目的 　構建針對大鼠opticin表達基因(OPTC)的特異性小發夾RNA(shRNA)真核表達質粒。方法 　用DNA重組技術將針對大鼠OPTC基因不同位點所設計的4個shRNA序列克隆到真核表達質粒中。根據構建的4對質粒設置shRNA-1組、shRNA-2組、shRNA-3組、shRNA-4組，同時只加轉染試劑不加質粒的細胞設為正常對照組，轉染陰性質粒的細胞為陰性對照組。用脂質體lipofectimine 2000將4個shRNA質粒分別轉染至體外培養的原代大鼠睫狀體非色素上皮(NPE)細胞，轉染后采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和蛋白免疫印跡法（Western blot）分別檢測OPTC基因的mRNA及opticin蛋白的相對表達量和抑制率。結果 　各組質粒轉染大鼠NPE細胞后，shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4組細胞OPTC mRNA相對表達較正常對照組均明顯下調(F=10.239，P＝0.000),各組OPTC mRNA抑制率為85.7%、62.87%、54.87%、48.77%。各質粒干擾組細胞opticin蛋白表達較正常組均有不同程度下降(F=17.870，P=0.000)，各組opticin蛋白抑制率為78.7%、34.6%、31.1%、16.8%。結論 　OPTC基因干擾質粒shRNA-1可以有效抑制大鼠睫狀體NPE細胞opticin的表達。

引用本文： 馬進,朱鐵培,張倩茹. 大鼠opticin表達基因小發夾RNA真核表達質粒的構建及鑒定. 中華眼底病雜志, 2011, 27(1): 60-64. doi: 復制