大鼠肝卵圓細胞增殖模型的建立和體外分離的實驗研究△_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

黃欽賢 ,  李海洋 , 胡毅 , 宋建寧 , 董標 , 曹坤

貴陽醫學院附屬醫院肝膽外科（貴州貴陽 550004）;

關鍵詞：

肝卵圓細胞 2-乙酰氨基芴增殖模型分離體外大鼠

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目的　探討以2-乙酰氨基芴（2-AFF）灌胃與2/3肝切除法聯合運用建立大鼠肝卵圓細胞增殖模型的適宜劑量，并探討肝卵圓細胞的體外分離培養方法。
方法　將174只Wistar大鼠隨機分為4個實驗組（各30只）、未處理組（24只）和生理鹽水組（30只）。4個實驗組大鼠分別給予5、10、15及20mg/（kg ? d） 2-AAF灌胃（分別對應第1、2、3及4實驗組），于第5天行2/3肝切除，術后繼續灌胃至處死大鼠；生理鹽水組大鼠以生理鹽水灌胃，其余操作同實驗組；未處理組大鼠不做任何處理。6組分別于肝切除術后第4、8、12及16天各隨機處死6只大鼠，取肝組織行HE染色和免疫組化染色，觀察肝卵圓細胞的增殖情況〔第4天時同時檢測血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平〕；并采用二步膠原酶灌注結合Percoll密度梯度離心法對大鼠肝卵圓細胞進行分離和培養。
結果　肝切除術后第4天，未處理組、生理鹽水組、第1、2、3及4實驗組大鼠的存活率分別為100% （24/24）、93% （28/30）、93% （28/30）、90% （27/30）、90% （27/30）及80% （24/30）。肝切除后第4天，與未處理組及生理鹽水組比較，第2、3和4實驗組大鼠的血清ALT及AST水平均升高（P＜0.05）。HE染色結果顯示，第2、3及4實驗組大鼠的肝組織均出現不同程度的肝損傷，其中第3和第4實驗組均可見明顯的肝卵圓細胞增殖反應；免疫組化染色結果顯示，第2、3及4實驗組卵圓細胞標志6 （OV-6）表達陽性細胞數在術后第4、8、及12天，隨2-AAF劑量的增加逐漸升高，與2-AAF間呈劑量-效應關系（P＜0.05）。大鼠肝卵圓細胞進行體外分離和培養后，經OV-6免疫組化染色鑒定，有80%的細胞表達呈陽性。
結論　聯合運用15 mg/（kg ? d） 2-AFF灌胃加2/3肝切除，于術后第12天，有效誘導了肝卵圓細胞的增殖，且造模大鼠的耐受性較好、死亡率低。采用二步膠原酶灌注結合Percoll密度梯度離心法較成功地分離出了大鼠肝卵圓細胞。

引用本文： 黃欽賢,李海洋,胡毅,宋建寧,董標,曹坤. 大鼠肝卵圓細胞增殖模型的建立和體外分離的實驗研究△. 中國普外基礎與臨床雜志, 2013, 20(10): 1100-1105. doi: 復制

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