目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養的人增生性瘢痕成纖維細胞有抑制膠原合成作用，擬進一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內側皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據處理方法不同，隨機分成3 組，于瘢痕移植2 周根據分組行經皮穿刺瘢痕內注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學觀察以及透射電鏡觀察；提取細胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結果 注射后6 周內17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標準，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學觀察示3 組Ⅲ型膠原表達上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達量比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達，促進瘢痕組織成熟、軟化，脂質體可促進該抑制效果。
引用本文： 袁即山,利天增,祁少海. 人Ⅰ型前膠原基因反義寡核苷酸對人增生性瘢痕裸鼠移植模型膠原合成的作用. 中國修復重建外科雜志, 2011, 25(6): 718-723. doi: 復制