目的 觀察視網膜母細胞瘤（RB）組織中DNA甲基轉移酶（DNMT）1、DNMT3a和DNMT3b的表達。方法 62例RB腫瘤組織標本及6例正常視網膜組織標本納入研究。其中，低分化組織標本17例，高分化組織標本45例；侵襲性腫瘤16例，非侵襲性腫瘤46例。采用免疫組織化學染色方法檢測RB腫瘤組織標本中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的表達。以細胞核棕色染色為陽性表達，藍色為陰性表達。以DNMT1、DNMT3a及DNMT3b陽性細胞分別ge;65%、60%及40%為DNMT1、DNMT3a、DNMT3b高表達，ge;1%但＜65%、60%及40%為低表達。同時分析DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表達和MIB-1標記指數之間的相關性。結果 光學顯微鏡觀察發現，正常視網膜組織中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b均為陰性表達。腫瘤視網膜組織中均可見DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表達，其陽性表達率分別為100%、98%、92%。高低分化組織標本比較，DNMT1、DNMT3a高表達率（chi;2=12.57、10.54）及陽性細胞計數（U=179、198）間差異均有統計學意義（P＜0.05）；DNMT3b高表達率（chi;2=1.5）和陽性細胞計數（U=307）間差異均無統計學意義（P＞0.05）。侵襲性及非侵襲性腫瘤組織標本比較，DNMT1高表達率（chi;2=4.72）及陽性細胞計數（U=236）間差異均有統計學意義（P＜0.05）；DNMT3a、DNMT3b高表達率（chi;2=3.53、0.84）及陽性細胞計數（U=338、257）間差異均無統計學意義（P＞0.05）。相關性分析結果顯示，MIB-1標記指數與RB腫瘤組織中DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表達呈正相關（R2=0.554、0.376、0.219，P＜0.05）。結論 RB腫瘤視網膜組織中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b均呈高表達。
目的 用蛋白質組學方法觀察alpha;A-晶體蛋白在早期2型糖尿病大鼠神經視網膜的異常表達。方法 28 只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為正常對照組和糖尿病組，每組14只。糖尿病組大鼠采用高脂飲食飼養聯合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)注射誘導2型糖尿病模型(T2DM)，以隨機血糖持續高于16.7 mmol/L為模型建立成功標準。對照組用常規飼料喂養，腹腔注射相同劑量枸櫞酸鈉緩沖液。成模56 d 后斷頸處死所有大鼠，剝離留存神經視網膜組織。從對照組和糖尿病組各取3只大鼠的神經視網膜組織，提取總蛋白，用二維凝膠電泳（2-DE）方法分別進行分離。應用基質輔助激光解吸電離飛行時間串聯質譜 (MALDI-TOF-MS/MS) 和肽質量指紋圖譜 (PMF) 技術對部分差異表達蛋白進行鑒定，并用蛋白免疫印跡（Western blot）和間接免疫熒光（IMF）方法對在糖尿病組表達上調的alpha;A-晶體蛋白進行驗證。結果 平均每塊凝膠檢測到的蛋白斑點,對照組為（3122plusmn;37），糖尿病組為（2702plusmn;21）個。二者比較，表達水平差異有統計學意義的斑點約150個（t值均＞2.57,P值均＜0.05）。在糖尿病組表達上調68個，表達下調82個。質譜分析和數據庫檢索鑒定出 20個差異表達蛋白斑點。其中二維凝膠中2369和1048斑點在糖尿病組呈現高表達。經質譜PMF鑒定為alpha;A-晶體蛋白。Western blot 檢測結果顯示，alpha;A-晶體蛋白在糖尿病組大鼠神經視網膜表達明顯增高。IMF 結果顯示 alpha;A-晶體蛋白在糖尿病組高表達，陽性表達主要位于視網膜的內外核層，在細胞的核周細胞漿區域有強熒光聚集。結論 alpha;A-晶體蛋白在早期2型糖尿病大鼠神經視網膜表達增高。
目的 觀察胰島素對鏈脲佐菌素（STZ）誘導的糖尿病大鼠視網膜血管內皮生長因子（VEGF）表達的影響。方法 60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為檸檬酸鈉緩沖液對照組(CIT-CON)和STZ誘導糖尿病組(STZ-DM)，每組各30只。16周時，在 CIT-CON組中隨機抽取24只大鼠分為檸檬酸鈉緩沖液對照組（A組）和檸檬酸鈉緩沖液加胰島素作用組（B組），每組各12只，剩余6只作為陰性對照。同時，在STZ-DM組中也隨機抽取24只大鼠分為STZ誘導糖尿病組（C組）和STZ誘導糖尿病組加胰島素作用組（D組），每組也為12只，同樣剩余6只作為陰性對照。胰島素作用組皮下注射4 IU胰島素，24 h后處死各組大鼠，3只取眼球、4%多聚甲醛固定，供制備病理切片；9只取視網膜神經上皮層，保存于液氮中。實時聚合酶鏈反應（Rea l-time PCR）檢測視網膜VEGF mRNA表達，免疫組織化學、蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測VEGF蛋白表達。結果 胰島素作用于正常對照大鼠和STZ誘導的糖尿病大鼠后，正常大鼠VEGF mRNA 表達為7.71plusmn;0.25，蛋白表達為0.492 5plusmn;0.012 2，分別與胰島素作用前比較，差異均有統計學意義（t=5.32，3.97；Plt;0.05）；STZ誘導的糖尿病大鼠VEGF mRNA表達為9.05plusmn;0.28，蛋白表達為0.515 2plusmn;0.010 9，分別與胰島素作用前比較，差異均無統計學意義（t=0.34，0.36；Pgt;0.05）。結論 胰島素作用于STZ誘導的糖尿病大鼠不能顯著上調視網膜VEGF mRNA 和蛋白水平。
目的 探討視網膜母細胞瘤（RB）組織中熱休克蛋白（HSP）70、90的表達及其與凋亡調控因子Survivin表達關系，以及兩者共同表達對RB細胞增生活性的影響。方法 采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學法檢測43例RB及6例正常視網膜石蠟組織切片HSP70、HSP90、Survivin和Ki-67蛋白表達水平，以Ki-67蛋白標記指數作為腫瘤細胞增生活性標志，結合病理學特征分析HSPs-Survivin協同表達與腫瘤細胞增生活性關系。結果 43例RB組織中HSP70陽性表達28例，占65.12%，HSP90陽性表達37例，占86.05%，Survivin陽性表達27例，占62.79%；6例正常視網膜組織中均無HSP70、HSP90及Survivin表達；HSP90陽性表達組中Survivin陽性表達率明顯高于陰性表達組（P＜0.05）；HSP90陽性表達組及Survivin陽性表達組Ki-67蛋白標記指數均較表達陰性組明顯增高（P＜0.05），HSP90-Survivin共同陽性表達組Ki-67蛋白標記指數較HSP90-Survivin共同表達陰性或表達不一致組明顯增高（P＜0.05）。但HSP70表達與Survivin相關性無統計學意義（P＞0.05），且對Ki-67蛋白標記指數無明顯影響（P＞0.05）；HSPs、Survivin表達及Ki-67蛋白標記指數與RB組織學分型無關（P均＞0.05）。結論 RB組織中HSP90與Survivin表達存在明顯相關性，HSP90-Survivin共同陽性表達可能在RB細胞增生機制中具有重要意義。
目的 觀察塞來昔布對糖尿病大鼠視網膜血管內皮生長因子（VEGF）表達的影響。 方法 將36只大鼠用鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射制成糖尿病大鼠模型，隨機分成糖尿病組(n=18)和塞來昔布灌胃組(n=18)。塞來昔布灌胃組大鼠經口灌胃塞來昔布50 mg/kg；糖尿病組經口灌胃等體積生理鹽水。另18只正常大鼠為正常對照組。3個月后處死全部大鼠，應用免疫組織化學技術檢測視網膜VEGF蛋白表達，逆轉錄多聚酶鏈式反應（RT-PCR）方法檢測視網膜VEGF-mRNA和環氧化酶(COX)-2-mRNA的表達。 結果 正常對照組視網膜VEGF-mRNA和COX-2-mRNA表達量少，VEGF免疫組織化學反應弱陽性，VEGF蛋白表達量低；糖尿病組較正常對照組視網膜VEGF-mRNA和COX-2-mRNA表達均上調(P＜0.05)，VEGF免疫組織化學反應呈強陽性，VEGF蛋白表達增高(P＜0.01)；塞來昔布灌胃組較糖尿病組視網膜VEGF mRNA表達顯著下降(P＜0.05)，COX-2- mRNA的表達無顯著降低(Pgt;0.05)，VEGF免疫組織化學反應陽性減弱，VEGF蛋白表達降低(P＜0.01)。 結論 塞來昔布可通過抑制COX-2的活性進一步抑制STZ誘導的糖尿病大鼠視網膜VEGF-mRNA及蛋白表達。 (中華眼底病雜志,2007,23:265-268)
目的 觀察早期糖尿病大鼠視網膜谷氨酰胺合成酶（GS）的改變，探討導致這種改變的發生機制。 方法 鏈脲佐菌素（STZ）誘導糖尿病大鼠模型，采用間接免疫熒光組織化學法和Western蛋白印跡法檢測1、2、3個月糖尿病大鼠組和對照組大鼠視網膜GS、白細胞介素-1beta;（IL-1beta;）和即早基因（c-Jun）的表達變化。另外分別將0、100、500、1000 ng/ml IL-1beta;注入4組正常大鼠玻璃體腔中，24 h后采用同樣方法檢測視網膜GS和c-Jun表達的變化。 結果 對照組和1、2個月糖尿病大鼠組視網膜GS表達無明顯改變，3個月糖尿病大鼠組GS表達與對照組相比明顯下調（Plt;0.01）；對照組中IL-1beta;、c-Jun只有極低表達，糖尿病大鼠1至3個月時IL-1beta;、c-Jun表達逐漸升高，與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.01）。玻璃體腔注射500、1000 ng/ml IL-1beta;可以使GS表達明顯下調；注射100 ng/ml IL-1beta;就可以使c-Jun表達顯著升高，并呈劑量依賴性。 結論 在早期糖尿病大鼠視網膜中，免疫相關因子IL-1beta;可使GS表達下降，其機制可能為IL-1beta;激活了c-Jun途徑而影響GS的表達。 (中華眼底病雜志,2007,23:260-264)