目的通過構建沉默TNF-α的重組腺病毒并觀察其對小鼠假體骨溶解模型的影響，探討基因治療人工關節假體周圍骨溶解的可能性。 方法設計沉默TNF-α的小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）編碼序列的引物，擴增后利用RAPAD腺病毒包裝系統將該序列載入腺病毒，并構建出E1、E3區雙缺失的重組腺病毒Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP。取8～10周齡SPF級BABL/C雌性小鼠64只，體重20～25 g，隨機分為4組（n=16）。空白對照組（A組）制備假體模型，顆粒對照組（B組）、空病毒組（C組）、治療組（D組）制備假體松動骨溶解模型；造模第2周開始向關節腔內分別注入以下溶液（兩次各注射40 μL）：A組注入PBS溶液，24 h后再次注入；B、C、D組注入鈦顆粒懸濁液，24 h后分別注入PBS溶液、腺病毒Ad5 E1-CMVeGFP溶液（1 × 109 PFU/mL）、重組腺病毒Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP溶液（1 × 109 PFU/mL）；每隔2周重復1次至第10周。術后觀察小鼠一般情況，術后12周取材進行組織學觀察及Western blot檢測TNF-α表達。 結果目的基因載入腺病毒載體后經雙切酶鑒定及DNA測序確定獲得陽性克隆，重組腺病毒 Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP成功轉染HEK293細胞。術后各組小鼠均存活至實驗完成。組織學觀察示，A組炎性細胞及破骨細胞少，骨質形成良好；B、C組見大量炎性細胞浸潤，破骨細胞多，骨質破壞明顯；D組少量炎性細胞浸潤，破骨細胞較B、C組少，未出現明顯骨質破壞。各組界膜厚度及破骨細胞計數均為A組lt; D組lt; B組lt; C組，組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。Western blot 檢測顯示各組均有TNF-α表達， A、B、C、D組TNF-α表達量分別為0.235 ± 0.022、0.561 ± 0.031、0.731 ± 0.037、0.329 ± 0.025，組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論成功構建沉默TNF-α的重組腺病毒，并可有效沉默小鼠假體周圍組織中TNF-α的表達，從而抑制骨溶解。