【摘 要】 目的 探索由人表皮干細胞、成纖維細胞與纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚修復全層皮膚缺損的可行性。 方法 將人全層皮膚采用胰蛋白酶消化法使表皮干細胞和真皮成纖維細胞分離后，分別在無血清培養基中行原代及傳代培養。將體外擴增培養至第3、4 代的表皮干細胞（5×104/mL）和真皮成纖維細胞（1×104/mL）共0.5 mL 與纖維蛋白支架（0.5 mL）混合凝固構建組織工程皮膚。取4 ～ 5 周齡雄性裸鼠45 只，體重19.5 ～ 20.3 g，平均20.0 g，制備背部全層皮膚缺損模型。隨機分為5 組，每組9 只，分別為空白對照組（C 組），創面僅覆蓋凡士林油紗，自然愈合；單純支架組（F 組），創面移植無細胞的纖維蛋白支架；表皮支架組（S 組），創面移植含有表皮干細胞的纖維蛋白支架復合物；成纖維細胞支架組（Fb 組），創面移植含有成纖維細胞的纖維蛋白支架復合物；組織工程皮膚組（T 組），創面移植組織工程皮膚。術前及術后1、3、6、8 周行全身及移植部位大體觀察；移植后3、6、8 周，取材行組織學、免疫組織化學及掃描電鏡觀察。 結 果 細胞培養4 周后，表皮干細胞培養皿內可見圓形細胞，在加有BrdU 的培養液中培養6 d 后可見BrdU 染色陽性細胞；成纖維細胞培養皿內可見梭形細胞。構建的組織工程皮膚可見CK19 免疫熒光染色陽性細胞、Nestin 染色陽性細胞。移植后T 組新生皮膚較其余各組生長快、瘢痕輕。術后6 周，C、F、S、Fb 及T 組皮膚厚度分別為：（0.460 ± 0.049）、（0.480 ± 0.055）、（0.540 ± 0.043）、（0.510 ± 0.032）及（0.660 ± 0.047）mm，T 組明顯厚于其余各組，且差異有統計學意義（P lt; 0.05）。術后3、6、8 周，HE 染色及掃描電鏡示，T 組新生表皮層數及真皮成纖維細胞、血管數量均多于其余各組，且T 組真皮血管及膠原纖維排列均較其余各組整齊；術后3 周，Ⅳ型膠原免疫組織化學染色顯示，T 組已形成連續的染色帶，而其余各組均不連續；術后6 周，CK14 免疫組織化學染色顯示，T 組可見陽性細胞，其余各組均未見。 結論 用表皮干細胞、成纖維細胞及纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚移植后能使創面迅速愈合，可望成為一種較理想的組織工程皮膚。
引用本文： 張琮,王乃佐,陳輝,周光峰,張國安,韓斌. 組織工程皮膚修復全層皮膚缺損的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(2): 196-201. doi: 復制