目的 探討應用生長分化因子5（growth differentiation factor 5，GDF-5）誘導脂肪干細胞（adiposederived stem cells，ADSCs）成軟骨細胞分化的可能性及效果。 方法 3 月齡清潔級健康日本大耳白兔6 只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg。取兔皮下脂肪4 ～ 6 mL，采用膠原酶消化離心貼壁培養法培養ADSCs，取第3 代細胞進行實驗。波形蛋白免疫組織化學和CD44、CD49d、CD106 免疫熒光染色鑒定ADSCs。調整細胞密度為1 × 106 個/mL，分別用普通細胞培養液以及含0、10 、100 ng/mL GDF-5 的軟骨細胞誘導液誘導培養。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態變化；MTT 法檢測細胞增殖情況；RT-PCR 檢測誘導細胞Col Ⅱ和蛋白多糖mRNA 的表達；免疫組織化學、阿利新藍染色、甲苯胺藍染色和Western blot 法檢測誘導細胞Col Ⅱ和蛋白多糖表達。 結果 ADSCs 呈小圓形、梭形、多角形分布，表面抗原標志CD44、CD49d 呈陽性表達，CD106 和波形蛋白呈陰性表達。100 ng/mL GDF-5 誘導的ADSCs 呈圓形或類圓形，且細胞增殖旺盛。普通培養液和0、10、100 ng/mL GDF-5 成軟骨細胞誘導培養后7 d，Col Ⅱ、蛋白多糖 mRNA 表達均呈濃度依賴性增加，除0、10 ng/mL GDF-5 兩組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）外，其余各組差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；100 ng/ mL GDF-5 誘導培養14 d，Col Ⅱ、蛋白多糖mRNA 以及蛋白表達達高峰，阿利新藍、甲苯胺藍染色以及Col Ⅱ免疫組織化學染色均呈陽性。 結論 經一定濃度的GDF-5 誘導的ADSCs，Col Ⅱ和蛋白多糖表達明顯增加，具有軟骨細胞的部分生物學功能。
引用本文： 劉振寧,賈長青,韓長旭,梁峰,王俊豐,柏樹令,佟浩. 生長分化因子5 誘導兔脂肪干細胞成軟骨細胞分化的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(4): 483-489. doi: 復制