目的 構建腦源性神經營養因子（BDNF）綠色熒光蛋白(GFP)融合表達質粒，觀察其融合蛋白的特性。方法 將BDNF cDNA片段插入pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO 真核表達質粒，使其與GFP同處一個閱讀框架中，測序鑒定后，轉染培養的雪旺細胞，用免疫組織化學和蛋白質印跡(Western botting)觀察外源性目的蛋白的表達情況，并用該質粒活體轉染視神經切斷的大鼠模型，觀察所表達外源性蛋白的神經保護作用。結果 測序證實質粒構建成功。Western botting結果顯示，BDNF-GFP融合蛋白表達一相對分子質量為41 times;103大小條帶。熒光顯微鏡下可見BDNF-GFP轉染的細胞發出綠色熒光，免疫組織化學染色后，可見綠色熒光與紅色熒光完全重合。轉染BDNF-GFP質粒和GFP質粒的大鼠視神經切斷術后7 d存活視網膜神經節細胞（RGC）分別為（1201 plusmn;286）、（482 plusmn;151）個 /mm2，存活百分比分別為（51.39 plusmn;12.24）%和（20.62 plusmn;6.46）%；28 d時存活的RGC分別為（715 plusmn;71）、（112 plusmn;24）個/mm2，存活百分比分別為（30.59 plusmn;3.04）%和（4.79 plusmn;1.03）%。兩組存活百分比比較，差異有統計學意義（t=3.144，11.378；P＜0.01）。結論 BDNF-GFP融合表達載體可以轉錄翻譯為一融合蛋白，該蛋白可自發綠色熒光，并具有BDNF的生物學活性。
引用本文： 方媛,樊嘉雯,莫曉芬,孫興懷,郭文毅,孔德升,馬端,田潔. 腦源性神經營養因子-綠色熒光蛋白融合基因載體的構建、鑒定及初步應用研究. 中華眼底病雜志, 2009, 25(5): 372-375. doi: 復制