目的 通過體外實驗探討hVEGF165 和hBMP-7 共表達重組腺相關病毒載體（recombinant adenoassociated virus，rAAV）體外生物學活性，為體內應用其進行骨壞死的基因治療奠定理論基礎。 方法 分別采用rAAVhVEGF165-內部核糖體進入位點序列（internal ribosome entry site，IRES）- hBMP-7（實驗組）、綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記的rAAV-IRES-GFP（對照組）轉染體外培養的第3 代兔BMSCs，于轉染后1、2、3、7 及14 d 應用ELISA 法及轉染后14 d 應用Western blot 法鑒定兩組hVEGF165 和hBMP-7 表達；轉染后14 d 行細胞免疫熒光染色觀察hVEGF165 和hBMP-7 表達一致性。應用第3 代人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）管狀血管形成實驗檢測hVEGF165 蛋白活性。取第3 代BMSCs 行誘導成骨實驗，Gomori 鈣鈷法ALP 染色及茜素紅法鈣鹽染色檢測hBMP-7 蛋白活性。 結果 ELISA 檢測示隨轉染時間延長，兩組hVEGF165 和hBMP-7 表達逐漸升高；實驗組各時間點hVEGF165 和hBMP-7 表達量均明顯高于對照組（P lt; 0.05）。Western blot 檢測示實驗組可見hVEGF165 和hBMP-7表達，對照組未見陽性表達。細胞免疫熒光染色觀察示實驗組hVEGF165 和hBMP-7 染色呈陽性，表達部位和強度具有較好一致性；對照組未見陽性表達。HUVEC 管狀血管形成實驗示實驗組HUVEC 拉長變形、出芽且相互交聯成管狀樣結構；與對照組相比，管狀血管數比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。ALP 染色見實驗組細胞出現深染顆粒，對照組細胞內淺著色；與對照組相比，礦化結節數比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 雙基因共表達rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7體外具有良好的生物學活性。
引用本文： 時志斌,樊立宏,強輝,唐一侖,王坤正,黨曉謙. hVEGF165 及hBMP-7 共表達重組腺相關病毒載體的體外生物學活性研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(4): 415-419. doi: 復制