陳渝 1,2 , 王大勇 2 , 王祖貴 2 , 翁政 2 , 鄧忠良 1
  • 1 重慶醫科大學附屬第二醫院骨科(重慶,400010);;
  • 2 重慶市第九人民醫院骨科;
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目的 構建攜帶NGF 基因序列的5 型腺病毒(adenovirus expressing NGF,Ad-NGF),探討其在促進大鼠坐骨神經神修復與再生中的作用。 方法 將NGF 基因序列克隆至5 型腺病毒穿梭質粒pCA13,并在HEK-293 細胞中包裝得到重組腺病毒Ad-NGF 并測序鑒定。雄性SD 大鼠32 只,體重180 ~ 200 g,隨機分為4 組(n=8)。切斷大鼠右側坐骨神經并縫合,建立坐骨神經損傷模型。模型制備后,A 組及C 組分別于術側腓腸肌注射Ad-NGF 及不攜帶NGF基因序列的空腺病毒載體,1 × 108 PFU/ 次,隔天1 次,共3 次; B 組及D 組分別于術側腓腸肌注射NGF(200 U/d)及生理鹽水(100 μL/d),連續3 周。術后第31 天檢測坐骨神經功能指數、神經電生理檢測,取吻合處及其遠端1 cm 坐骨神經,采用RT-PCR 及Western blot 技術定量檢測大鼠損傷坐骨神經中NGF mRNA 及蛋白的表達水平,并行組織學及免疫組織化學、透射電鏡觀察。 結果 實驗成功構建了攜帶NGF 基因序列的5 型腺病毒Ad-NGF。A 組坐骨神經功能指數、神經傳導速度、誘發電位波幅及潛伏期與B、C、D 組比較,差異均有統計學意義(P  lt; 0.05);B、C、D 組間比較差異無統計學意義(P  gt; 0.05)。RT-PCR 及Western blot 檢測顯示,A 組NGF mRNA 及蛋白表達量與B、C、D 組比較,差異均有統計學意義(P  lt; 0.05);B、C、D 組間比較差異無統計學意義(P  gt; 0.05)。組織學及免疫組織化學觀察示A 組坐骨神經再生情況明顯優于其他組。透射電鏡觀察示A 組坐骨神經橫切面軸突直徑、髓鞘厚度、神經纖維個數與B、C、D 組比較,差異有統計學意義(P  lt; 0.05);B、C、D 組間比較差異無統計學意義(P  gt; 0.05)。 結論 Ad-NGF 提供了一種在周圍神經損傷局部獲得大量NGF 的新方法,且可有效促進大鼠坐骨神經損傷后的修復。

引用本文: 陳渝,王大勇,王祖貴,翁政,鄧忠良. 攜帶NGF 基因腺病毒治療大鼠坐骨神經損傷的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(8): 947-953. doi: 復制