脂質體轉染survivin反義寡核苷酸對人胰腺癌細胞凋亡的影響_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

劉海威 ¹ , 程樂 ¹ , 吳非 ¹ , 厲成杰 ¹ , 陳維平 ² , 劉志明 ¹

1.廣西醫科大學第一附屬醫院胃腸外科（南寧 530021);;
2.廣西醫科大學基礎醫學院組織胚胎學教研室（南寧 530021);

關鍵詞：

胰腺癌 survivin 反義寡核苷酸細胞凋亡

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目的　探討survivin反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide，ASODN)對人胰腺癌細胞PANC-1增殖的影響。
方法　設計并合成特異性靶向ASODN及正義寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotides，SODN)。ASODN經FAM標記,以陽離子脂質體為載體轉染至體外培養的PANC-1細胞中（ASODN組），另設空白對照組（正常培養的細胞）、脂質體空轉染組（脂質體轉染的為正常的培養基）及SODN組作為對照組。采用流式細胞儀(flow cytometry，FCM)測轉染率,依次篩選最佳細胞接種數量、ASODN濃度和脂質體的量；熒光顯微鏡觀察轉染后的細胞； MTT法測定轉染后細胞的抑制率；透射電鏡觀察轉染后細胞的超微結構變化；吖叮橙(AO)與溴化乙啶(EB)染色觀察轉染后細胞凋亡的形態學改變； DNA凝膠電泳觀察轉染后細胞凋亡情況； FCM測轉染后細胞凋亡率及細胞周期；免疫組織化學技術檢測轉染后survivin蛋白的表達。
結果　①ASODN濃度為50、100、150、200、250、400、600及800 nmol/L時,轉染率分別為31.9%、37.4%、41.4%、52.6%、24.2%、11.4%、16.1%和　15.5%；接種細胞數量為2×104 、2×105及2×106個/ 孔時，轉染率分別為12.0%、50.8%和11.2%；轉染所用的脂質體量為2、3及4 μl時,轉染率分別為58.8%、34.0%和23.6%。②轉染ASODN后熒光顯微鏡發現轉染后細胞之間空隙加大，形態變圓，貼壁細胞生長較少，部分漂浮于培養液中。③ASODN組24、36及48 h后細胞抑制率明顯高于各對照組（P lt;0.05），隨著時間延長，細胞抑制率增高(P lt;0.05)。④ASODN組電泳圖上凋亡細胞呈明顯的“梯狀”條帶。⑤AO與EB染色觀察ASODN組細胞出現凋亡的形態學改變，其核染色質均高度聚集或核染色呈新月形聚集于核膜一邊，核仁消失。⑥ASODN組細胞凋亡率為（38.10±3.4）%，明顯高于SODN組的(4.16±1.7)% (P lt;0.05)。⑦ASODN組細胞周期阻滯于G2／M期。⑧轉染后ASODN組survivin蛋白表達明顯低于各對照組（P lt;0.05）。
結論　survivin ASODN轉染至胰腺癌細胞最佳轉染條件為接種細胞數量為2×105個/孔，ASODN的濃度為200 nmol/L，脂質體的量為2 μl； survivin ASODN能明顯下調survivin蛋白的表達，抑制胰腺癌PANC-1細胞的增殖，并誘導細胞凋亡。

引用本文： 劉海威,程樂,吳非,厲成杰,陳維平,劉志明. 脂質體轉染survivin反義寡核苷酸對人胰腺癌細胞凋亡的影響. 中國普外基礎與臨床雜志, 2010, 17(10): 1056-1061. doi: 復制

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