大鼠后，正常大鼠VEGF mRNA 表達為7.71plusmn;0.25，蛋白表達為0.492 5plusmn;0.012 2，分別與胰島素作用前比較，差異均有統計學意義（t=5.32，3.97；Plt;0.05）；STZ誘導的糖尿病大鼠VEGF mRNA表達為9.05plusmn;0.28，蛋白表達為0.515 2plusmn;0.010 9，分別與胰島素作用前比較，差異均無統計學意義（t=0.34，0.36；Pgt;0.05）。結論 胰島素作用于STZ誘導的糖尿病大鼠不能顯著上調視網膜VEGF mRNA 和蛋白水平。
目的 觀察體外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化終末產物（AGEs）對牛視網膜微血管內皮細胞（BREC）和周細胞（BRP）存活和形態的影響。 方法 取終濃度為50mg/ml的牛血清白蛋白（BSA）、500 mmol/L D-葡萄糖，于37℃孵箱內避光孵育12周，制備外源性AGEs-BSA，經Sephacryl S-300層析純化，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白電泳鑒定AGEs-BSA和coomassie 蛋白質定量法測定蛋白濃度。分設不同濃度梯度的AGEs-BSA實驗組和BSA對照組，以及空白對照組，分別觀察體外孵育的AGEs-BSA對體外培養的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置顯微鏡觀察500mu;g/ml AGEs-BSA和BSA作用48 h對BREC和BRP形態的影響。 結果 隨著AGEs-BSA劑量的增加，細胞被抑制呈上升趨勢。500mu;g/ml AGEs-BSA抑制BREC為空白對照組的（72.8plusmn;15.9）%，抑制周細胞為空白對照組的（64.8plusmn;9.0）%。低濃度AGEs-BSA對BREC有一定促增生作用，但與空白對照組比較無統計學意義（P=0.231）。相差倒置顯微鏡觀察結果顯示AGEs-BSA處理組細胞增殖受抑制，失去正常細胞形態，而BSA對照組細胞同空白對照組，細胞形態正常。 結論 AGEs-BSA在高濃度時，無論是對BREC還是BRP，都產生生長抑制作用，從而導致BRP的丟失，損傷血管功能。進一步證實了非酶糖化是糖尿病微血管并發癥的一個重要原因。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 11-15)
目的 探討牛視網膜微血管內皮細胞（ bovine retinal endothelial cells, BREC ）和周細胞（bovine retinal pericytes, BRP）的體外選擇性培養方法。 方法 結合視網膜微血管的消化分離，采用含10％人血清、100 μg/ml 肝素（Heparin）的Dulbecco改良Eagle培養基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium, DMEM)和含20％胎牛血清的DMEM培養基分別選擇性培養BREC和BRP。通過熒光顯微鏡觀察乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein, Dil-Ac-LDL)吞噬情況并應用Von Willebrand因子抗體通過免疫組織化學方法鑒定BREC；以及α-平滑肌肌動蛋白抗體免疫組織化學鑒定BRP。 結果 通過選擇性培養獲得的BREC和BRP的純度達到98％以上，并能連續傳代。BREC早期似小鯉魚狀聚集在微血管碎片周圍，呈片狀鵝卵石樣單層生長，存在接觸性抑制；周細胞多散布在距血管碎片稍遠處，形狀不規則，呈無接觸性抑制的生長。BREC可吞噬Dil-Ac-LDL，細胞漿內有熒光表達 ；消化傳代后BREC中Von Willebrand因子表達陽性，而α-平滑肌肌動蛋白表達陰性；BRP的α-平滑肌肌動蛋白表達陽性，而Von Willebrand因子表達陰性。 結論 選擇性培養基的應用和培養皿的處理，可分別獲得較高純度的BREC和BRP，簡單且具有良好的重復性，無需額外步驟來去除BREC中混雜的BRP。 （中華眼底病雜志，2004，20：23-26）