乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據統計每年全球約有 130 萬左右的婦女罹患乳腺癌，同時每年約有 41 萬的患者死于乳腺癌，目前我國乳腺癌的年均發病率為（44.77～52.77）/10 萬，年均死亡率為（9.76～10.78）/10 萬，嚴重威脅著婦女的生命健康[1-3]。新輔助化療具有降低腫瘤臨床分期、減少細胞耐藥性等作用，且能為乳腺癌手術患者提供更多的生存機會，在乳腺癌系統治療中的作用越來越重要[4-7]。腫瘤免疫在乳腺癌的發生和發展過程中起著重要的作用，而近期的研究[8-11]同時表明，腫瘤微環境的改變對患者化療后的預后有著顯著的影響。此外，有研究[12-13]證實，新輔助化療能通過調節直腸腫瘤的 T 細胞水平來促進免疫功能的好轉，達到抑制腫瘤細胞增殖的目的。然而，目前國內關于新輔助化療在調節乳腺癌免疫功能方面的研究并不多見，本研究擬通過探討新輔助化療對乳腺癌患者 T 淋巴細胞亞群及自然殺傷細胞（NK 細胞）的影響，以期為乳腺癌新輔助化療的臨床應用提供免疫學依據。
1 資料和方法
1.1 臨床資料
本研究為前瞻性病例對照研究，其中病例組納入標準：① 經穿刺活檢病理學檢查診斷為乳腺浸潤性導管癌；② 術前卡氏評分（Karnofsky performance status，KPS）≥70 分；③ 初診患者，既往未接受任何放化療措施；④ 化療前行相關檢查未發現遠處轉移；⑤ 腫瘤分期為 T2～4N0～2M0 期；⑥ 能耐受至少 3 個周期的新輔助化療。排除標準：① 出現遠處轉移；② 合并其他惡性腫瘤或既往有其他惡性腫瘤病史；③ 合并心、肝、肺、腎等實質臟器功能障礙；④ 處于妊娠期或哺乳期。前瞻性收集 2015 年 5 月至 2017 年 1 月期間于筆者所在醫院診治并接受新輔助化療的乳腺癌患者 68 例，為病例組。68 例患者均為女性，年齡 32～67 歲、（45.46±11.25）歲；腫瘤 TNM 分期：Ⅱ期 38 例，Ⅲ期 30 例；病理學類型：Luminal A 型 24 例；Luminal B 型 21 例，人類表皮生長因子受體-2（Her-2）陽性 14 例，三陰性乳腺癌 9 例；腫瘤部位：左側 36 例，右側 32 例。同時選取同期在筆者所在醫院行健康體檢的 68 例健康女性作為健康對照組（匹配年齡和性別），其中年齡為 32～65 歲、（44.73±10.18）歲。2 組的年齡比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究所有入選研究對象均獲得知情同意，且本研究通過醫院倫理委員會討論通過。
1.2 新輔助化療方案
所有患者術前采用 FEC 方案（氟尿嘧啶、表柔比星和環磷酰胺）進行新輔助化療。具體如下：鹽酸表柔比星注射液（批準文號：H20093251，海正輝瑞制藥有限公司）80 mg/m2，于第 1 天靜脈滴注；注射用環磷酰胺（批準文號：H20093393，海正輝瑞制藥有限公司）600 mg/m2，于第 1 天靜脈滴注；注射用氟尿嘧啶〔批準文號：H20050465，費森尤斯卡比（武漢）醫藥有限公司〕500 mg/m2，于第 1 至第 3 天以微量泵泵入。每 21 天為 1 個化療周期，預計進行 4 個周期的新輔助化療。化療過程中如出現白細胞和中性粒細胞計數下降則予以粒細胞集落刺激因子等藥物適當緩解骨髓抑制，待骨髓抑制緩解后繼續給予相關化療用藥。病例組患者如在新輔助化療期間出現病灶進展則直接進行手術，手術方式根據患者情況綜合考慮，術后改用酒石酸長春瑞濱注射液（批準文號：H20140084，Pierre Fabre Medicament Production-Aquitaine Pharm International 公司，法國）25 mg/m2，于術后第 1 天至第 8 天靜脈滴注；卡培他濱片（批準文號：H20073024，上海羅氏制藥有限公司）1 000 mg/m2，于術后第 1 天到第 4 天口服。每 21 天為 1 個化療周期。如在新輔助化療過程中未出現病灶進展則在最后 1 個新輔助化療周期結束后 14～21 d 進行手術，并于術后 7～14 d 開始進行術后化療。病例組患者術前及術后共化療 6 個周期，術后按常規行放療[14]。
1.3 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例的檢測
所有入選病例均在化療前和化療 4 個周期后、手術前在清晨空腹下采集外周靜脈血于試管內，對照組在入選時（分析時統稱為化療前）及與病例組患者間隔相同時間后（分析時統稱為化療后）采用同樣方法采集血樣，分別給予抗 CD3 單抗-PC5、抗 CD4 單抗-異硫氰酸熒光素（FITC）、抗 CD8 單抗-藻紅蛋白（PE）、抗 CD16 單抗及 CD56 單抗-PE（均購于美國貝克曼庫爾特公司），對抗體進行標記，然后采用 Beckman-CoulterXL 流式細胞儀（Beckman-CoulterXL，MCL）進行 T 細胞亞群和 NK 細胞比例的檢測。
1.4 療效評價
采用腫瘤“最大徑”測量法，評價的指標包括觸診乳腺腫瘤的最大徑以及同側腋窩腫大淋巴結的最大徑。新輔助化療前乳腺腫瘤的最大徑以及同側腋窩腫大淋巴結的最大徑之和為“腫瘤病灶的基線大小”，每個新輔助化療周期前以及手術前均對前次化療的療效進行評價。療效的評價采用實體瘤療效評價標準[6]，患側乳房未觸及腫塊且腋窩也未觸及腫大的淋巴結為完全緩解，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑縮小超過 30% 且未達到完全緩解標準為部分緩解，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑增大超過 20% 為疾病進展，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑縮小低于 30% 或出現增大但未超過 20% 視為疾病穩定，全部病例均由同一具有豐富經驗的副主任醫師進行評價（對研究內容不知情）。定義化療有效為完全緩解+部分緩解，化療無效為病情穩定+病情進展。化療結束后根據療效評價結果將病例組分為有效組和無效組。
1.5 統計學方法
所有數據采用 SPSS 20.0 軟件行統計學分析，計量資料以均數±標準差（
±s）表示，組間差異比較采用配對 t 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 2 組的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
化療前與對照組比較，病例組患者的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均較對照組低（P<0.05），CD8+T 細胞比例較對照組高（P<0.05），但病例組患者的 CD3+T 細胞比例與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。同組內與化療前比較，病例組患者化療后 CD8+T 細胞比例降低，CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均升高（P<0.05），但化療后的 CD3+T 細胞比例與化療前比較差異無統計學意義（P>0.05）；對照組化療前后的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T細胞比值及 NK 細胞比例比較差異均無統計學意義（P>0.05）。病例組和對照組化療前后的 CD4+T 細胞比例的差值、CD8+T 細胞比例的差值、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值的差值及 NK 細胞比例的差值比較差異均有統計學意義（P<0.05），病例組的改變值大于對照組，但 2 組化療前后的 CD3+T 細胞比例的差值比較差異無統計學意義（P>0.05）。具體見表 1。
表1
2 組新輔助化療前后的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例
2.2 不同療效患者的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
68 例乳腺癌患者經過 4 個周期新輔助化療后，療效評價為有效 44 例（有效組），療效評價為無效 24 例（無效組）。化療前無效組和有效組患者的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例比較差異均無統計學意義（P>0.05）。同組內與化療前比較，有效組患者化療后 CD8+T 細胞比例降低，CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均升高（P<0.05），但化療后的 CD3+T 細胞比例與化療前比較差異無統計學意義（P>0.05）；對照組化療前后的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例的差異均無統計學意義（P>0.05）。有效組和無效組患者化療前后的 CD4+T 細胞比例的差值、CD8+T 細胞比例的差值、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值的差值及 NK 細胞比例的差值比較差異均有統計學意義（P<0.05），有效組的改變值大于對照組，但 2 組化療前后的 CD3+T 細胞比例的差值比較差異無統計學意義（P>0.05）。具體見表 2。
表2
不同療效患者的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
3 討論
新輔助化療系指在手術前應用的系統性細胞毒性藥物治療，最初一般應用在手術無法切除或需要保乳的局部晚期乳腺癌患者，但是隨著對乳腺癌研究的不斷深入，新輔助化療的適應證正逐步擴大，有望進一步改善患者的生存[15-16]。目前臨床分期為ⅡA 期、ⅡB 期以及ⅢA 期的乳腺癌患者均是新輔助化療的適應證，而且對于非常年輕的乳腺癌患者進行新輔助化療能夠獲得更高的病理緩解率[3]。乳腺癌患者多數存在細胞免疫功能紊亂，而且腫瘤負荷越大，免疫功能下降越明顯。T 淋巴細胞和 NK 細胞是抗腫瘤免疫過程中最重要的免疫細胞之一，T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞的數量和比例與腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移均密切相關[17-19]。關于新輔助化療對乳腺癌患者腫瘤免疫狀態的改善作用，目前相關研究并不多見，本研究重點探討了新輔助化療對乳腺癌患者免疫狀態的影響。
T 淋巴細胞是重要的一種免疫細胞，根據不同的表面標志物和功能，可分為 CD3+T 細胞、CD4+T 細胞以及 CD8+T 細胞亞群。CD3+T 細胞數量代表著 T 細胞總數，CD4+T 細胞代表著輔助性 T 細胞，CD8+T 細胞代表著細胞毒性 T 細胞，CD4+T 細胞比例的降低和 CD8+T 細胞比例的升高提示細胞免疫功能下降。CD4+T 細胞和 CD8+T 細胞相互影響、相互制約，使機體處于一種相對平衡的狀態，其比值是反映免疫調節功能的一項指標，兩者比例的失調可導致免疫功能紊亂[20-21]。NK 細胞可通過直接殺傷腫瘤細胞及病毒感染細胞來進行免疫調節，而對正常組織無殺傷作用，是抗腫瘤的第一道防線。本研究結果表明，腫瘤細胞可能會產生一些抑制免疫功能的細胞因子，使 CD4+T 細胞數量減少，而 CD8+T 細胞的數量及活性反而升高。王文慧等[22]的研究結果表明，不同臨床分期乳腺癌患者的 T 淋巴細胞亞群存在一定的差異，Ⅱ期和Ⅲ期患者外周血中的 CD3+T 細胞和 CD4+T 細胞比例低于Ⅰ期患者，提示腫瘤細胞對患者免疫功能的抑制可能會隨著腫瘤負荷的增加而變得越發明顯。這在側面說明免疫功能的抑制程度能夠反映腫瘤的進展情況，因此對乳腺癌免疫抑制的改善，有可能對乳腺癌的治療效果發揮一定的作用。本研究結果即顯示：與健康人群比較，乳腺癌患者的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例低，CD8+T 細胞比例高。
本研究結果還表明，新輔助化療能夠提高乳腺癌患者外周血中的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值以及 NK 細胞比例，而降低 CD8+T 細胞比例，其化療前后的差值均大于對照組。此外，通過分析對新輔助化療不同反應乳腺癌患者的 T 細胞亞群和 NK 細胞，結果表明，化療有效的患者其外周血中的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值、CD8+T 細胞比例以及 NK 細胞比例在化療后均有所改善，但是化療無效者上述指標并無顯著改善，且化療有效患者化療前后的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值、CD8+T 細胞比例以及 NK 細胞比例的差值均大于化療無效者。從這一點可說明，新輔助化療對于提高乳腺癌患者的免疫功能有一定的作用[23-24]。推測其可能的機制為：新輔助化療通過藥物的細胞毒性作用殺滅腫瘤細胞，進一步減輕患者的腫瘤負荷。腫瘤負荷的減少可使抑制免疫功能的細胞因子的分泌進一步減少，從而使免疫功能得到一定程度地恢復以及增強[5]。由于評估新輔助化療是否有效的標準在于腫瘤體積是否縮小，等同于腫瘤負荷是否減少，這也可以解釋本組為何化療有效患者的免疫功能指標有改善，而化療無效的患者免疫功能指標并未改善。此外，有文獻[25]報道，新輔助化療還能對乳腺癌組織的微血管再生發揮一定的抑制作用，從而改善腫瘤的微環境狀態，改善腫瘤免疫。然而腫瘤免疫是一個極其復雜的過程，因此是否還存在其他的免疫調節機制，目前仍不明確。
綜上所述，乳腺癌患者體內的 CD4+T 細胞比例和 NK 細胞比例較低，而 CD8+T 細胞比例較高，有效的新輔助化療有助于提高患者的 CD4+T 細胞比例和 NK 細胞比例，并降低 CD8+T 細胞比例，改善患者的免疫功能。但是由于本研究未能對患者進行長期隨訪，因此并未能證實新輔助化療這一改善免疫功能的作用是否同樣能改善遠期預后，因此后期仍需要進一步研究。
乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據統計每年全球約有 130 萬左右的婦女罹患乳腺癌，同時每年約有 41 萬的患者死于乳腺癌，目前我國乳腺癌的年均發病率為（44.77～52.77）/10 萬，年均死亡率為（9.76～10.78）/10 萬，嚴重威脅著婦女的生命健康[1-3]。新輔助化療具有降低腫瘤臨床分期、減少細胞耐藥性等作用，且能為乳腺癌手術患者提供更多的生存機會，在乳腺癌系統治療中的作用越來越重要[4-7]。腫瘤免疫在乳腺癌的發生和發展過程中起著重要的作用，而近期的研究[8-11]同時表明，腫瘤微環境的改變對患者化療后的預后有著顯著的影響。此外，有研究[12-13]證實，新輔助化療能通過調節直腸腫瘤的 T 細胞水平來促進免疫功能的好轉，達到抑制腫瘤細胞增殖的目的。然而，目前國內關于新輔助化療在調節乳腺癌免疫功能方面的研究并不多見，本研究擬通過探討新輔助化療對乳腺癌患者 T 淋巴細胞亞群及自然殺傷細胞（NK 細胞）的影響，以期為乳腺癌新輔助化療的臨床應用提供免疫學依據。
1 資料和方法
1.1 臨床資料
本研究為前瞻性病例對照研究，其中病例組納入標準：① 經穿刺活檢病理學檢查診斷為乳腺浸潤性導管癌；② 術前卡氏評分（Karnofsky performance status，KPS）≥70 分；③ 初診患者，既往未接受任何放化療措施；④ 化療前行相關檢查未發現遠處轉移；⑤ 腫瘤分期為 T2～4N0～2M0 期；⑥ 能耐受至少 3 個周期的新輔助化療。排除標準：① 出現遠處轉移；② 合并其他惡性腫瘤或既往有其他惡性腫瘤病史；③ 合并心、肝、肺、腎等實質臟器功能障礙；④ 處于妊娠期或哺乳期。前瞻性收集 2015 年 5 月至 2017 年 1 月期間于筆者所在醫院診治并接受新輔助化療的乳腺癌患者 68 例，為病例組。68 例患者均為女性，年齡 32～67 歲、（45.46±11.25）歲；腫瘤 TNM 分期：Ⅱ期 38 例，Ⅲ期 30 例；病理學類型：Luminal A 型 24 例；Luminal B 型 21 例，人類表皮生長因子受體-2（Her-2）陽性 14 例，三陰性乳腺癌 9 例；腫瘤部位：左側 36 例，右側 32 例。同時選取同期在筆者所在醫院行健康體檢的 68 例健康女性作為健康對照組（匹配年齡和性別），其中年齡為 32～65 歲、（44.73±10.18）歲。2 組的年齡比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究所有入選研究對象均獲得知情同意，且本研究通過醫院倫理委員會討論通過。
1.2 新輔助化療方案
所有患者術前采用 FEC 方案（氟尿嘧啶、表柔比星和環磷酰胺）進行新輔助化療。具體如下：鹽酸表柔比星注射液（批準文號：H20093251，海正輝瑞制藥有限公司）80 mg/m2，于第 1 天靜脈滴注；注射用環磷酰胺（批準文號：H20093393，海正輝瑞制藥有限公司）600 mg/m2，于第 1 天靜脈滴注；注射用氟尿嘧啶〔批準文號：H20050465，費森尤斯卡比（武漢）醫藥有限公司〕500 mg/m2，于第 1 至第 3 天以微量泵泵入。每 21 天為 1 個化療周期，預計進行 4 個周期的新輔助化療。化療過程中如出現白細胞和中性粒細胞計數下降則予以粒細胞集落刺激因子等藥物適當緩解骨髓抑制，待骨髓抑制緩解后繼續給予相關化療用藥。病例組患者如在新輔助化療期間出現病灶進展則直接進行手術，手術方式根據患者情況綜合考慮，術后改用酒石酸長春瑞濱注射液（批準文號：H20140084，Pierre Fabre Medicament Production-Aquitaine Pharm International 公司，法國）25 mg/m2，于術后第 1 天至第 8 天靜脈滴注；卡培他濱片（批準文號：H20073024，上海羅氏制藥有限公司）1 000 mg/m2，于術后第 1 天到第 4 天口服。每 21 天為 1 個化療周期。如在新輔助化療過程中未出現病灶進展則在最后 1 個新輔助化療周期結束后 14～21 d 進行手術，并于術后 7～14 d 開始進行術后化療。病例組患者術前及術后共化療 6 個周期，術后按常規行放療[14]。
1.3 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例的檢測
所有入選病例均在化療前和化療 4 個周期后、手術前在清晨空腹下采集外周靜脈血于試管內，對照組在入選時（分析時統稱為化療前）及與病例組患者間隔相同時間后（分析時統稱為化療后）采用同樣方法采集血樣，分別給予抗 CD3 單抗-PC5、抗 CD4 單抗-異硫氰酸熒光素（FITC）、抗 CD8 單抗-藻紅蛋白（PE）、抗 CD16 單抗及 CD56 單抗-PE（均購于美國貝克曼庫爾特公司），對抗體進行標記，然后采用 Beckman-CoulterXL 流式細胞儀（Beckman-CoulterXL，MCL）進行 T 細胞亞群和 NK 細胞比例的檢測。
1.4 療效評價
采用腫瘤“最大徑”測量法，評價的指標包括觸診乳腺腫瘤的最大徑以及同側腋窩腫大淋巴結的最大徑。新輔助化療前乳腺腫瘤的最大徑以及同側腋窩腫大淋巴結的最大徑之和為“腫瘤病灶的基線大小”，每個新輔助化療周期前以及手術前均對前次化療的療效進行評價。療效的評價采用實體瘤療效評價標準[6]，患側乳房未觸及腫塊且腋窩也未觸及腫大的淋巴結為完全緩解，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑縮小超過 30% 且未達到完全緩解標準為部分緩解，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑增大超過 20% 為疾病進展，化療后乳腺腫瘤的原發病灶最大徑縮小低于 30% 或出現增大但未超過 20% 視為疾病穩定，全部病例均由同一具有豐富經驗的副主任醫師進行評價（對研究內容不知情）。定義化療有效為完全緩解+部分緩解，化療無效為病情穩定+病情進展。化療結束后根據療效評價結果將病例組分為有效組和無效組。
1.5 統計學方法
所有數據采用 SPSS 20.0 軟件行統計學分析，計量資料以均數±標準差（
±s）表示，組間差異比較采用配對 t 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 2 組的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
化療前與對照組比較，病例組患者的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均較對照組低（P<0.05），CD8+T 細胞比例較對照組高（P<0.05），但病例組患者的 CD3+T 細胞比例與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。同組內與化療前比較，病例組患者化療后 CD8+T 細胞比例降低，CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均升高（P<0.05），但化療后的 CD3+T 細胞比例與化療前比較差異無統計學意義（P>0.05）；對照組化療前后的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T細胞比值及 NK 細胞比例比較差異均無統計學意義（P>0.05）。病例組和對照組化療前后的 CD4+T 細胞比例的差值、CD8+T 細胞比例的差值、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值的差值及 NK 細胞比例的差值比較差異均有統計學意義（P<0.05），病例組的改變值大于對照組，但 2 組化療前后的 CD3+T 細胞比例的差值比較差異無統計學意義（P>0.05）。具體見表 1。
表1
2 組新輔助化療前后的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例
2.2 不同療效患者的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
68 例乳腺癌患者經過 4 個周期新輔助化療后，療效評價為有效 44 例（有效組），療效評價為無效 24 例（無效組）。化療前無效組和有效組患者的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例比較差異均無統計學意義（P>0.05）。同組內與化療前比較，有效組患者化療后 CD8+T 細胞比例降低，CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例均升高（P<0.05），但化療后的 CD3+T 細胞比例與化療前比較差異無統計學意義（P>0.05）；對照組化療前后的 CD3+T 細胞比例、CD4+T 細胞比例、CD8+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例的差異均無統計學意義（P>0.05）。有效組和無效組患者化療前后的 CD4+T 細胞比例的差值、CD8+T 細胞比例的差值、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值的差值及 NK 細胞比例的差值比較差異均有統計學意義（P<0.05），有效組的改變值大于對照組，但 2 組化療前后的 CD3+T 細胞比例的差值比較差異無統計學意義（P>0.05）。具體見表 2。
表2
不同療效患者的 T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞比例比較
3 討論
新輔助化療系指在手術前應用的系統性細胞毒性藥物治療，最初一般應用在手術無法切除或需要保乳的局部晚期乳腺癌患者，但是隨著對乳腺癌研究的不斷深入，新輔助化療的適應證正逐步擴大，有望進一步改善患者的生存[15-16]。目前臨床分期為ⅡA 期、ⅡB 期以及ⅢA 期的乳腺癌患者均是新輔助化療的適應證，而且對于非常年輕的乳腺癌患者進行新輔助化療能夠獲得更高的病理緩解率[3]。乳腺癌患者多數存在細胞免疫功能紊亂，而且腫瘤負荷越大，免疫功能下降越明顯。T 淋巴細胞和 NK 細胞是抗腫瘤免疫過程中最重要的免疫細胞之一，T 淋巴細胞亞群及 NK 細胞的數量和比例與腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移均密切相關[17-19]。關于新輔助化療對乳腺癌患者腫瘤免疫狀態的改善作用，目前相關研究并不多見，本研究重點探討了新輔助化療對乳腺癌患者免疫狀態的影響。
T 淋巴細胞是重要的一種免疫細胞，根據不同的表面標志物和功能，可分為 CD3+T 細胞、CD4+T 細胞以及 CD8+T 細胞亞群。CD3+T 細胞數量代表著 T 細胞總數，CD4+T 細胞代表著輔助性 T 細胞，CD8+T 細胞代表著細胞毒性 T 細胞，CD4+T 細胞比例的降低和 CD8+T 細胞比例的升高提示細胞免疫功能下降。CD4+T 細胞和 CD8+T 細胞相互影響、相互制約，使機體處于一種相對平衡的狀態，其比值是反映免疫調節功能的一項指標，兩者比例的失調可導致免疫功能紊亂[20-21]。NK 細胞可通過直接殺傷腫瘤細胞及病毒感染細胞來進行免疫調節，而對正常組織無殺傷作用，是抗腫瘤的第一道防線。本研究結果表明，腫瘤細胞可能會產生一些抑制免疫功能的細胞因子，使 CD4+T 細胞數量減少，而 CD8+T 細胞的數量及活性反而升高。王文慧等[22]的研究結果表明，不同臨床分期乳腺癌患者的 T 淋巴細胞亞群存在一定的差異，Ⅱ期和Ⅲ期患者外周血中的 CD3+T 細胞和 CD4+T 細胞比例低于Ⅰ期患者，提示腫瘤細胞對患者免疫功能的抑制可能會隨著腫瘤負荷的增加而變得越發明顯。這在側面說明免疫功能的抑制程度能夠反映腫瘤的進展情況，因此對乳腺癌免疫抑制的改善，有可能對乳腺癌的治療效果發揮一定的作用。本研究結果即顯示：與健康人群比較，乳腺癌患者的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值及 NK 細胞比例低，CD8+T 細胞比例高。
本研究結果還表明，新輔助化療能夠提高乳腺癌患者外周血中的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值以及 NK 細胞比例，而降低 CD8+T 細胞比例，其化療前后的差值均大于對照組。此外，通過分析對新輔助化療不同反應乳腺癌患者的 T 細胞亞群和 NK 細胞，結果表明，化療有效的患者其外周血中的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值、CD8+T 細胞比例以及 NK 細胞比例在化療后均有所改善，但是化療無效者上述指標并無顯著改善，且化療有效患者化療前后的 CD4+T 細胞比例、CD4+T 細胞/CD8+T 細胞比值、CD8+T 細胞比例以及 NK 細胞比例的差值均大于化療無效者。從這一點可說明，新輔助化療對于提高乳腺癌患者的免疫功能有一定的作用[23-24]。推測其可能的機制為：新輔助化療通過藥物的細胞毒性作用殺滅腫瘤細胞，進一步減輕患者的腫瘤負荷。腫瘤負荷的減少可使抑制免疫功能的細胞因子的分泌進一步減少，從而使免疫功能得到一定程度地恢復以及增強[5]。由于評估新輔助化療是否有效的標準在于腫瘤體積是否縮小，等同于腫瘤負荷是否減少，這也可以解釋本組為何化療有效患者的免疫功能指標有改善，而化療無效的患者免疫功能指標并未改善。此外，有文獻[25]報道，新輔助化療還能對乳腺癌組織的微血管再生發揮一定的抑制作用，從而改善腫瘤的微環境狀態，改善腫瘤免疫。然而腫瘤免疫是一個極其復雜的過程，因此是否還存在其他的免疫調節機制，目前仍不明確。
綜上所述，乳腺癌患者體內的 CD4+T 細胞比例和 NK 細胞比例較低，而 CD8+T 細胞比例較高，有效的新輔助化療有助于提高患者的 CD4+T 細胞比例和 NK 細胞比例，并降低 CD8+T 細胞比例，改善患者的免疫功能。但是由于本研究未能對患者進行長期隨訪，因此并未能證實新輔助化療這一改善免疫功能的作用是否同樣能改善遠期預后，因此后期仍需要進一步研究。
