目的 利用抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH)技術,比較瘢痕疙瘩與正常皮膚組織之間基因表達差異,篩選瘢痕疙瘩特有的差異表達基因片段,為揭示瘢痕疙瘩的病因提供實驗依據。方法 提取瘢痕疙瘩與正常皮膚組織細胞mRNA,逆轉錄成cDNA。以瘢痕疙瘩cDNA為檢測子,正常皮膚組織細胞cDNA為驅動子,選擇四堿基內切酶RsaⅠ將cDNA酶切;連接特殊設計的接頭進行消減雜交和PCR反應,得到消減混合物,與T載體連接,轉化DH5α感受態細菌,建立差異消減文庫。Southern雜交篩選鑒定差異基因,進行測序和同源分析。結果 經SSH篩選、Southern雜交鑒定得到13個瘢痕疙瘩差異表達基因,其中已知功能的基因11個,如TA結合因子1、E4基因轉錄因子1、ephrin B2型受體基因、血小板生長因子受體基因等;有與腫瘤發生有關的基因,如G抗原7基因等;未知功能基因2個。結論 篩選得到的瘢痕疙瘩差異表達基因,對了解瘢痕疙瘩發生發展的病因學基礎和指導臨床治療具有重要意義。
引用本文: 羅勇,高建華,趙菲,張寶. 利用抑制消減雜交篩選瘢痕疙瘩差異表達基因. 中國修復重建外科雜志, 2006, 20(5): 495-498. doi: 復制