目的 BMSCs 移植可修復椎間盤退變，但確切修復機制尚不明確。探討非接觸共培養條件下人BM SCs 對氧化應激誘導退變髓核細胞（nucleus pulposus cells，NPCs）凋亡的保護作用，了解BMSCs 移植修復椎間盤退變的可能機制。 方法 密度梯度離心聯合貼壁法分離、培養正常人BMSCs，并鑒定CD34、CD45、CD13 細胞表面分子。膠原酶消化法分離、培養人退變椎間盤NPCs，HE 染色、倒置相差顯微鏡觀察NPCs 細胞形態，甲苯胺藍染色、免疫細胞化學染色鑒定NPCs 的類軟骨細胞表型。取第3 代BMSCs 和第1 代NPCs 按共培養體系不同分為4 組：A 組單純NPCs（1 ×106 個）培養，不行凋亡誘導；B 組BMSCs（1 × 106 個）與NPCs（1 × 106 個）共培養；C 組BMSCs（3 × 105 個）與NPCs（1 ×106 個）共培養；D 組單純NPCs（1 × 106 個）培養，行凋亡誘導。B、C、D 組分別于共培養3、7 d 加入0.1 mmol H2O2 作用20 min 誘導NPCs 凋亡。胰蛋白酶消化收集各組NPCs，行DAPI 染色觀察細胞核形態，Annexin-V/ 碘化丙啶染色、流式細胞儀計算凋亡率，半定量RT-PCR 檢測Bcl-2、Bax 基因轉錄水平，Western-blot 檢測Caspase-3 蛋白含量。 結果 成功分離并培養人BMSCs 和人退變椎間盤NPCs；BMSCs 鑒定呈CD34-、CD45-、CD13+；第1 代NPCs 呈梭形或多角形，于胞質內表達Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖。DAPI 染色示凋亡的NPCs 可見細胞核固縮；共培養3、7 d 后，B組（29.26% ± 8.90%，18.03% ± 2.25%）及C 組（37.10% ± 3.28%，13.93% ± 1.25%）細胞凋亡率均低于D 組（54.90% ± 5.97%，26.97% ± 3.10%），高于A 組（15.67% ± 1.74%，8.87% ± 0.15%），比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。半定量RT-PCR 檢測示B、D 組髓核
細胞Bcl-2 的轉錄水平提高（P lt; 0.05），Bax 的轉錄水平無顯著變化（P gt; 0.05）；Western blot 檢測示B、C 組NPCs 的Caspase-3 蛋白表達量低于D 組，高于A 組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 非接觸共培養條件下人BMSCs 可一定
程度保護氧化應激誘導的退變NPCs 凋亡，BMSCs 共培養預處理的NPCs 可能通過降低Bax/Bcl-2 的轉錄比例來增強抗
凋亡能力。
引用本文： 王鋒,吳小濤,王運濤,李果,張明. 非接觸共培養條件下人BMSCs 對氧化應激環境中退變髓核細胞凋亡的保護研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(4): 391-398. doi: 復制