5HRE強化的肝癌靶向性自殺基因載體的構建_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

周培華 ¹ , 孫學軍 ¹ , 王燕 ² , 祿韶英 ¹

1.西安交通大學醫學院第一附屬醫院普通外科（西安710061）;;
2.第四軍醫大學唐都醫院疼痛研究所（西安710038）;

關鍵詞：

缺氧反應元件肝癌自殺基因

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目的　設計并構建5個拷貝的缺氧反應元件（5HRE）增強子和甲胎蛋白啟動子（AFPp）聯合調控的自殺基因硝基還原酶（NTR）真核表達載體。
方法　設計引物作重疊PCR從大腸桿菌中克隆融合有6個組胺酸基因標簽（6his-tag）的自殺基因NTR，用合成的HRE寡核苷酸單鏈退火，多次重組克隆構建5HRE。將NTR基因、5HRE和AFPp與酶切去除了巨細胞病毒即刻早期啟動子（Pcmv ie）的pIRES2-EGFP載體重組，構建攜帶5HRE、AFPp和NTR基因的真核表達載體pIRES2-EGFP-5HRE-AFPp-NTR。
結果　成功克隆了融合6his-tag的NTR基因，NTR基因與Genbank公布的序列一致。成功合成了5HRE，測序與預期相符。將上述片段和AFPp重組到去除了Pcmv ie的pIRES2-EGFP載體上，酶切鑒定和DNA序列分析無誤。
結論　成功構建了真核表達載體pIRES2-EGFP-5HRE-AFPp-NTR，為下一步的體外實驗奠定了基礎。

引用本文： 周培華,孫學軍,王燕,祿韶英. 5HRE強化的肝癌靶向性自殺基因載體的構建. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007, 14(2): 163-167. doi: 復制

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